HPLC法测定茴拉西坦分散片的有关物质-药学论文

HPLC法测定茴拉西坦分散片的有关物质-药学论文 【摘要】目的建立茴拉西坦分散片中有关物质的检测方法。方法采用 反相高效液相色谱法，色谱柱为HypersilODS2柱(4.6mm×250mm， 5μm)，以甲醇(体积比60?40)为流动相，检测波长为285nm， 流速为1.0mL?min-1。结果茴拉西坦的最低检测限为0.21ng，且主 成分与有关杂质均能有效分离。结论本法可用于茴拉西坦分散片中有 关物质的检测。 【关键词】茴拉西坦;分散片;有关物质;高效液相色谱法 Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfortheanalyzingrelatedsubstancesinaniracetamdispersibletablets.MethodsSampleswereanalyzedonHypersilODS2column(4.6mm×250mm，5μ m).Themobilephaseconsistedofmethanolwater(60? 40).Thedetectionwavelengthwas285nmandtheflowrate1.0mL?min-1.Res ultsThedetectionlimitofaniracetamwas0.21ng,andtheprincipalcomponentscouldbewellseparatedfromtheimpurities.ConclusionThismethodwassuitableforthequalitycontrolofaniracetamdispersibletablets. Keywords:aniracetam;dispersibletablets;relatedsubstances;HPLC 茴拉西坦为γ 作用大脑系统，有促进和增强大脑记忆功能，主要用于改善脑功能、 预防和治疗脑血管疾病、老年性记忆减退所引起的精神和行为障碍。 茴拉西坦分散片收载于国家食品药品监督管理局WS1—(X—113) —2005Z，该标准未进行有关物质检查，目前也尚未见有茴拉西坦分 散片有关物质的文献报道。本文采用高效液相色谱法，对茴拉西坦分 散片有关物质进行研究，建立了有关物质的方法，该法操作简便、灵敏度高、结果准确，为制定茴拉西坦分散片质量标准提供了依据。 1仪器与试药 岛津LC2010AHT高效液相色谱仪;岛津UV2401PC紫外可见分光光度计。 茴拉西坦对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100365200401)，茴拉西坦分散片(海南A药业有限公司，批号为081102、081103、081104，规格:0.1g/片);乙腈(色谱纯)，水为超纯水。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:HypersilODS2(4.6mm×250mm，5μm);流动相:甲 (体积比60?40);流速:1.0mL?min-1;检测波长:285nm;进样量:20μL。该色谱条件下，理论板数按茴拉西坦峰计算不低于3000。取“2.2.1”项下溶液进行测定,色谱图见图1。 [PSa3431;S*2〗 图1茴拉西坦分散片的高效液相色谱图 Figure1HPLCchromatogramofofaniracetam 2.2溶液的制备 2.2.1供试品溶液(新鲜制备)取本品10片，研细，精密称取0.20g(约相当于茴拉西坦100mg)置250mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.2对照溶液精密量取供试品溶液1mL置100mL量瓶中，加流 动相稀释至刻度。 2.3测定波长选择 取茴拉西坦对照品用流动相制成每1mL中含0.01mg的对照品溶液，在400,200nm波长处收集紫外吸收光谱(见图2)，结果茴拉西坦在220nm、285nm波长处有最大吸收，考虑到基线噪音的影响，选择检测波长为285nm[3]。 2.4专属性试验 取本品1片，置250mL量瓶中，加1mol?L-1的HCl溶液1mL使崩解，加1mol?L-1的NaOH溶液1mL中和，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，作为酸破坏的供试品溶液;取本品1片，置250mL量瓶中，加1mol?L-1的NaOH溶液1mL搅拌使崩解，加1mol?L-1的HCl溶液1mL中和，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，作为碱破坏的供试品溶液;取本品1片，置250mL量瓶中，加3%H2O2溶液1mL使崩解，放置10min，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，作为氧化破坏的供试品溶液;取本品1片经4500Lx光照射10d，置250mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，作为光照破坏的供试品溶液;取本品1片，105?加热0.5h，置250mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，作为加热破坏的供试品溶液;取0.20g按处方比例配制的空白样品，置250mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，作为辅料溶液。取上述6种溶液测定，结果辅料不干扰试验，样品产生的降解杂质均能与主峰较好分离，说明本方法专属性好。色谱图见图3。 2.5检出限和定量限 在本色谱条件下，分别取茴拉西坦对照品加流动相逐级稀释，进行测定，进样20μL，按信噪比(S/N)为3?1，测得茴拉西坦的检出限为0.21ng;按信噪比(S/N)为10?1，对照溶液浓度应不低于0.70ng(定量限)。 2.6稳定性试验 取供试品溶液，分别在0、1、3、6、12h进样测定。结果供试品溶液在1h内，杂质由0.33%上升至0.37%，3h内上升至0.49%，6h内上升至0.62%，12h内上升至0.79%，表明供试品溶液不够稳定，应新鲜制备。 2.7样品的测定 按“2.2“项操作，分别制备供试品溶液及对照溶液。量取对照溶液20μL注入高效液相色谱仪，调节仪器的灵敏度，使主成分峰的峰高为满量程的20%,25%，准确量取此2种溶液各20μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍，以自身对照法[1]检测样品的有关物质，结果见表1。 表1有关物质测定结果 3讨论 3.1参考有关文献[2]，测定有关物质可采用不加校正因子的主成分自身对照法，此法是国内目前使用最多的杂质测定方法。本文采用该法测定茴拉西坦分散片的有关物质。 3.2进行专属性考察时发现，包括经酸、碱、热、强光、氧化破坏过的样品在内的各种溶液，在茴拉西坦峰保留时间为5.9min时， 相对保留时间为3.3时仍洗脱出杂质峰。因此将有关物质检查的色谱图记录时间记录至主成分峰保留时间的4倍。 3.3专属性考察中发现，本品经氧化、酸、碱破坏严重，故本品应密封。配制的供试品溶液稳定性较差，有关物质检查时供试品溶液应新鲜制备。 3.4经方法学验证，本法简便、准确，灵敏度高，可用于茴拉西坦分散片的有关物质检查。 【参考文献】 [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版二部[M].北京:化学工业出版社，2005:附录172. [2]凌大奎.有关物质及高效液相色谱测定法[J].中国药学杂志，2003，30(8):567-569. [3]娄志红，苑淑俐.HPLC法测定茴拉西坦胶囊含量[J].黑龙江医药，2006，19(5):333-334. [4]张志涛，赵怀清，李见春.茴拉西坦胶囊健康人体生物等效性与药代动力学研究[J].淮海医药，2007，25(1):1-3. [5]周俊，逢秀娟，彭炜，等.茴拉西坦微乳处方及制备工艺考察[J].沈阳药科大学学报，2008，25(9):684-689.