女性宫颈感染人乳头瘤病毒基因亚型检测及意义

女性宫颈感染人乳头瘤病毒基因亚型检测及意义 女性宫颈感染人乳头瘤病毒基因亚型检测 及意义 5100中国误诊学杂志2008年7月第8卷第21期ChinJMisdiagn,Jul2008Vol8No.21 表1Survivin和P16在脑星形胶质细胞瘤中的表达[例()] 2.1Survivin表达与星形胶质瘤组织学分级的关系8O例胶 质瘤组织中,47例Survivin表达阳性,阳性率为58.75.Sur— vivin蛋白阳性表达率与组织学分级呈正相关,随着组织学分级 的增高,Survivin表达阳性率升高,低级别组(I,?级)和高级 别组(?,?级)之间差异有显着性(P<0.01). 2.2Pl6表达与星形胶质细胞瘤组织学分级的关系8O例星 形胶质瘤中,35例Pl6表达阳性,阳性率为43.75.Pl6蛋白阳 性表达率与组织学分级呈负相关,随着组织学分级增高,Pl6表 达阳性率下降,低级别组(I,?级)和高级别组(?,?级)之 间差异有显着性(P<0.05). 3讨论 3.1胶质瘤与Survivin基因肿瘤的发生不仅与细胞增殖和 分化异常有关,同时也与细胞凋亡有关.Survivin是近年来发现 的凋亡抑制蛋白家族中的一个新成员,它通过直接抑制凋亡信 号传导途径中的效应因子Caspase一3和Caspase一7的活性,从而 阻断细胞的凋亡过程].Survivin的过表达在肿瘤中直接或间 接抑制了凋亡,在生理状态下凋亡可清除体内衰老和异常的细 胞,有利于保持体内组织的动态平衡.在多步骤肿瘤发生的早 期,各种因素导致的凋亡抑制不利于细胞的继续增殖,还有利 于异常基因的进一步积聚,促使细胞恶性转化,从而有助于肿 瘤的发生进展_2j.本实验中,随着脑星形胶质细胞瘤组织学分 级的升高,Survivin表达率增高,因此认为Survivin基因与星形 胶质瘤的发生,发展有关,可作为肿瘤恶性程度高,预后不良的 指标. 3.2胶质瘤与Pl6基因Pl6基因的抑癌机制主要通过细胞 周期调控来实现的.研究表明,哺乳动物细胞周期受控于一组 叫细胞周期素(cyclin)的蛋白质.而cyclin作用则要通过CDK促 进才能实现.现认为,细胞的正常演进依赖于cyclin和抑制蛋白 的正负调节作用.过度的cyclin的激活或抑制蛋白的缺失都会 导致CDK的过度作用,从而引起细胞恶性变.CyclinD亚型能激 活CDK4从而刺激细胞分裂.Pl6作为抑制蛋白,能竞争性与 cDK4结合而抑制cDK4活性,使细胞不能从G1期进入s期,从 而阻止了细胞增生?3j.本实验中,抑癌基因Pl6阳性率随脑星形 胶质细胞瘤组织学分级增高而降低,表明Pl6基因在抑制星形 胶质细胞瘤生长中有重要作用,Pl6缺失提示肿瘤预后不良. 众多研究表明,星形胶质细胞瘤的形成与发展是一个复杂 的过程,它涉及到一个基因的多方面作用,多个基因的相互作 用及一个或多个基因在细胞周期的不同阶段所起的作用,研究 '它们之间的作用机制,将有助于提高对肿瘤的认识水平. 【参考文献】 [1]ShinS,SungBJ,ChoYS,eta1.Ananti—apopototicproteinhuman survivinisadirectinhibitoro,fcapspase一3and一7[J].Biochem istry,2005,40(4):1117—1123. [2]SatohK,KanekoK,HirotalM,eta1.Expressionofsurviviniscor— relatedwithcancercellapoptosisandisinvolvedinthedevelop— mentofhumanpancreaticductcelltumors口].Cancer,2000,19 (10):1346-1353. [3]冯菲,白辰光.Bcl2和P16在胃肠道间质瘤中的表达及其临床意 义[J].临床与实验病理学杂志,2003,19(6):576—578. 收稿日期:200801—22;修回日期:2008—06—04责任编辑:魏建 女性宫颈感染人乳头瘤病毒基因亚型检测及意义 段纯,胡运月,龙峰 【摘要】目的:对疑似人乳头瘤病毒(HPV)感染的妇女进行HPV基因检测及分型,以探讨其临床意义.方法:采用 杂交捕获法和PCR结合反向寡核苷酸探针点杂交技术,进行高危型HPV筛查和阳性样本基因分型.结果:总检测731 例,HPV阳性率46.1(337/731),高危型HPV亚型检出率最高的是16型(34.1);单一基因型感染占感染人数的 68.5.结论:女性宫颈感染HPV感染率高,单一高危型HPV亚型感染是引起宫颈病变的主要原因. 【主题词】宫颈炎/诊断;乳头状瘤病毒,人;基因型;人类 【中图分类号】R713.4【文献标识码】A【文章编号】1009—6647(2008)21—5100—02 人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是一组特异 感染人皮肤和黏膜的小型双链环状DNA病毒,目前已发现100 多种亚型,其中已经证实高危型HPV感染是宫颈癌的必要病 因[1j.本文采用杂交捕获法(HybridCapture?,简称HC2)和 PCR结合反向寡核苷酸探针点杂交技术(reversedotblot,简称 RDB)对我院宫颈疾病门诊可疑病例进行HPV筛查和HPV基 作者单位:南方医科大学附属深圳妇幼保健院检验科,广东深l 518028 因亚型检测,现如下. 1对象和方法 1.1对象l临床标本来自2006—10/2007—06深圳市妇幼保健 院宫颈疾病门诊731例可疑病例,其中:337例经HC2法检测出 13种高危型HPV,并以PCR/RDB法进行HPV—DNA亚型分 析. 1.2方法 1.2.1高危型HPV—DNA检测收集宫颈细胞浸泡于Pre— 中国误诊学杂志2008年7月第8卷第21期ChinJMisdiagn,Jul2008Vol8No.2151O1 servCyt溶液中(美国Cyt公司),共731例.采用美国Digene公 司HC2高危型HPV感染筛查试剂检测13种高危型HPV亚型 (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58.59,68),取HPVDNA RLu/Cutoff比值?1.0阳性标本337例. 1.2.2HPVDNA提取,PCR扩增,反向斑点杂交,显色反应 提取将标本离心后沉淀物加入PBS悬浮,蛋白酶K,AI一 Buffer,振荡混匀后水浴;加无水乙醇振荡后快速离心;将液体 移人DNA分离柱离心弃其内液体;加AWl液离心;加Aw2液 离心;加AE液离心,收集管内液体即为HPVDNA液.扩增: PCR反应总体积251,含Tris—HC1,KC1,TritonX一100,MgC12, 引物MY09和MY11,dNTPs,TaqDNA聚合酶,UAG酶,引物 China1和China2;反应条件50?15min,95?10min,55?1 min,72?1min,循环4o次,72?延伸5min.反向斑点杂交: (1)预杂交:将固定有探针的尼龙膜浸于2×ssc/0.1SDS液 内,45C15min;(2)变性:将Biotiy1atedPcR产物加入到97?C 的2×ssc/0.1%SDS中5min;(3)杂交:杂交液为2×ssc/0.1% SDS,51hC1h;(4)洗膜:将尼龙膜置于2×ssc/0.1SDS中, 51?C洗膜10min.显色反应:将尼龙膜置于离心管,加入2×ssc/ 0.1%SDS和streptavidin—HRP,室温反应30min.用2×ssc/ 0.1%SDS洗膜3次,再用0.1MSodiumCitrate洗膜;室温摇晃 5min后置于离心管,加入SodiumCitrate和TMB避光反应,5 min后弃反应液,加蒸馏水冲洗终止反应. 2结果 731例疑似HPV感染标本经HC2法筛查检出高危型HPV 337例,阳性检出率为46.1%;337例经PCR/RDB法检测出高 危型HPV13种,低危型HPV4种.高危型主要为HPV16,52, 58,31,68,33,18,66,59等亚型,见表1.低危型为HPV53, cp8304,6,11.337例标本中,单一HPV亚型感染231例 (68.5),双重亚型混合感染83例(24.6),3重亚型混合感 染2o例(5.93),4重亚型混合感染3例(o.89). 表1PCR/RDB法检出HPV高危亚型感染情况 3讨论 目前基于DNA测序和基因差异显示技术确定的HPV型别 约有200多种,其中85种型别的特性已被人们所掌握.本 用PCR/RDB法对337例HC2法阳性标本进行分型,经PCR/ RDB法检测出具体的HPV高危型别,HPV亚型检出率最高的 三种HPV亚型依次为HPV16,HPV52,HPV58;结果表明本试 验最主要的高危HPV亚型是HPV16,与在中国大陆地区HPV 感染患者中其感染亚型报道接近,为目前研制成功预防宫颈 癌疫苗并在我国开展人群疫苗干预=3]提供了可靠的基因理论 依据. 另外,对HPV感染亚型分析显示,24.6的标本同时感染 了2种亚型,6.82的标本感染了3种以上亚型;68.5的标本 为单一亚型感染,说明单一的高危型HPV亚型感染是引起宫颈 病变的主要原因,而多种HPV亚型混合感染在宫颈病变中的作 用也不可忽视.多种高危型HPV亚型混合感染是否会加速宫颈 病变的速度和程度,高危型HPV与低危型HPV同时感染时,二 者是否会对彼此导致宫颈病变起到一定的协同促进作用,这些 问题尚有待进一步研究. 【参考文献】 [1]何桂荣,李芳芳,何林,等.反向斑点杂交技术应用于人乳头瘤病毒 基因分型的研究EJ].中华检验医学杂志,2006,29(7):658. E2]陈家林,邓超干,许晓清,等.基因芯片对尖锐湿疣患者HPV的检 测和基因分型EJ].河北医学,2006,12(2):105—107. [3]石菊芳,吴瑞芳,刘植华,等.深圳妇女人乳头瘤病毒的型别分析 [J].中国医学科学院,2006,28(6):832—836. 收稿日期:2008,02—13;修回日期:200806—04责任编辑:魏建 反复感染患儿血清锌含量与免疫功能相关性分析 张红英,邓提虎 【摘要】目的:探讨反复呼吸道感染(RRI)患儿血清锌含量与免疫功能的关系.方法:检测48例RRI患儿和2O例健 康儿血清锌含量及其免疫功能.结果:RRI患儿血清锌显着低于正常组(P<0.01),RRI患儿CD.,CD,CD/cDs,IgA, INF显着低于正常组(P<o.o5,0.01),CD8却显着高于正常组(P<o.01),RRI患儿血清锌CD3,CD,CD/cD8,INF正 相关,与CDs负相关.结论:RRI患儿存在免疫功能低下,紊乱,这种变化可能与机体缺锌有关. 【主题词】呼吸道感染/血液/免疫学;锌/血液;人类;婴儿;儿童;儿童,学龄前 【中图分类号1R725.6【文献标识码】A【文章编号】1009—6647(2008)21—5101—02 为探讨反复呼吸道感染(RRI)与血清锌及免疫功能的关 系,我们对2o05/2o06年间门诊及病房收治的48例RR1患儿血 清锌,T淋巴细胞亚群,免疫球蛋白,干扰素进行检测分析.现 作者单位:广西壮族自治区第二人民医院儿科,广西桂林541002 报道如下. 1对象和方法 i.i对象选择符合中华医学会儿科分会第23届国际儿科大 会各专业及专题学术交流概述制定的诊断?I~RRI患JD48 例,其中男22例,女26例,年龄8月龄,10岁,发病平均年龄3.5