枯草芽孢杆菌论文抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选论文：降解大豆抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选及发酵条件

枯草芽孢杆菌论文抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选论文：降解大豆抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选及发酵条件 枯草芽孢杆菌论文抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选论文:降解 大豆抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选及发酵条件 摘要:用不同来源的,,株枯草芽孢杆菌菌株,,,,,,发酵生豆粕，筛选到1株对大豆抗原蛋白,,伴球蛋白和,,,球蛋白的降解能力均较强的,,菌株。采用,,菌株发酵生豆粕，对发酵条件进行,,值、接种量、料水比三因素三水平研究，发现在,,值为,(,，接种量为,,，料水比为,(,?,(,，,,菌株可降解,,,以上的抗原蛋白。 关键词:枯草芽孢杆菌;发酵;大豆;抗原蛋白;降解 ,;,,,,,,, ,, ,,;,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,ing ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,, ,,, ,,,,，,,,, ,,,,,,,,,，,,,,, ,,,,,,,,,, (,( ;,,,,,, ;,,,,,,; ,( ,,,, ,;,,,;, ,,, ,,;,,,,,,,，,,,,,,,, ,,,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,，,,,,, ,,,,,,， ;,,,,) ,,,,,,;,: ,,, ,,,,,,,,, , ,,,;,, ,, ,,;,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,, ,, fermentate ,,,,,,, ,,,,， ,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,, ,,,, ,,,,;,,,;, ,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,;,,,( ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,, ,,,,,,;, ,,,,;,,,, ,,,, ,,,, ,,, ,, ,,, ,(,， ,,, ,,,;,,,,,,, ,,, ,,， ,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,, ,.0?,(,， ,,, ,, ,,,,,,, ;,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,( ,,, ,,,,,: ,,;,,,,, ,,,,,,,,; ,,,,,,,,,,,,; ,,,,,,,; ,,,,,,, ,,,,,,,; ,,,,,,,,,,, 大豆粕蛋白质含量高达,,,,,,,，含有人体所必 需的,种氨基酸，为全价蛋白源，在动物饲料及人的高蛋白营养保健品中常作为优质原材料,,,。但生大豆中含有多种抗营养因子，且所含的主要蛋白质,,伴球蛋白及,,,球蛋白均为大分子蛋白质，有很强的抗原性，能激起特异的免疫应答，食用后不仅会导致血清中抗大豆免疫球蛋白,,,滴度的升高，而且会造成小肠局部发生器质性的损伤,,,。试验通过豆粕发酵试验，筛选出1株对抗原蛋白降解能力较高的枯草芽孢杆菌，最大程度地将大分子的抗原蛋白降解为小分子蛋白，从而提高豆粕的食用安全性和蛋白质的利用消化力。 ,材料与方法 ,(,试验材料 ,(,(,试剂,,,,,,;,抽提缓冲液(,(,, ,,,,,，,,值,(,)。 ,(,(,原料新鲜生豆粕(购自东海粮油)。 ,(,(,菌株及培养基枯草芽孢杆菌,,,,,,，,,,培养基(含蔗糖)。 ,(,试验方法 ,(,(,降解大豆抗原枯草芽孢杆菌的筛选 ,)试验菌种的准备。将枯草芽孢杆菌,,,,,,菌株分别接入,,,斜面活化，再分别转接入,,,液体培养 基中，在,,?摇床中培养,, ,作为液体菌种备用。 ,)豆粕发酵试验。称量豆粕,, ,，将,,,,,,菌株以,,和,,的接种量分别接入生豆粕中，加,, ,l水混合均匀。将以上混合物装入,,, ,l阔口罐头瓶，并用塑料薄膜封好，,,?恒温箱中静置发酵。 ,)发酵样品抗原蛋白残留率测定。将未发酵豆粕及,,,,,,菌株发酵的豆粕样品在,,?烘箱中烘干。每种样品各称取,(,, ,，加入,, ,l ,(,, ,,,,,的,,,,,,;,抽提缓冲液研磨匀浆,,,，修正各样品,,值为,(,，浸泡, ,后离心(转速, ,,, ,,,,,，时间,, ,,,)去渣，调节上清液,,值为,(,，离心(转速 ,, ,,, ,,,,,，时间,, ,,,)，干燥称重即为各样品中抗原蛋白的质量，抗原蛋白的残留率按下式计算: ,(,(,,,菌株的豆粕发酵条件的初步研究 ,)单因子试验。在温度为,,?，以接种量、料水比及,,值,个因素的不同水平发酵大豆粕，测定各发酵样品的抗原蛋白残留率。 ,)正交试验。在单因子试验的基础上，选取接种量、料水比及,,值各,个水平，再设计正交试验，优化发酵条 件，测定各发酵样品的抗原蛋白残留率。 ,结果与分析 ,(,降解大豆抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选结果 ,结果显示，,,，,,，,,，,,，,,菌株发酵的样品中抗原蛋白的残留率高，这些菌株降解抗原蛋白的能力较差。,,，,,，,,，,,，,,,菌株发酵的样品中在,,的接种量下，抗原蛋白的残留率很低，这些菌株降解抗原蛋白的能力较强。其中,,菌株在,,及,,的接种量下，抗原蛋白的残留率均达到最低，故,,菌株为降解大豆抗原蛋白效果最好的菌株。 ,(,,,菌株发酵条件初步研究结果 ,(,(,接种量试验结果温度为,,?，料水比为,(,?,(,，,,值为,(,条件下，不同的接种量发酵生豆粕，测得不同发酵样品中抗原蛋白的残留率见表,。根据表,，,,的接种量下，发酵样品的抗原蛋白的残留率较大，而,,,,,,的接种量下发酵样品中抗原蛋白的残留率均大大降低，且差异不明显。 ,(,(,料水比试验结果温度为,,?，接种量为,,，,,值为,(,条件下，不同的料水比发酵生豆粕，测得不同发酵样品中抗原蛋白的残留率见表,。根据表,，料水比为,(,?,(2、,(,?,(,时，发酵样品中 的抗原蛋白的残留率均较高;料水比为,(,?,(,、,(,?,(8、,(,?1(0时，发酵样品中抗原蛋白的残留率大为降低，且差异不明显。 ,(,(,,,值试验结果温度为,,?，接种量为,,，料水比为,(,?,(,时，在不同,,值下发酵生豆粕，测得不同发酵样品中抗原蛋白的残留率见表,。根据表,，,,值为,(,时发酵样品抗原蛋白的残留率最低。 ,(,(4正交试验结果接种量、料水比及,,值三因子三水平正交试验结果见表,。根据表,中极差,值大小，可以看出料水比对抗原蛋白的残留率影响最大;在,,,,,的接种量范围内，接种量对发酵样品中抗原蛋白的残留率影响较小;,,值在,(,,,(,范围内，对发酵样品中抗原蛋白的残留率影响也较小。且通过表,可直接得出，在,,值为,(,，接种量为,,，料水比为,.0?,(,时，发酵样品的抗原蛋白的残留率最小。 ,(,抗原蛋白残留率测定结果的验证 试验中抗原蛋白的残留率均为多个重复的平均值，且抗原蛋白的残留率测定结果可以用,,,,,,,,电泳结果来验证(图,)。 ,小结与讨论 大豆抗原蛋白严重影响饲喂动物的生长发育，消除大豆抗原蛋白，并增加饲料中小肽的含量，在减少对动物生长发育影响的同时，可提高饲料的价值，国内外在此方面已经有较多的研究。张智等,,,、管风波等,,,、吴晖等,,,通过大豆粕发酵产蛋白酶研究了枯草芽孢杆菌不同菌株的发酵能力;程天德等,,,的研究结果表明，利用枯草芽孢杆菌发酵大豆粕，可以降解,,(,,,的大豆蛋白质。试验筛选到1株对大豆抗原蛋白降解能力较强的菌株，通过对发酵条件的初步优化，大豆抗原蛋白的降解率可高达到,,(,,以上，优于目前文献上报道最好的抗原蛋白降解率,,(,,,的结果，具有较好的应用前景。 接种量、料水比和,,值是影响枯草芽孢杆菌降解大豆抗原蛋白的主要因素，也影响到发酵饲料产品后期干燥的工艺成本。试验对发酵条件的初步优化，发现在,,的接种量、,(,?,(,的料水比、,,值,(,的条件下，所筛选到的,,菌株对抗原蛋白的降解能力最强，接种量及,,值与文献,,,,研究的结果类似，但料水比只需达到,(,?,(,，优于他们料水比,(,?,(,的研究结果，可以减少发酵产品干燥过程中的能量损耗。 抗原蛋白的残留率是评价发酵工艺是否优异，发酵饲料 是否达到标准要求的一个重要指标，目前为止，还没有严格的标准来测定发酵豆粕饲料中抗原蛋白的含量。为了快速、准确、高通量地测定发酵饲料产品中抗原蛋白的含量，试验第一次采用抗原蛋白残留率来判断发酵结果。抗原蛋白的残留率是否有意义与抗原蛋白的提取率密切相关，因此需要找到一种大豆抗原蛋白提取率比较高的提取方法，试验采用的是文献,,,的提取方法，抗原蛋白的提取率可达,,(,,。 参考文献: ,,, 张乃锋，王中华(反刍动物小肽的营养研究进展,,,(草食家禽，,,,,(,):,,,( ,,, 冯立志(大豆中的抗营养因子,,,(饲料工业，,,,,(,):,,,,,( ,,, ,,,,, , ,， ,,,,,,,,, ,( ,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,: , ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ;,,,,;,,,,,,,,,, ,,,(, ,,,,;,,,, ;,,,，,,,,，,,:,,,,,,,,,( ,,, ,,,,,,,,, ,( ,,,,;,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,;,,,,, ,,,(,,,, , ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,， ,,,,，,:,,,,,,,( ,,, ,,,, , ,( ,,,,,;,, ,,, ;,,,,;,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,( , ,, ,,, ;,,,,,,,′ ,,;，,,,,，,,:,,,,,,,,,( ,,, 张智，朱宏亮，钮宏禹，等(响应面法优化枯草芽孢杆菌产蛋白酶的发酵条件,,,(食品科学，,,,,，,,(,,):,,,,,,,( ,,, 管风波，宋俊梅(枯草芽孢杆菌发酵豆粕产蛋白酶活性的研究,,,(饲料工业，,,,,，,,(,,):,,,,,( ,,, 吴晖，卓林霞，解检清，等(发酵条件对枯草芽孢杆菌发酵豆粕中的蛋白酶活力的影响,,,(现代食品科技，,,,,，,,(,,):,,,,,,,( ,,, 程天德，戴必胜，冯小军(枯草芽孢杆菌蛋白酶水解大豆蛋白的研究,,,(中国食品工业，,,,,(,):,,,,,( ,,,, 卓林霞，吴晖，刘冬梅(枯草芽孢杆菌发酵豆粕产蛋白酶优化试验研究,,,(粮食与饲料工业，,, ,,(,):,,,,,(