【doc】紫铜消白颗粒的提取工艺研究

【doc】紫铜消白颗粒的提取研究 紫铜消白颗粒的提取工艺研究 ? 434?HeraldofMedicineVo1. 24No.5May2005 innl,5tun);SPD?10A型紫外检测器;C-R7A数据处理机; AS2060B型超声清洗器(天津特纳科学仪器公司);FA2004型 电子天平(上海精科天平). 1.2试药赤芍药材(购自湖北省中药材公司,经湖北省药品 检验所鉴定),芍药苷对照品(购自中国药品生物制品检定所), 渗漉用乙醇为医用乙醇,流动相甲醇为色谱纯,水为纯化水,其 他化学试剂均为分析纯. 2赤芍的含量测定 2.1色谱条件流动相:甲醇-纯化水(40:60);检测波长: 230rim;流速:1.0mL-min,;柱温:32~C;灵敏度:0010AUFS. 2.2标准曲线的绘制精密称定芍药苷对照品0.0012g,以 甲醇定容至50mL,制备贮备液.按色谱条件,分别进样5,8, l0,l2,l5,得峰面积.以对照品重量()为横坐标,以峰面 积(A)为纵坐标,得直线A=l381499W一70641.2,r= 0.9964.结果明,芍药苷在0.120,0.360范围内峰面积 与浓度之间呈良好的线性关系. 2.3精密度试验精密吸取芍药苷对照品贮备液l2,连续 进样6次,测得峰面积,RSD=0.3%. 2.4供试品溶液的制备及含量测定取赤芍药材(相当于生 药0.03g)置于10mL容量瓶中,加适量甲醇,超声振荡30min 使溶解充分,并以甲醇定容,经孔径为0.45m的微孔滤膜滤 过,滤液即为供试品溶液.量取供试品溶液5L进样,测得芍 药苷峰面积并计算含量. 3正交实验与结果 3.1正交实验为保证被测中药的稳定性,直接选用渗 漉提取工艺,确定乙醇浓度(A),浸泡时间(B)及流出速度(c) 3个因素,每个因素选取3个水平,以(3)正交表安排实验, 因素水平见表l,以芍药苷含量为考察指标,以直观法和方差分 析法分析所得结果. 表1影响因素水平表 3.2正交实验方法称取过筛孔内径为(850?29)筛[三 号筛]的赤芍粗粉9份,每份200g,分别用0.7倍量乙醇浸润 0.5h后均匀装入渗漉筒中,边装边压(以防产生裂隙或气泡), 装毕在顶端压一重物,按设计表加入不同浓度乙醇,在不同浸 泡时间,流出速度下渗漉提取,收集渗漉液2000mL.将渗漉 液减压回收至干,置于真空干燥箱60?干燥至恒重即得样品. 3.3结果见表2,3.由表2的极差值和表3的方差分析 结果可以看出,3种因素对芍药苷提取率的影响程度依次为A >B>C.3种因素的优化组合为A2B,c.,即50%乙醇,浸泡6 h,流出速度为2mL-min时对赤芍中芍药苷的提取最完全. 表2正交实验结果 方差来源离差平方和自由度均方和FP 注:05(2,9):4.26,Fo.0l(2,9)=8.82 3.4最佳工艺验证实验根据正交实验结果,进行验证实验, 以确保重复性和正确性.结果3批样品的芍药苷含量分别为 33.0l,31.63,31.69mg?g,,芍药苷的平均提取率为32.11 mg-g一,RSD=2.43%.表明依据本实验确定的提取工艺芍药 苷提取率稳定且含量较高,证明本实验的结果可信. 4讨论 本实验以不同溶媒浓度,不同浸泡时间,不同流速测定了 赤芍中芍药苷的提取率.方差分析表明,乙醇浓度和浸泡时间 为关键因素,流速对提取结果的影响较小.正交实验结果表 明,最佳提取工艺为A2B3c.,即50%乙醇,浸泡6h,流出速度 为2mL-min一,在此条件下赤芍中芍药苷的提取率稳定且含 量较高. 紫铜消白颗粒的提取工艺研究 周平兰,夏新华,欧阳恒,王竹鑫 (湖南中医学院1.附属第二医院药剂科,长沙410005;2.制剂教研室,长沙410004) [摘要]目的优选紫铜消白颗粒的提取工艺.方法以浸膏得率,丹参素钠及丹参酮II的含量为指标,采用. 正交实验法.结果最佳工艺为:丹参,紫草2味药材先以95%乙醇提取,浸泡时间为1.0h,-~JR2次,提取时间分别为 1.5.1.0h.其他药材加醇提后药渣合并水提,浸泡时间为0.5h,提取3次,加水量分另4为10,8,6倍,提取时间分别2?5, 2.0.1.5h.结论该工艺对紫铜消白颗粒的有效成分提取效率高,稳定性好,适合工业化生产. 医药导报2005年5月第24卷第5期?435? [关键词]紫铜消白颗粒;丹参素钠;丹参酮II;提取工艺;正交实验 [中图分类号]R282;TQ460.1[文献标识码]A[文章编号]1004-0781(2005)05-0434-03 紫铜消白颗粒由丹参,紫河车,铜绿,蒺藜,核桃仁等中药 组成,具有散风除湿,调和气血,滋益肝肾等功效,临床常用于 治疗气血不和,肝肾不足型白癜风.为优选该药的最佳提取工 艺,笔者以方中君药丹参的有效化学成分水溶性丹参素钠和脂 溶性成分丹参酮?的含量和水提后的浸膏得率为考察指标, 采用正交实验设计,对该药的提取工艺条件进行了优化. 1仪器与试药 1.1仪器Waters高效液相色谱仪(美国waters公司),包括 1525型泵,2487紫外检测器,Breeze计算机系统;FA上皿电子 天平(上海天平仪器厂);超声波清洗器(昆山市淀山湖检测仪 器厂);Zh-82A型真空干燥箱(上海精密实验设备有限公司). 1.2试药丹参酮?对照品(中国药品生物制品检定所提 供,批号:0766-9606,供含量测定用);丹参素钠对照品(中国药 品生物制品检定所提供,批号:1805-200203,供含量测定用);水 为重蒸纯化水;甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯. 2方法与结果 根据处方中药物有效成分的理化性质,笔者在本实验中确 定将丹参,紫草先用乙醇提取,将紫河车,铜绿打粉,将丹参,紫 草醇提后的药渣与蒺藜,郁金,红花等药材合并后再用纯化水 提取有效成分. 2.1醇提实验 2.1.1正交实验设计按处方组成,取丹参,紫草适量,按乙 醇浓度(A),浸泡时间(B),加入乙醇量(C),提取时间(D)4个 影响因素及水平设计的正交实验表进行乙醇提取,合并醇提 液,以丹参酮?含量为考察指标,测定丹参酮?的含量,影响 醇提结果的因素水平见表1,正交实验结果见表2,方差分析见 表3. 表1醇提影响因素水平表 2.1.2测定方法丹参酮?的含量测定采用高效液相色谱 法. 2.1.2.1色谱条件固定相:PhenomenexODS柱(250mm 4.60nlln,5Ixm);柱温:室温;流动相:甲醇-纯化水(80:20); 流速:1.0mL?min一;检测波长:270nm;理论塔板数按丹参酮 ?^峰计算应t>2000. 2.1.2.2对照品溶液的制备精密称取丹参酮?对照品10 mg,置于50mL棕色容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀.精密 量取2mL置于25mL棕色容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇 匀,即得16lag?mL.的丹参酮?对照品溶液. 【收稿日期]2004-09-16【修回日期]2004?10-21 【作者简介】周平兰(1971一),女,湖南祁东人,主管药师,学士, 主要从事中药制剂及药品质量监测工作.电话:0731—4917742. 表2醇提正交实验结果 方差来源离差平方和自由度均方F值P 注:. 05(2,2)=19.o 2.1.2.3供试品溶液的制备与测定取"2.1.1"项下醇提后 的提取液适量,以孔径为0.45m的微孔薄膜滤过,取续滤液 作为供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液适 . 量,注入高效液相色谱仪,测定峰面积,以外标法计算,即得2.1.2.4工艺条件的确定从方差分析结果可知,A,B,C,D4 个因素中,A因素对考察指标影响最明显,其他因素不明显,结 合极差分析及时间,能源,原料等因素综合考虑,可确定最佳工 艺条件为A,B:C:D.,即处方药材加95%乙醇浸泡1.0h,提取2 次,加液量分别为10,8倍,提取时间分别为1.5,1.0h,提取效 果最佳. 2.1.2.5验证实验按最佳工艺条件A,B:C:D.进行重复试验 测得丹参酮?^的含量为81.16mg,RSD=0.12%. 2.2水提实验 2.2.1正交实验设计按处方组成,取蒺藜,郁金,稀莶草,红 花等药饮片与丹参,紫草醇提后的药渣混匀,加水煎煮,合并提 取液,以浸膏得率及丹参素钠的含量为考察指标,对加水量 (E),浸泡时间(F),提取时间(G)3个影响因素设计实验.影 响因素水平见表4,正交实验结果见表5,方差分析见表6. 表4影响因素水平表 2.2.2浸膏得率的测定精密量取"2.2.1"项下的提取液25mL,置于干燥至恒重的蒸发皿中水浴上蒸干,105~C干燥3h. ? 436?HeraldofMedicineVo1.24No.5May2005 移至干燥器中,冷却30min,迅速精密称定重量,计算,即得. 表5水提正交实验结果 方差来源离差平方和自由度均方FP 注:F0.05(2,2)=19.0,F0.01(2,2)=99-0 2.2.3丹参素钠的含量测定… 2.2.3.1色谱条件固定相:PhenomenexODS柱(250mm× 4.60mm,5m);柱温:25?;流动相:甲醇-0.5%冰醋酸 (17:83);流速:1mL?min,;检测波长:280nm. 2.2.3.2对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品5.0 mg.加30%甲醇制成0.5mg?mL的溶液,即为对照品溶液. 2.2.3.3供试品溶液的制备与测定取"2.2.1"项下的提取 液100mL,置于离心管中,3000r?min离心30min,取上清液 以孔径为0.45m的微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶 液,精密吸取对照品与供试品溶液适量,注入高效液相色谱仪, 测定峰面积,计算,即得. 2.2.3.4工艺条件考察从方差分析结果可知,E,F,G3个因 素中,G因素对各指标均有影响,E因素对浸膏得率有显着影 响,F因素无明显影响,结合极差分析,结果可确定最佳工艺条 件为E:F,G,即处方药材加水浸泡0.5h,提取3次,加水量分 别为10,8,6倍,提取时间分别为2.5,2.0,1.5h. 2.2.3.5验证实验按最佳工艺条件E:F,G进行重复试验, 测得丹参素钠的含量为94.18%,RSD:0.107%,浸膏得率为 18.22%,RSD:0.717%,结果较为理想. 3讨论 紫铜消白颗粒原为片剂,组方来源于我院皮肤科欧阳恒教 授的经验方,该方由丹参,红花,紫河车,铜绿等11味中药组 成.除铜绿外,其他药物均为常用中药,铜绿主要含碱式碳酸 铜[CuCO?Cu(OH):]L2,铜离子为酪氨酸酶的重要辅基,临 床研究资料表明,用含铜的药物治疗白癜风有确切疗效.本方 经急性毒理,药理试验和长期临床使用,无毒性作用. 丹参是紫铜消白颗粒方中的君药,具有活血祛淤,抗氧化 和改善微循环的功能.丹参素钠和丹参酮?的含量测定方法 成熟,故选用其作为正交设计中的考察对象.对于水提最佳工 艺条件的确定,除根据方差分析结果和极差外,笔者在本实验 中对提取时间进行了追加率实验,同时对提取效率进行了比 较,结果表明,提取时间为6h(与提取时间为4.5h和7.5h比 较),各提取效率均>90%,而提取时间为4.5h时,丹参素钠的 提取率<60%,从省时,节能,节省原料的角度考虑,提取时间 为6h较佳,在此条件下其有效成分已基本提取完全,即本实验 中选定的最佳条件切实可行.丹参酮II是丹参中所含的脂溶 性有效成分之一,见光易分解,且不耐高温.故在测定丹参酮 II的含量时应注意,对照品溶液和样品溶液的制备与保存应尽 可能避光,避高温,实验时间应尽量缩短,以避免丹参酮?^的转 化分解而造成实验误差增加. [参考文献】 [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[Z].北京:化学工业出版 社.2000.附录280. [2]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社, 2001.2162. 《医药导报))2006年各期药物专栏要目 第1期心血管系统用药专栏;第5期儿科用药专栏;第9期内分泌及代谢病用药专栏; 第2期老年病用药专栏;第6期中药及天然药物专栏;第10期精神科用药专栏; 第3期抗结核病用药专栏;第7期疫苗及分子生物药物专栏;第11期泌尿系统和男科用药专栏; 第4期麻醉科用药专栏;第8期抗微生物药物专栏;第12期皮肤性病用药专栏. 若投专栏稿件,请至少在该期出版前6个月内将稿件寄来,以便及时送审和处理稿件.谢谢! <医药导报>编辑部