为了正常的体验网站,请在浏览器设置里面开启Javascript功能!

过氧化物酶活性测定方法

2017-10-06 3页 doc 20KB 253阅读

用户头像

is_842972

暂无简介

举报
过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶活性测定方法 过氧化物酶活性的测定(比色法) 过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。 一、原理 在有过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色物质,该物质在 470 nm 处有最大吸收,可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。 二、实验材料、试剂与仪器设备 (一)实验材料:马铃薯块茎。 (二)试剂 1 ( ...
过氧化物酶活性测定方法
过氧化物酶活性测定 过氧化物酶活性的测定(比色法) 过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。 一、原理 在有过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色物质,该物质在 470 nm 处有最大吸收,可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。 二、实验材料、试剂与仪器设备 (一)实验材料:马铃薯块茎。 (二)试剂 1 ( 100 mmol , L 磷酸缓冲液 pH7.0 (见附录)。磷酸氢二钠。。。。。磷酸二氢钠。。。。。 2 (反应混合液: 100 mmol , L 磷酸缓冲液( pH7.0 ) 50 mL 于烧杯中,加入愈创木酚((邻甲氧基苯酚) 28 μl ,于磁力搅拌器上加热搅拌,直至愈创木酚溶解,待溶液冷却后,加入 30 % 过氧化氢 19 μl ,混合均匀,保存于冰箱中。 (三)仪器设备 分光光度计,研钵,恒温水浴锅, 100 mL 容量瓶,吸管, 离心机。 三、实验步骤 1 (称取植物材料 1 g ,剪碎,放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆,以 4000 r , min 离心 10 min ,上清液转入 100 mL 容量瓶中,残渣再用 5 mL 磷酸缓冲液提取一次,上清液并入容量瓶中,定容至刻度,贮于低温下备用。 2 (取光径 1 cm 比色杯 2 只,于 1 只中加入反应混合液 3 mL 和磷酸缓冲液 1mL ,作为对照,另 1 只中加入反应混合液 3 mL 和上述酶液 1mL (如酶活性过高可稀释之),立即开启秒记录时间,于分光光度计上测量波长 470 nm 下吸光度值,每隔 1min 读数一次。 四、结果计算 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小,即以 ΔA 470 /[min ? g (鲜重) ] 表示之。也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位( u )表示。 min ) ]= 过氧化物酶活性 [u/ ( g ? ΔA470为反应时间内吸光值的变化;W为所称样品重,g;t为反应时间,min;VT为提取酶液总体积,ml;VS为测定时取用酶液体积,ml。 配制1L 0.01mol/L ph7.0的磷酸盐缓冲溶液: 缓冲溶液pH计算公式: ^^^^^^^^^^^^^^^c(H2PO4^-) pH=pKa2-lg---------- ^^^^^^^^^^^^^^^c(HPO4^2-) 把pH=7.0和pKa2=7.2代入,得c(H2PO4^-)=1.585*c(HPO4^2-) 磷酸盐浓度为0.01mol/L,就是c(H2PO4^-)+c(HPO4^2-)=0.01 这样可解出缓冲溶液中两种离子的浓度。 c(HPO4^2-) = 0.0039 mol/L; c(H2PO4-) =0.0061 mol/L 计算: n(P) = 0.01*1 =0.01 mol m(NaH2PO4) = 0.01*120 =1.2g NaH2PO4 + NaOH = Na2HPO4 + H2O m(NaOH) = 0.0039*1*40 = 0.156g 称取无水NaH2PO4 1.2克, NaOH 0.156克,加水溶解,再稀释至1 L即可。
/
本文档为【过氧化物酶活性测定方法】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。 本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。 网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。

历史搜索

    清空历史搜索