红景天多糖体外抗柯萨奇B3病毒实验研究（可编辑）

红景天多糖体外抗柯萨奇B3病毒实验研究（可编辑） 学员编号: 申 请 号: 中图分类号: 学校代码: 哟蒙爸逢穹统 瓣瓣嚣黪黼?粼黪嵇孰热鬻蓥?黪嚣藏乱《?乳魏嚣巷嚣 硕’菱。毋擎鬻沦变 红景天多糖体外抗柯萨奇。病毒实验研究 学科专业: 药理学 申请人: 赵 颖 指导教师: 刘晓雷教授 完成时间: 二六年五月 枣文搀篓 蓦薛零漂藤懑过建立瓣褡多漆凑毪?豁麟炎?礤茬囝缨怒模螯,瘦鬻懿熬篷 鐾学技 术搽讨红髓必多糖的体外抗树萨奇病毒、门隐作闲和对心肌缃胞保护作用机 裁,撩突蒸裕幕臻繁《菱凌氅赢,舞辙淑魏避一疹搿靛糕惹蒸蹇蒌硪。蠢潦巍 蚴 蘩憋串黧太举麓耩释度荭蒙羞多糖聪,感染国魏痰海魏察缵缒疯交,磁譬絷 慧毙较备 疆黼滔缎鹣散熬变纯,分薪艇荣炎多糖瓣疯豢感染衙懿礅缨藏蕊餐窬豫护雉蔫;采 用蓑遗贼整法培养麟代乳鼠心瓣绷胞,镌下媲察一心舰绷越搏动次数,蠖建?篼疫 组张法鉴定煨葬心腿缨骢媳缝发;叛强瘸毒感染一?瓤鳃濑建立瘸耀锻心肌炎组瞧模 型,学惑黎疯毒零辩垂袈苓辩浓发熬荭豢天多糖,逐嚣蕊耨玉飘缨蕤撼动狡鼗、缳缒 痰交毯毪,瓣染色浚魄较器缀淘存懑缨魏数戆簸麓;瘸鬻繁蓬瓣裁娄狳魄较不鬻努 维瓣毕数缀缀惑絷爨《砭蟊蕊,静蓉裂戳验谣魏暴哭多耱霞?强囝瓣蕤获??躲黎蕤上簿 抗瘸霉渭性;紫外分光光度法测激原代乳鼠心肌细胞培养上清液中心肌瓣、~ 氧霭戆添镬变豫。皋溪燕式缨瞧零鞠辩蘧亡糖蓑蒸毽表这影蠛嚣蝌一衽激糗嚣爨较磐 组瓣壤邀溺象熬蓑粼。绩繁缎黎必多耱鬟嘲缨鼹饔辍健翼羝一?瓢壤稳遽验串霹 毒黢簿麓拇萨奇毪擀毒摹藤戆瓣稳瘸交?《.撼,护《?。爵;薅蠹巷瓣蘩簸富撵髓辫蔻 对数使辨辫一个以上数量缴,黪鼹心肌酶妪、?獭的释放,对绷腿凋亡有抑裁 搏麓《,。缝论红最必瘳糖慰褥萨奇瑰瘸辫感染的?跚臌翮藤代巍疑心 瓤缎魏粪骜一定鹣绦护终瓣。辩拇势奄逸瘸毒熬繁戆蠢捧粼箨蘑,程一慧激 嶷下霹薄爨 心勰嚣鹣耩驶,捧铡耀蕤淫亡,其撵鼹撬裁巍爨壤避~步渡骏寒撵讨。 茭镰凝熬蒙必多糖;挺萨辫鹣癣毒;缎臆蕤燮;毯联;蕊一轰国;缓藏瓣亡?疏 女 讯 “ 逸 雠 淑 藤弧赋融【 蕊峨 鞋懿《联波 。 强 出 斌? 搬成 在. 畦 瓣缸 删。髑?蹦泌 ?谢 、 雕甜. 叭 ,卸血】啪 搬黼耐。瞅雒 趱圭曲玉移燃蠢蕊《醣知缀专黯。如薅最站撙。 、舭翱叔 踮? ?证】 螭?黼 艇 姒 ‰幽辩瞅’成醚蕊《洒谢溉咖粥燃妇曲 %. 灼鹤幽 ‰刚? 、. 她王醚交 幻越 ?文? 妇畦? 溆烙《瓿。 》? 州嘲 觚 承 湖 涮 .“. 出, ? , 锣 王《】 戚畦 一避趣蠢霉蝴单,黜姗缸 弦嘲睚一 一 仃.,., ?觞磁龇枷哦每《燃,~潞谳燃量嚣?黻?菇磁盎盎《蒯嘶《 .,..‰璐 ?越 础矬 麟 . 瞅眵粼汰。弧礤妇辫蜊轴畦。蠲 锵强孔蛀岭《珏溅,嚣一 融 舢? 黼锄 卅. 洫 . 掣啪斑;岛;瑕;;?;趣珥糯垂 红景夭多糖体外抗柯萨奇病毒实验研究 .前畜 病毒性心肌炎? ,?诃是一种严重危害青少年健康的疾病【,扪,病 毒感染是其簸常觅豹瘸因【引。治疗聊镬鬻内终露瓣凑无特努洼药耨。瘸稼试愆病毒 唑、吗啉呱、愈刚烷胺、阿糖胞苷、潘生丁、干扰素、免疫核糖核酸等终止或干扰病毒复制 及扩鼗戆蕊携,毽疗效爨不嚣学定。蠢摹稳瘴毅体惑、营姜、缳妒心聚、攘潮心力裘滋豹 发展、谨慎威用肾上腺皮质激素等支持疗法为主,假均不具备特异性。属中医心 掺、眩晕、艟瘳等病范畴,在长期送疗实践中,孛医孛藏有效成分在?垤约治疗窜雩出 一定贡献,如黄芪口服液、参麦口服液、抗柯注射液酱参中活性成分等,并提出以益气 养阴为指导理论治疗瘸毒性心肌炎的办法,取碍不错的效果。 红景天,.是景天稃红景天属多年生擎本植物或亚灌木植物,全濑彝有 多种,我圈约有种,能在极其恶劣而多变的自然环境中生长,为一种适应原样植 耪,其往畿曹、涩、寒。凝雷医学髑于活蠢正盘、清膝杰咳,可添疗膝炎骧激、咯盎、竣盘, 妇女白带增多、男性阻痿、糖尿瘸。外用治疗跌打损伤、烧烫伤。近年研究表明红撩天具 霉袋装、蕊较襞,羲寒冷,抗疲劳,靛微波臻慰、兴奁大弦巍鸯髓、蕊衰老、 抗心律失鬻、潼 疗高原红细胞增多症、抗病毒、抗癌等功效。在临床上红景天除治疗风溅,类风湿等疾病 以外,还赐予渣疗冠心病、高蛊愿秘心鼠炎等心血管疾病。从红景天植物孛先屠分瓷出 多种化学物质,主黧含有脂肪、蜡质、黼醇、酚类化合物、黄酮类、有机酸、鞣质、蛋白 震、水溶性撵发油成分、生物碱、红景天多糖等。本蜜验利用殴强病毒翠起病毒黢心肌 炎体外细胞模型,观察红景天多糖对?细胞和滕代培养心肌细胞感染西,琢瘸毒繁 殖和对细胞凋亡的抑制作用,为进一步体内动物实验及新药开发提供研究依据。 .实验耱瓣 .细胞与病毒株柯萨奇:;病毒响中国科学院昆明病毒所提供; 缨溅中国零事蓬学辩学茨提供;心瓤缨麓为藤代培葵, 箍一曩藏鬣,魏鑫内蒙 古大学实验动物中心,合格证号:蒙?。 。主袋试剡嬲瞧,一豫公司;躞,遮公司;小孛盘涛?,。 直鐾点匿堂睦亟?丝塞生堂照迨塞垫鳗堡 璐?一公司;?,华美生物工程公司;遮:,华荧生物工撩公 司;’一溴脱氧尿苷,华美生物工稷公司;,华美嫩物工程公司;,华美生物工 程公司;盐酸胍,华美生物工程公司;心肌缎臌一一,北索中山生物技术有鼹公 司;免疫组仡试剂盒, 糸中山生物技术有限公司;乳黻脱氢酶试剂盒,首都医科大学首 医临床医学科技中心;磷酸肌酸激酶试剂盒,酋都医科大学首医临床医学科技中心; 弓物,上海生王生耪工糕技术舂戳公司;酶,擞凛生物技术有融公司;黼, 嫩生物技术有限公司;核酸分子参照物,越难物技术有限公司;琼 鹭糖,牮美生穆工程公司;溪像乙锭,擎美叟懿工程公甏;琵怒,辨公筏;疆一技、 试剂盒,华美生物工程公司;凋亡梭测试剂盒,北京保赛生物技术有限公司。 。受试甥红景天多糖,从嘉山瞧景天弛 。。.缀状 茎中提出水溶性粗多糖 。从粗多糖中分离出均 一多糖并研究其单糖缀成。方法酸性乙髂分级,终一蜓。 ~柱层拼纯纯,替一级分 。粥掰,脱蛋盘,脱色,蕊? 八 ,比旋光度法,桂层柝等方法检验纯度,和 涎其蘩糖缓戚.结象为麓一缀分,莘糖缀成为:豫,,,,,,瘁尔瑰 依次为.:.:.:.:.:.。结论为酸性杂貉糖。由中国科学院兰 州化学物理磺究联提取、缝恁;经毽豫睦覆及波谱学鉴定,汪遘全教授提供。 .主要仪器微量移液器,芬兰;低温离心机扎一,北京医用离心机厂;电 热恒濑水浴箱,江苏省金坛书医疗仪器厂;/?咆子分辑天乎雌,上海天 平议器厂;一深低漱冰箱,美国公司;酶标仪。,础蛐公 司;生物倒置相菠显微镜,熏庆光学仪器厂;晚恒温细胞培养箱?一,日本三 洋公司;正匿滤器,美莺。抖公司;医雳净纯工作台了一,苏娜市金燕空气净化 设 备有限公司;一自动双重纯水蒸馏器??,上海贬荣生化仪器厂;流式 绥稳仪,至茭垂耗公镯;稳基稳漉定薅耄泳纹哪一王,?京六一仪器 厂;水平电泳槽一,九。公司;微机图象处理系统越汀,? .姻公司;摄像仪一?? ?,?孵。公露;仪细 ,美国..公司;高速冷?离心机,德圈公司;紫外成 像扫描仪,美国?公司。 .实验方法 内蒙吉医学院硕士研究擞学位论文?年 .主溪溶液配制及前期预备试验: ,.磷酸釜缓冷溶渡礤憋:在?棘去离予零孛溶鼹踺、。 、.毒 哟和. 】喝,用调节溶液的值至.,加水定容至,. 麟徽魏滤蒺遘滤涂楚,保存予?。 ..瑚压培养基:取包装的瑚难,加.?,用去离子水 ?矗充分溶鬃,再蜘入青霉豢钾/?,硫酸链霉素/,用涌值 礅.,.肼微孔滤膜过滤除菌,?僳存。 ..含%筠的一培养基:一 .,印.,丙酮 簸镳.,一谷煞靛胺。,捌嗡.,青霉素锋点畦,硫酸链霉素 /,加双蒸水嫩,.脚滤膜过滤除菌,补充小牛血清至%。 ,& ..獠滚:先琵戏贮孝渡: , .,魄。?魄。 ., , .加双蒸水溶解定容鬣。贮存液:毋‘ 心氇 强,萄萄糖妻珏双蒸水溶解宠客至。液:份份份 双蒸水,。调熬值至.左右,.呻徽张滤膜过滤除菌。 .. %胰鬣自酶液:称取胰蛋自酶粉末.,溶于中,.脚微 孑滤膜过滤除菌。 .. 、. 和 ×电泳缓冲液: ,酝戮渔《璐,溶予搬承孛。 ..溴化乙锭溶液:取于棕色瓶中,加 “溶解,予避 必耱毒。 .. %琼脂糖凝胶:称取琼脂糖克,×嘘缓冲液,溶解后按照./ 加入溴他乙锭,灌捌琼脂糖凝胶。 ..?纲胞盼培养:缁胞传代:债去培养瓶中的培养液,加入.% 胰酶清洗单层细胞,弃前液,另加入枷.%胰酶,?孵育;在相差显微镜下观 察,待缨耱醐缩戮赢,霆新魏入邋量的含%的毯强?臻养基菊抗胰 酶活性,用滴管轻轻反复吹吸,使全部细胞脱离贴壁、分散并悬浮柱液体中,转移至 离心篱,国黻,离心?糙迅;赛去?渍,热人%联焉戆豫?豹壤养滚; 吹吸混匀聪,接种进入培养瓶。 ..原筏乳鼠心飘细艨培莽‘:燕慧取出赫生一天鳇酣乳鼠翦心魅,用。 凼鏊直匿堂瞳塑土她窒生堂壤迨銮趔?堡 液充分洗尽血液;照鳃剖剪姆其剪成沙粒大小约砌叠豹小块,加入越?孵 育过的.%胰酶;?水浴,调节转速至一次份,消化;首次消化所得的 液体巾因含有较多的红细胞及受损的心肌细胞,放弃黢不用;再加入胰酶,上述条 件下消纯;将缨胞悬液转移入离心管中,加入等嫠的培养麓以中和消化反应;余下 的组织块中加入新胰酶继续消化,重炭多次,直疑心肌组织全部消化;/ 赫,离心揭礅,将沉淀缭貔重悬予含%鞫。浆?培养基串,把魏纲魏悬 液转移入培养瓶中,于?,%孵箱中培养?,差遮贴壁以减少成纤维细 腿豹褥染;收集港莠瓶孛粒上渍,鬻,?螽诗数,?莲蓬缨骢,接释入瑟煞培葵糕;在壤养簇孛 加入 一溴脱氟尿苷./,继续培养。 。,壤莽心腮细臆的鉴定: 相差倒鬣显徽镜观察心腿细胞心肌细胞差逮贴壁接种于新的培养瓶以后,以 %?俄继续培养天,当心肌细胞开始规律搏动后,记录心肌细胞搏动次数, 并熊像。 心肌细胞染色培养心肌细胞于六孔板中的盖玻片上;细胞撤长状态良好 孽孛,歌蠢绥缒聪片;瀣×璐漂浇次,每次?戚;%多聚季醛匿定蕊;双 蒸水冲洗;迅速通过丙酮次,每次~分钟;通过:丙酮/二甲苯次,每次? 现遮;滠过:褥酮/二学苯次,每次一;缝二警落一翅法;将盏壤片置于载瑗 片上,中性树胶纣片。 应用?免疫组化法确定培养心胍细胞的缒度【 驭有心飘细胞生长的玻片,。条件下,×潆洗血清及杂质;铲预冷的%多 聚甲醮固定分钟;使用./.的漂洗,共次;使用抗原修复 滚鲶疆缓筢聪片;爱蘑,。/鞭鹣漂浚,共次;%糙封闵警小 时;使用.几.的鹅漂洗,共次;抗鼠?一抗:稀释以 惹滤麓予瑗学生,之嚣铲漫盒蓬夜;夔矮?。危.瓣王豁漂浚洫,爻 次;加生物素二抗羊抗兔于玻片上;孵育;使用.几.的 王;漂淡洫,奘次;期三抗:辣檄过氧亿物酶标记麴链酶襄叁索,孵蹇两使 用./.的漂洗,共次;肼撼湿色,在鼹微镜下观察着色程度 适宜时约一,终止显色;系列酒精脱水:%一%~%一%一%一 %~%;使用苏木索进行复染;二甲苯透明以后,使厢中性树胶封片;细胞 内蒙古医学院硕士研究生学位论文举 内染成棕黄色者为阳性。 透射电镶观察【 蕊寨心飘缨勰腿羡形态,羧及蕤壤孛是否可凳瓤丝巾阗密终、线粒俸致懿鞭 疼爱弼; . 难察核膜是否瓣剃,核内是否有圆形核仁。 实验步骤:消化分离细胞一固寇细胞一脱水一包埋一液氮冷冻剥离树脂片,光镜定 位一超薄切片机切片一醋酸铀一柠檬酸铅双重染色一透射电镜观察 。。瘸毒毒释静扩增及毒力游定】: 》 期癍稼瓣扩璞: 在?培养瓶内生长成片的对待测病毒敏感的】勰细胞中加人病毒液;吸 附后弃上消;加入含%潞的?,一培养基,孵箱中培养;每日在生物 倒置显微镜下观察,待培养的细胞融成单个细胞并有部分破裂时,停止培养;将此培养瓶 反复潦聚次,?蛳/离心魏,收获上涛,贮存予一?。 髓、缫施稻蘸健心腿缨藏.二秘病毒毒力滴定雷珐‘】: 实验步骤:柱孔培养板中按种×/?细胞或×/心肌细胞,每 孔弘;用无清培养基倍系列稀释病毒,形成个梯度,将长成单艨细胞的培养 液倒掉,接种系列稀释的病毒,每个稀释度孔,每孔?斌,同时设立正常细胞对照。 ?、链嗡褥雅壤券,楚痍毒秘缨瓣蠢努搂簸畦矬一魏,弃痍毒滚,戳撩酶滚洗 次,然后加入缩胞培养液,重新放回孵箱;每日在倒置鼹微镜下观察并记录出现孔 数,以细胞病变达“”以上为阳一陡,以最高稀释度不睇出现时为终点,连续观察 若干天;利用已缀记录好的数据以?法计算?。 ?愀烛法:诗算公式势:贰:弱?%霹分数~/鞠%器分数一 ;斡吾分数× 玲睡舔瘸鼯稀释度 ..?细胞和原代心肌细胞上的药物毒性测定: 在孔培养板中接种×/娃?弋细胞或×/心肌细胞;用澈清培养 基按倍递次稀释药物,形成个梯魔;至孔板中形成单层的细胞藏心肌细胞 嚣,旁羔薄,每琵鸯入茏建涛培莠慕缮磁臻释药穆鼯,镣拿蘸释凄设嚣个笈魏, 弱簿 设置正常细胞对照;置。、%。培养箱中培养,逐爵濑察细胞病变;当细胞病 变不再发展时,成用?汝计算最大无毒浓度?和半数中毒剂量。 .红景天彩糖对病毒感染的细胞保护作用试验:。 盎鐾点墼堂堕篓圭翌塞垒堂笾鎏塞竖星 ?弋细胞×个/接种于孔板,牡/孔,培养一天形成单层细胞盾, 感染、偈病毒?。感染前小时,将红景天多糖和阳性对照药盐酸胍自最大 无毒浓度开始稀释个稀释度詹魏入藐备板中,.蕊/孔,此试验分缀包括:缅稳 对 照组、病毒对照缀、期燃药物对照缝酸瓤、药狻对照缓荚缓,,曼微镜下麓察 王,并 记录结果,赢到瘸毒对照组有%的细胞发生病变后,进行不染色,每我加入含 浓度为./一培养基.“;孵育?小时,蓝紫色甲瓒 复合物形成后弃上清;丑洗?遍,每孔加入,以终忙显色反应;酶标仪 肆燃测定?壤;数据分撰采雳越一鹾瓣浚,分掰结暴。 .红景天多糖对?病毒感染心肌缨胞的保护传用试验: 新生乳鼠原代心肌细胞×个/接种于孔板,灶/孑;培养~天 形成单层细胞后,待心肌细胞搏动良好后,感染病镪?;在感染前小时,将红 景天多糖帮麓程对照药毒最太无毒浓震开始稀释个稀释度詹船入细胞,髭微镳下观察 ,势记袋结卷;此试验分组中包括:缨臌对照终、痣毒对照缰、戮性芬锈对照盐酸 胍、药物对照组。细胞,”染色,于酶标仪上?处测定值;数据采用 ?法,分桥结果。 .病毒繁殖抑稍实验糟’: 程缨魅秘板书艇人不同浓菠黪红景天多糖露露盎渗培养慕将纛景天多 糖稀释,浓度分别为.越似、.弘、,吩/,每秒浓度加飘,小对后抛 病毒,同时设细胞对照组、病辫对照组、阳性药物对照组盐酸胍。每日在倒置照微镜下 观察,病毒对照组细胞瘸变王不再送行时,停止观察。给药组和病毒对照组的细胞 及培养渡,经过反复冻融三次,将缨蔻裘解叛嚣,离心致上清液。将敬获各缀静上清液作 系列倍稀释~。,接秽予已长成一单层缨臆的现板土。逡续爨察 孑檄中各组细胞出现情况,在有瘸变的最高稀释组不再进展时,进行, 染色。予酶标仪上处测定值。?法计算病毒感染组及病毒药 物缰培养液上清中病毒瓣亿。若药物组麓养液上清?毡。眈病毒感染组培养 液上 海跽的对数傻舞高一个对数攀位大一个数量级,剡表明渡嚣妨戆蠢效懿捧铡 瘸 毒繁殖。 .心肌细胞释放酶的测定: .. 的铡定:取缁胞密液为.×个/的新生乳鼠原代心肌细胞 斑蒙古医学浚磺士研究舷擘位论文?年 培养上清液,测定病毒对照组与给药组培养液中乳泼脱氢酶活性,方法按照 试剂 蠡说琵零遴镑。 .. ?的测定:方法按照试剂盒说明书进行。 。?《含量的渡式绸熬仪方法; 设正常组、病毒感染组、病毒感染药物组、药物对照缎均为舒细胞培养瓶; 将上溏及消化下的蚴细胞分男放人离心管离心,?,~;经离 心冲洗两次,以%己醇固定避夜;懿离心冲洗去乙醇,鸯入终浓魔为 /越,摇匀,?温育;加入终浓度为/如,?暗染,用流斌细胞 靛进行嗡含量分耩。 .逆转录聚合酶链反应~浆 ,.豫。斌铡提取缓邈总:致出臻券袈颓去漾滚,矮暇骜吸予,翅入 ,作用~分钟;取支.管;用枪将瓶中的液体吸出,放入.管中; 露将装有液体螅嚣个骛孛翦液体分到取弘予掰支募兹.管中;趣氯携越 为加入提取总液的体积的/,此实验。的体积为弘。振摇秒,室 潺放置分,?,艰离心分钟;离心后管中液体分为三相:相、瑕白相、 默妊褶扶上向下的顺序;取层的礤妊楣于新豹.管中。鸯拜入耻搏雨醇 豫提驭总液的体积的/去沉淀,振摇混匀。?离心分钟;弃 上清,魏天缸懿%鹃乙醇磊溅熬零酝麓洗涤列滚淀。袄吸疆匀瓣,? 离心分钟,弃上清,隙干分钟左右;每管中加人弘的译熟水溶解 融《,一?缳存。 ..利用合成洲进行淑: 始风翘她孙、 强脚、遵 弘混匀,?分钟,迅速放 々。 敲冰上,再加入×弘、酬盯.弘、 弘混匀,?/分钟,加 逆转录酶,?/分钟,?/分钟,?/。 ×酶隧、淤疆王四.弘、弱酶弘、甾磷粼葶静静弘乏. 出眨膻体系为。 越固萤扩堰条终:?/分锋,?/移,?为转移,?/移,重复个疆 环,?/分钟,?/。。 扩增条搏:?/分钤,?/移,?/秽,?/秒,重复令锤。 环,?/分镑,?细 扩增条件:?/分钟,?/秒,?/秒,?/秒,重笈个循环, ?/分钟,?加 一扩增条件:?/分锋,?/秒,?/秒,?/秒,重复个循 环。?/分钟,?/。。 。实验统计学签壤方法: 应用销.统计软件进行方差分析、检验及相关分析,所有数据以均数?标准差 表示,绩果鼗,为差异曼著,。淹差异菲嚣显著。 .实验结果 ,西强病毒在?鬏缨腿皇毒力濂蹙结果: 用?法计算病毒,%的感染百分率一/ %购感染菩分率一%的感染酉分率×。殴%癍毒耩器度,重复测定 取平均值,。,即能够使%细胞发生的病毒浓度是吨。/ 。 .盐酸瓤在细胞上繇性测定结果: 计算方法用?法,‰耀/“,。肛/越 ,荭录天多糖在?璁国缅聪上毒褴测定结果: 计算方法用?法,砜旭/,矾耀/ .嚣景天多糖在缓魏上抗耩萨螽痣毒琢作震结象: 染色结果表明:红景天多糖在对细胞无毒性的浓度下说踞不是由于 红爨天多糖瑟缨憨戆毒瞧终廷恧鬻接影璃襄簿复裁懿缭栗,露.曙/赫、。曙/ 棘、 /,能抵抗?对?细胞的杀伤作用,与病毒对照组比较平均值有照著 性差菇.舔,.。在感染璐病毒鹩礅缨憨上麴级景天多虢, 则其对细胞无保护作用,活细胞染色结果无统计学意义。说明纽景天多糖在 ?细胞上摭挺萨奇瘸毒玢的俘鼹,可毙怒通过竞争搀裁方式阻竖痰毒与缨飕 结会, 阻碍瘸毒的吸附,从而影响病毒复制的结果。数据处理用.计算机软件进行处 理,结果表示为主?,用组间检验湛行检验。见表:表红景天察糖农?嫌细胞 上的抗病毒作用?, 病毒对照 ?”.. . 。 . 。 . ..一.?.. ??晕露牛 网红景灭多糖在细胞上的抗病簿作用结果?岛月础舫 ..啪汀搬色前,备组细胞的生长情况 啦缎塍疯毒对鼹×凇缨魅 缎腿细臆慰照×? 缎景天多糖.州×??细胞红景天多糖.脚/× 细胞红景兴多糖./× .红景天多糖在心肌细胞原代心肌细胞上抗柯萨奇病毒、,】南作用 。.在愿代心飘缨爨上秘豢力淡定结栗:攥赢一强豫珏法计算瘸毒馥:固蛄, ,工?%的感染酉分率~/%的感染百分率一%的感染百分率× ?端?嚣筠瘸毒耱强度,重复测定淑平均傻,曩:毯。?,瑟麓够馥%细 胞发生嘏的病辩浓度是?/。 ..盐酸蕊在藤代心舰细胞上’、瓠‰的测定结袋:计算方法用?? 法,.烬/,?‰越/。 ..红景天多糖在源代心肌细胞上?为、测定结果:计算方法用? 法,氇.耀饷,?炼棚。固 壅蓥盔垂堂延壅圭璧塞垒堂焦鎏塞垫堑篷 ,.红景天多糖在原代心肌细胞上抗柯萨奇病毒作用结果:?感染培养的 心肌细胞天后,心肌绷施出裁细胞瞬缩等缅胞瘸变,感染后天窝天缎脆无 搏秘,王踞显壤多。缴景天多糖组。越/斑、,潴/汪、.越倒在熬个实验过 程中心肌绷胞搏动良好,染色结果表明给药组与病毒对照组比较心肌细胞存 活率 提高,平筠。傻宥娃馨缝差辩. 瘸毒对照。滋明瑟祭天多糖辩感染豹 心肌细胞蠢保护作用。数据处理用.计算机软牛进行处理,结果表示为?, 用缀间梭验进行检验。见表: 袭筑荣天多糖在藤:心魏缨齄上豹抗病毒侔嗣昧代心飘缀慈》三?,》 ?. 病毒对照组 : 州 ...,...,.。 ’ 弩%谚?谶 ..染色前,各组心肌细胞的生长情况 原代心肌细胞病毒对照× 原代心肌细胞细胞对照× 原代心肌细胞红景天多糖./?× 原代心肌细胞红景天多糖./?× 原代心肌细胞红景天多糖./× .病毒繁殖抑制试验 ..病毒对照繁殖结果、染色法:数据处理用.计算机软件进行处 理,结果表示为主?。用?法计算病毒。 死亡率细胞对照组平均值一病毒组平均值/细胞对照平均值; 距离比%病变率一%/%病变率一%病变率; 鲷、大于%的病毒稀释度的对数距离比例稀释系数的对数; /,见表固 表病毒对照繁殖结果染色法?. ..盐酸胍.制对繁殖抑制作用结果染色法:数摄用. 计算机软件进行处理,结果表永为囊?用一?四法计算病毒玎。死亡率 缨憨辩照缀乎鹭?毽一簸羧簸缓平均?德/缨躯薅慧平毽?蕊,?习‰。 结采觅表。 袭盐酸胍./赫对繁殖抑制作用绪粜染色法】?. 现 ..缴景天多糖对繁殖抑制作用结果染色法:数据用.计算机软 件进行处瑗,结果表示为王?用?法计算病毒?。残亡率细胞对 照缓乎坶?德一莛景天多糖缀乎慧?篷确戆瓣照乎逢篷。荣簿纺爨垮蓁渡上 清:斌玩病毒感染组培葬液清酝的对数值升高一个对数革位大一个数量 级,刚表明该药物能有效的抑制病毒繁殖。表撼承:红景天多糖制、./ 、盐酸胍./砒均有抑制病毒繁殖的作用。。 豪鼗豢天多攘.嗨詹》霹瘸毒繁建挪辅作用续粜?髓下染色法》《?,》 “泖 裘鼗繁天多糠.罐詹对臻毒繁建捺瓣侔嚣维鬃搬染色溘》?。》 蜘加 裘数豢天多糖.詹对病毒繁殪挪镧作用续莱醒染色法《?, 组别上清 稀释度 平均值? 死亡率% 绷施对照 一 .?, 一 红景天多糖 .?. .. .?. 、 ‘ ,?. . 一 .?. . 一 .镐?. , . .?. 扩内鐾点堡堂窭熊圭堑塞生堂垡鲨塞;螋燕 表瘸毒繁殖捐剩实验络果 与病毒对照砜比值 组别 剂爆/叫 “,% 病毒对照缀 .盐酸胍组 . , . 红装天多糖缀 ? 伊.蹲搪. “ 妒 舻绷 .培养的心肌细胞上清液心肌酶的测滋结果 ,.壤券的心辍鳃錾上涛滚巍羧残氢酶测定熬络暴: 培养的心肌细胞上清液乳酸脱氢酶标准曲线的绘制结果见图。 圈。壤券静心瓿绑戆土壤渡鞋黢袋煞酶测定骢标准魏线 瓤景天多糖对培养大鼠心肌细胞活力的影响加病毒小时后见表。 表鼓豢天多糖对培养火最心飘绷艟嚣力影响加病毒小耐精》;?。 组别 剂量阿/釉 酶活力单位;? 细胞对照 .?. 一 筠翻?黼 病毒辩照 稻,?, 盐酸胍 . .? . .?. . .?.。 红景天多糖 . .?. , .? . .?. . . .?. 旺. .?. ”~ 病毒对照组 ? 口口一墨一牮警文蜒避 ?‰‰飞、??气、 \。 剂量/ 强红景天多耱对培葵大惑心嚣缨释 豫活力影响蒡?口鼋 ..培养的心肌细胞上清液磷酸肌酸激酶?测定的结果:培养的心肌细 爨』二瀵滚磷酸鼹酸激酶较~盎秘檬疆莛线懿绘裁缝象楚鹜。 标准曲线捌 ”篙龟譬嚣夕 / / .// 】『掣辞蜉逝 啪粼籼艄?。 , . 疆强度 圈.培养的心肌细胞上清液磷酸肌酸激酶一惝测定的标准曲线 终慕天多糖对培养大鼠心飘缨腿?儡活力的影响如病毒《枣对露觅表: 表红景天多糖对培养犬鼠心肌细胞?满力的影晌加病毒小时后士, 组别 剂量腭/ 酶活力单位? , 绒赡对照 一 。..?. 瘸毒对照 ? .?. . 娥酸胍 .?. 。 ,?. . .?,。 . 红景天多糖 .?. . ?. . .?, . .?. . ?.一 ??弼壬, 病毒对照维 善 墨 醛 臻 瀣 已:。,。;., ” ?《量/ “”毪 銎红暴天多耱瓣培券夫簸心虢燕藏一珏活力影响?,口鼋 霉一 表、显示,红景天多糖缀.、.与瘸毒对照组比较无论鼹还是一 避豹滋瞧麓有襞显下羟翡趋势。王。,说弱终爨天多糖对感染均 心飘缓臁农保护作用。 流式细胞术梭测结果 凋亡的标准特征之一是熬因组以核小体为单位发生断裂,除用常规的琼脂糖 凝胶电泳榆测外,也可用凋亡细胞的碘化丙啶摊斥分析法,先用染色,再用强染 色。逶邋滋式缨慈彀进嚣定爨分辑。实验结暴发瑷,病毒对爨缰缨稳黥够蕊察羁菲豢羁 显的凋亡峰,红景天多糖加瘸潦组存在部分细胞凋亡,丽正常细胞对照缀、红景天多糖对 照组几乎没有发生凋亡图,液。 表红景天多糖对柯萨奇病毒引起细胞凋亡的抑制作用、 注:与轰常对照维毙较※:.斑;与病毒组魄较?:图通过流式细胞仪观察红景天多糖对病毒引起细胞凋亡的抑制作用 :正常组;:病毒感染组;:红景天多糖组;:病毒加红景天多糖组。浓度及药物作用时间 见方法与材料。各组细胞培养两天以后使用流式细胞仪分析:组凋亡率为:.%;组为. %;组为.%;组为.%。 .对凋亡相关基因表达影响的?检测结果 用.分析各基因灰度值,发现各组管家基因【条带亮度基本一 致,不存在统计学差异.;和基因在前三组中也不存在统计学差异 ,,但是病毒对照组的 倡?比值明显高于其他三组,这一结果提示红景天 多糖确实具有抑制细胞发生凋亡的作用图,表。 表通过?、条带灰崖扫描分析红景天多糖对凋亡相关基因表达的影响;、 注:与正常对照组比较※:.;与病毒组比较?:垂 强遴过?勰瓣察红景炎多糖对凋亡相蓑基因淡达翦影响 基因在各组中的表达没有藏涮,病毒感染组驰/霹卜毙例龋显高 于正常对照组,红景天多糖组、红景天多糖加病毒组与正常组差别不明 簸。 .讨论 病毒憔心蔑琵炎?婚:是瘸海感染零趋的誊觅器质洼心魅痣,其发病率有逐年上舞 趟势,因此,病毒性心肌炎药物治疗的探讨更为引人注目,充分利用我圆的中草药资源, 并发莠砑锈病毒瞧心藤炎豹蕊纺是罄臻籍要。缝豢天素有“嵩覆灭参”释“雪壅秘荤”之 称,具有强壮、抗缺氧,抗寒冷,抗疲劳,抗微波辐射,兴奋大脑和脊髓,抗衰老,抗心律失 鬻,治疗蠢琢红缁蘧臻多瘥,撬瘸毒,抗瘗,藐心瓢囊老,涪疗滗心痰,窝鑫压稳,冬瓣炎等 心血管疾瘸的作用,对心肌缺氧、缺血具有保护作厢。本实验把红景天多糖提取物作用 于感染璐戆终岁塔奏绥熬孛霉簪羁了爨铰瀵意熬效皋。 .关于病毒滴定 在本实验孛采震、堰强缨蕤绍势氅缵施接;黪璐疯毒,在文熬枣建汉楚援瓣绥施 株还有细胞等,但通过实验探索,?细胞具有生长状态良好、细胞形态稳定,致 癌变效应豫照等侥点,敬蠡本实验采鼹?。缨熬避牙殴鸭渡毒的繁疆与滚定。 .关于乳鼠心肌细胞培养 本实骏以心舰鍪戆季力骛效学琢弋缨缝零平实验麴靶缨魃,臻养方法参考众多关于 心肌细胞的实验指南,培养技术已较成熟,但要获得大量的心肌细胞,仍有几点需要严格 掌握:国 由鏊直匡鲎瞳堕土堑塞垒堂焦迨窒堕整 乳鼠日龄是一个需葵注意的闻题,最好选释密雏游的巍鬣,嚣秀就辩鹣,魏缁 稔海露一定瓣台残登鹃特征,发育麓力嫠好,容易聚蹙生长; 胰蛋虫薅终援对阉不寅太长,~般每次均农以内,胰蟹白酶的浓度要控制在, %,此外,用胰蛋白酶消化得到的细胞悬液要及时用含离浓度皿清的培养基终止消化, 并离心及时去除胰蛋白酶,以尽量减少胰酶对细胞的损伤; 消化过程中果用小转子在恒温磁力搅拌器上进行,应尽量控制小转予的转速,减少 对细胞的损伤; 静使经过~鞠黼懿差逮?占壁露趣,尽霹熬怒去除残绥维缨胞,毽辜馨裂麴缨 魏孛 仍混杂有部分或终维细魃,并在以赠的壤养过程中,在左右即可戏察到大量成纤维细 胞生长。因此,在心肌细胞贴壁后,应使用添加了.邶溴脱氧屎苷的培养熬, 以抑制成纤维细胞的分裂,而心肌细胞融是终末细胞,出嫩后即失去分裂能力,溴脱 鬣尿箭对其生长影响不大。 总之,分离、援种心毹缁穗必须小心搡作,注意上述事项,才雏取得较瑾惹懿珞葬效 聚。昏勰缨您鉴定方嚣,先对生长状态、存活缨憝进行攘蓑观察,瓣别其形态及收缩豹特 性,予以初步认定;然屐进一步进行染色、撬?免疫组化,可见细胞内抗? 免疫组化呈阳性,具肌性细胞的特征,阳性率大于%,透射电镜可见细胞内肌丝 及大量线粒体、具有心肌细胞超微结构特征。本实验综合证实所得心肌细胞纯度已能满 足日膀实验的需戮。 .红景天多糖对感染鹣诮缩耱鹃保护律焉: 巍红最天多糖浓度在耀/斑薄,产生明显瓣拄痰毒涯性,楚受感染豹】奠国麴 跑在肼比色购指标评价下,加缎景天多糖的病毒感染组明最好于感染瘸毒对照组。 .病毒繁殖抑制实验: 病毒感染细胞以后,在细胞中繁殖,包裟成为成熟的病毒颗粒以后,释 放进入细胞培养液上清,再行感染新的细胞,如果药物麓够对病毒的繁殖过稚起 蠲捧铡作丽,郊熊够作掰予瘸毒的籍辩、穿入、震裁、释放等过稷,籍可以有效减轻病毒对 其蘧心鼹缡藏熬侵袭终翅。獒钵表褒炎缨骢培莽滚上渣懿瘸毒含慧降低,实验结果涯 实,红景天多糖能够有效降低培养液上清的弱,减少病毒在?殴?缎胞中的繁戆。垂 窭鐾查薹堂鏊逐圭翌塞蕊鲎焦鲨塞鳇望 .红景天多糖于感染四乳鼠搏动心肌细胞的保护作用: 煞景天多糖在.?。弘碰浓发蓬嚣蠹鼯臻染尊瓣心飘缨魏其鸯保护终 用,可以使心肌细胞瘸变减轻,细胞搏动明显恢复,且该保护作用与药物浓度存在剂量依 羧美系。 .心肌细胞释放酶的测蹴:在病毒性心肌炎患者中,心肌损害通常伴随有心肌酶 学改变,劳艇心瓤酶增高的程度及其动态变化在一定程度上反映了心觏炎的转嬲趋势。 本实验结果病毒组活性嘲显增强,提示感染心肌细胞后抑制了细胞的有氧 筑化,使糖酵解增强,乳酸堆积,药物使姒活性下降,提示翡物具有抑制心肌细胞糖酵 解的功能。 磷酸肌酸激酶一?多存在于心肌细胞,故有较高的特异性,是判断病毒性心肌 炎心毹缁藏损伤程度粳疗效的燕要指稼。 ,结论 缝簸天多糖对橱萨奇臻病毒感綮豹谨缮貔稻瑷代瑰鬣心麓缨魏燕露一定 的保护作用。 辩援萨专魏瘸毒戆繁藤鸯簿裁份蕉,在一是浓疫下霹海纛心藏黪豹释放。 通过采用流试细胞术对细胞凋亡率及凋亡峰进行检测表明,纨景天多糖能够显 装垮裁绥臆戆揭亡。送过对援亡提关基嚣表达影响鹩?进行检测,红景天多糖 可使卜店比假明显高于病毒组卜抑制细胞凋亡,“促进细胞凋亡,表明 缎景天多糖确实具有抑制细胞凋亡的作照。 本实验仅是寸红景天多糖治疗、讯心在细脆水平上的初步试耱研究,其整体动 物模型试验尚需进一步深入探讨。对其谯机体内的吸收、分布、代谢等药代动力学及药 效学杌镪需作迸一步深入研究,并阐明其作用的分子视箭。 .参港文献】&。 。?,?糖, 辩廷 沁 稚辨。沁 砩?。 ,;:? 】赫差,珏麟藏 燃檄潍蛭.科. 耥 。嘲掰 采桶翔嗣蠢;。~;:? .斛 诣她,。 《雒砖, ?携幻越摧?适 ?西零蠢豪吉莲学藏磺士研究垒掌位论文翁年 ,,:? 缮继华生壤.病毒学实罴赛骏技零。逸庆辩学技术囊叛挂,?:一 黄培嫩等译,细胞实验指南.科学出版社,:一 牲平烹缡.医用实验病毒学人民军医出版柱,:一 蔡文琴,王伯绘主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术,四川科学技术出版枉,: ? 黄培黛等译.细胞实验指南.科学出版裢,?: 张均刚主编.现代药理实验方法学第一版.人民卫生出版社,:? 【臻杨獒珍,郭棋,衾簸荚等,太鬣簿魂心飘维蕤臻莠凑染褥萨毒嫩病毒鑫越微结搀静戮究.中 华医学杂志,;:文献综述 中药红景夭治疗,心血管系统疾病研究进展 摘戮本文综述了红景天在心墩管系统的药理作用。红景天对心肌缺氟、缺血具 肖保护俘耀,能够竣较心飙老诧征象,预爨或廷缓心瓤老诧,竣善心瓤臻能及飘止& 病毒对心肌细胞的侵染和在心肌细胞中繁殖,通道扩张冠脉血管、降低心脏后负荷,降低 心肌耗氧量,改善心肌的供嫩供氧,调熬心脏血管的顺应性,对心血管系统起到凋整和改 . 善终蘑。 关键词】红景天;药理;冠心病治疗 基爨天捌焱..翻是豢天秘壅蘩天霉多年生摹誊;纛耱或亚溱零植耪,全世赛骞 多种,我国约有种,能柱极其恶劣而多变的自然环境中生长,为一种适应原样植 物,其性微甘、涩、寒。褪国藩牮援于滔巍止蛊、溥黪止咳,霹治疗耱炎嚷嗽、咚鼹、咳蛊, 妇女自带增多、男憔阳痿、糖腺病。外用治疗跌打损伤、烧烫伤。近年研究表明红景天具 有强壮、揽缺氧,抗寒冷,抗疲劳,抗微波辐射、兴奄大脑和脊髓、抗衰慧、抗心律失常、治 疗高蒙红缁胞增多瘢、抗病毒、抗癌等功效。困瓣,在军事氍学,航天聪学、运动隈学和保 健医学等方面都具有十分重臻的意义。在临床上红景天除治疗风瀑,类风湿鼯疾病以 终,还弼予治疗霪心病、离蠢嚣髑。匹魏炎等心盘管痰疯。 .药用历史 红景天溃檀麴麟子天然粼方鹃珍炎药雳檀糖,其有重夏懿舞发诊傻,素鸯“蒜 骧人 参”和“雪山仙草”之称。我国古医书上毕有记载,舆有“扶戚固本”的功效。对其应用我 国已有悠久的历史,但过去烹黉是民间终为於品颓治病用,其根茎熬水、泡酒消除疲 劳,抵裤严寒。尤以离原藏族人民应用较广,时阍较长。公元年的著名藏医经典 《四部医典》中就记裁红景天“性?、清热、滋补元气”,称红景天治病舆有神效;《木草纲 嚣》草部第二卡卷孛注鹱蕴景天为“摹率上鑫”,主婺功效是软正匿零、补气养癜、清热滤 肺。自世纪年代起,红景天就得到前苏联科学家的极大重视,随着前苏联的对其 蓬式爵突,经景天震簸穆载进入了囊载基药学褒炎淤段【引。德襄逶避瓣参、裁五燕及 红景天属植物的较为深入的研究提出“邋应原”这一概念,即某些植物之所以具有特殊的 调节功能,是不同瘸爆引起的病态指标鼬正常状淼转变的结果,并认为红景天聪檀物毒国 由鐾点堡堂堕塑土她生堂照擅塞垫嫩生 良好的适应愿榉作用,冀免疫功能优于人参朔刺五热。健们还分离分析了其活性成分, 在此基础上开发出药品和保健制裥。 ,化学成分研究 关予荭豢天纯学藏分酌研究,前苏联撤告很多,并已有综述报道。国内卦遴行化 学成分研究及成分预测试的品种约个,圈内对以下种类研究较多,高山红景天一 瘫。豁秘 ,& 副、睾鑫拳尔红暴天蜮 勰盘。一 。融、长鞭鼗景天 。 醵......、德钦红景天 撼镶。硅.辩、太蕊绞景天黼 蝴蠹掘?【。。露礴? “、狭时基聚天 。 ,亡. 岍茹卜引、喜马红景天 引、蟾里塑景天心 戚...臻??、菱叶红景天?、圣囊塾熊 景天埘、小丛纽景天引、丽江产红景天埘等,并从中先后分离出多种化学物质,主要 含有脂肪、蜡欣、甾醇、酚类化合物、黄酮类、谢机酸、鞣质、蛋白质、水溶性撵发油成分、生 褥藏、红景天多糖等,茏以黄酮类膳多。药瑷学研究裘髓它稻掰禽静红荣天栽、红祭天 素、酪醇、二苯甲基六氢毗啶、超氧化物歧化酶、岩白菜索等为其有散生物 活性成 分,菇岁逐含鸯静微爨元素巍耪氨基羧,英中秘秀天薄努霰氨蒸酸,毽各个释蠲 含有的微量元索及氨基酸种类和含爨差异较大。 姆裹山绞聚天 羲或】茎时的乙黪提取甥经乙醚、正丁醇萃取,瘊褥乙醚,歪 丁醇萃取物反复硅胶柱滕析析出化合物一?,分别撩定为五环三萜类化合物,异熟替 醇,一谷甾酵,胡萝卜蛩,一氰类他合物,红景天昔,一一爨棱醇基一。一’一。一 ?一溉晴阿挝伯糖基一一魁潴葡萄糖苷。裙米尔数景天碗渊? . 。是我国特有红景天晶种之一【引,它生长于新疆帕米尔高原的高海拔、筒寒地区。从 籀拳笨荭蓑天中撵致分离遗个纯台物”,簇孛对羟蒸苯乙酮褥率最高遮%左右,未 得到红景天属中的代表性成分酪醇和红景天甙,得到的是对羟基笨乙酮和云杉甙。对羟 基苯乙酮秘酪簿对羟基苯乙醇帮溪予苯乙蒺纯台瓣,云衫裁与缓景天戴都嚣予苯乙基 化合物的葡萄糖甙,在结构上有相似之处,说明了同属之间的亲缘关系及种与种之闯的 差异。在云南怒江产的长鞭红景天。 酶娃,,.?.珏.。】稷 茎中分离得到个化合物?引,其中化合物被鉴定为新的葡萄糖甙一~一一毗 晡 葡萄糖基一一甲基一戊酸甲酯,命名为长缴红景天索甲,化合物珏和~?首次从该 植糖巾分离得列。多糖广泛存在予自然界,怒多种中擎蓊有效成分之一,舆有多种娥物国 内蒙古医学院硕士研究生学位论文。年 活性,是理想的免疫增强剂,随着对多糖的研究方若未艾,多糖的作用机理及生物功能与 络穆关系静不鼗深入,多糖豹褥致氇不鼗在莘瑟。王褒等“】蓄次运麓徽渡能耱零鬟醇 沉法从红景天 曲.,.根中提取出级景天多糖,并对其 岔量送行了测定。多糖含量为.%,。%。结果裘爨薅微波憩扶缀 景天根中提取多糖,反应速度加快,结聚令人满意。 .对心血管疾瘸的药理研究 .对心胍缺辅、缺血的保护作用 心肌缺血既是某些心血豁疾病的病理结果,也是某些心脏病的发病原因。将小鼠放 予盛有钠石灰静蘑瓣瓶肉密鬻造成的心腿缺氧及注翦垂俸惹时素诱发的,、鼠心虢醭盎 的模型来观察大株级景天 咏对其的保护作用。结果,红聚天高、 中、羝裁爨臻毙显蓑瓣裹囊秘鬻压纛爨糕浃氧嚣力,存活薅麓较生理熬零蕴延长 .;心肌缺血阳性反应数以内波升高、段抬高超过.,或内 波低乎、双始、恻置、心率减慢、?及?延长巍阻蛙反疲较组显著减少. 。结果表明该药对夹闭气管、注射蚤体后叶索引起的心肌缺血缺氧均有保护作用, 从而为红景天临床治疗冠心瘸提供了依据【?。另外,采用结扎犬冠状动脉前黪支,造成 急性心觚梗塞模蝥,瀚察复方斑景天浸涛对心虢裰塞犬血流动力学的影商,结浆复方红 景天.傀、.傀灌胃缭药,能明鼎升高心梗犬左心室内压、左心室内压最大变化 率、心簸瓣壁蠢最太巍流量,戴结果提示英买寄藏经藤力髂焉【。。一爵勰映盘辩,心勰侯 筏耗氧失衡,使心脏收缩功能降低,复方红景天的正性肌力作用对此作了补偿。为了进 一步证翻攀昧红景必大拣缝聚天对犬一玉飘耗氧艟及冠辣慰流量熬影瘸,胃复方丹参片 作为对照,经十二指肠给予只成年杂种犬药物,结果红景天可显著降低麻醉犬心肌耗 氧量和耗氧指数,大热量用药还能降低籁脉阻力,对冠脉直淡量则无明婕影响,并且还有 一定的降低血压和减慢心率的作用【“。为了探讨慢性缺氯对膈肌肌力、膈肌肌电图和 超微结构的影响及笈方红景天为青藏潞原狭叶红景天佐以青海产的沙棘、拘杞组成对 缺氧幢隔搿的保护侔耀,枥垒礞等晗’对魏进行了戮究。结聚,经往缺畿两时灌黻复方筑 景天组大鼠与正常缌比较,其膈肌肌电图频谱中的/和、膈肌最大收缩力、最大强 袁农臻、疲劳捂数稻疲劳霹鬻埒茏显薯穗差舅,龟铙下遣未髓察羁疆爨绥蕤怒微绩穗有 明显的改变。膈肌肌电图频谱中的/和、膈肌肌力及耐力测定魁判断膈肌功能状 态商价值约可靠豹方法,嚣戴,以上表骥复方红暴天对疆瓤起到了曝护终鼹。努羚,毅。 虫鏊遘匿堂堕亟?塑垒堂熊迨塞趔笙 .删;/剂缀口服给予蔷薇红景必提取物能阻止离体灌注的大鼠心股稀灌注减少,还 能阻止在缺撒胍挛缩期的冠脉血漉爨减少和痉挛的发展。静脉输注纳洛酮./埏 完全滚瀵了经爨天豹这嚣裕矮。撵零红录天霹,螽腿耱豫护终鼹霹麓与漤麓爽源缝嚣等 躲有关‘弘。 .抗心肌衰老作用 为了提供缎景天抗心肌老化作用的形态学依据,潘力等【利用透射电镜和体 视学 方法定量计算了级景天素对老龄大鼠心腿怒微结构豹影确,结果显示:以,豁腿细胞秀参 照系,缓耱成分璎麓,瓣质藏分滚少,挺示红景天素蠢绦护心羲瑶枝雏凌髓麴佟焉;戳薹蓬缨 胞为参照系,细胞核和线粒体的密度增加,脂褐索的体密度减少,提示红景天索具有推迟 或减少脂褐索堆积的作用;线粒体体密度棚原纤维体磷度增加,提示红景天索具有改善 供应肌原纤维收缩能量的能力;绒粒体外膜比面积和线粒体内膜嵴比磁积增加,提示 红景天素对转变线越俸黪酝、豫护线泣体疼簇纛皤有楚好熬露露。鸯进一多探毒专红景天 素抗心腿衰麓佟爝,潘力等?又钛怒微结构稻钙离予澈缩施结梅分布上佟了研究。结 果证明,红景天綮具有从整体细胞水平上抗衰老,稳定细胞膜,维护细胞籁魁性,维护心 肌正常舒缩能力,维持线粒体正常结构,为心肌舒缩提供所需妥能量,减少溅推迟脂褐素 出现和堆积作髑,维护细胞核正常绥构,预防细胞挟磅熊裳退豹终用。从射线能谱圈 上掰褥蘩静锈拣溪狡移诗数霹羧发嚣,红景天素买毒稳定镑调控终矮。综会 上述分辑冒 以推论,红景晨能够减轻心肌老化征象,具有预防或题缓心肌老化作用。利用形态与功 能相结合的方法,即化学发光法和法测大鼠皿清和心肌中的超氧化物歧化酶 及过氧化脂质、用透射电镜观察心肌超微结构的变化,其结果为.开拓红景 天索抗心萎建衰慧侮角熬药矮徐璧掇供了囊懿莰撂【。 。撬瘸嚣性心爰惩炎律焉 病毒性心肌炎发病率有逐年升高的趋势,因此,对治疗和预防该疾病的药物研究就 越来越受到璧视。关于高山红景天多糖在培养细胞中抗感染的作用的研 究,已获得了较好的结果。为了避一步观察对照常小鼠和发病小飙鹣一些生理 摇蠡懿影稳,袋溪鞠毫感染懿霆骧耱小嚣溪鍪采逡一莎搽讨薹霹感絷舀瑾楚感染模 型的实际应用效果及其抗?级瘸海的作用机理引。观察了磷、对感染吣小鼠体 重变化的影响、低温游泳时间的影响及抗缺氧的影响,测定了小鼠清中的多种酶 活性及脾脏细胞的活性和血滴中的含量。结果,实验组的体熏增长明显高于 遗鐾查垂堂鏊亟圭叠粪垒兰堕鲨塞塑釜 病毒对照组,游泳时间延长率提高了,%,耐缺氧存活时间比正常对照组延长. %霆渗孛多移黪瓣测定终祭楚,与癍鬻怼爨缓穰毙,?、避氧亿魏酶固、过氧 纯 氢酶水平均褙明显回升,显然对调节三者的活性具有一定作用,即:其既对机 体起到了一定的保护终月叉挪铡了鹣感染居萼起的各静撬悲戎瀣囊退。斑潺谷摹转 氨酶、谷丙转氨酶活性下降,这一结果表明对保护心肌细胞、改善心 肌功能及阻止魄对心肌细胞的侵染和在心肌细胞中繁臻均有一定的临床意义。对小 鼠脾脏细胞添慷检测结聚说嚼,具有激活,、鼠缩胞活馁的能力。由此可 见,又通过调节细胞活性水平从而增强机体自身的免疫功能,达到了扰、,段侵 潦酶基静。力了深入探讨秘撬岛焉溪穗税理,对感染瘸滚缨魏褒鸯拜入感染疯毒 细胞组的越微细胞变化进行了电镜观祭?。扫描电镜观察结果:加入同时感染 映强组豹缨藏表嚣缮褥穗毅予正掌对照缝;先感染这,菇热入辨缀豹郝分缓慈袋 上有空洞,但大部分细胞表面兜整。透射电镜扫描结果:先感染病毒厝加入组的细 胞,太多数霹正常对照组,细胞超徽结搀无改变,仅有少数缨胞呈病变性改变。以上结果 证明,在阻止玛对膜的吸附以及病毒颗粒进入细胞的过程起了关键的作庵。 采用细胞培养技术、中性红染料摄入、细胞病变效应和扫描电镜等几种不同 实验方 法观察了蕊由兹最天酪醇鹣?骶鼹隅感染缁憝鼹绦护作餍矧。为遗一步阐醍 能提高病毒攻击小鼠的机体免疫功能,利用感染小鼠动物模型观察了对此 模垄枣鬣耱薤绥魏翡语瞧及盘滂酶举鹣交诧鹣影璃【。结果,小簸获矮转詹, 舡清旺、和降低,活性增强、脾脏细胞活性增强。结果诋明 戆挺裹病毒攻击小敷瓣规律免疫能力,怒爨了撬凇的终建。通过缨戆癌变麴剿实验 和病毒繁殖实验,研究了抗%感染细胞的作用引。毒性测滗结果表明甜玎 只有在?/越这个浓度下裘现出的抑制缨胞瘸变数量才稳意义,于是选用了不大于 /的做细胞病变抑制实验。结果表明越豫对在细脆串的繁殖具 有抑制作用,为抗病毒作用机理提供了必骚的依据。为了寻找抗病毒机 黼酶薪麴实验裱据,采露了黼/小鬣裁佟了璐感漆心瓤炎凌耪模鹜,辑究了 对模型小鼠免疫机能及体内抗氧化酶活性的影响【引。结果证明:邋过对整 俸硪一零平懿涎菊终薅,壤滏。?模型爱疫菝痣露蔻力,辩鼗抗掇萨毒缀病毒翡 生物学机制之一是对机体内免疫调节促进作用;其二是通过调节心肌细胞内和谷 胱彗默过氯纯物酶?滔蛙来攒键自由基攒伤静作爆。国 堕鐾直鼷堂堕堡?鲤塞生堂熊造塞垫?生 观察红景必水提物对小鼠柯萨奇场?所致瘸毒性心肌炎的治疗作 用【。通过腹腔接释,病毒液建立、妃模型,研究动物在心肌重删黧魄值、心 肌 缓绞锈舞嚣染惫、心骚蘸嗍.一毳国淫力戆改变差异。篓栗:袁,貉魏重臻重 上,给药组与、,对照组闻无盈著性差异;显微镜下观察心肌组织讶片,垤对照组 局部可见广泛增生纤维组织,小鼠淋融单核细胞浸润严激。药物干预组仅有淋巴单核细 胞缦润,无纤维缀织增生,空白对照缀无病理性组织变化;的活性测定照示红景天 缀酶嚣性疆曩降低与?躐:对照缀露避著性差异,一羚荡溺定结果表鹳缎豢天组与 、强忙对照缝蠢照著往差异,说疆数爨天对西,诱导小鼠惫经病毒牲心飘炎蠢一定治疗 作用。 .抗心律失常作用 蔷薇红景天提取物每天。/灌胃给予,连续天对肾上腺素诱鼯的心律失 磐太蔑蒺鳖熊产生撬心霪失霉终鼹婚瓤。弘一嚣冀受薅四阻