硒酸锌金属自显影技术检测游离锌离子在小鼠卵巢的分布

硒酸锌金属自显影技术检测游离锌离子在小鼠卵巢的分布 硒酸锌金属自显影技术检测游离锌离子在 小鼠卵巢的分布 解剖科学进展ProgressofAnatomicalSciences2007,13(4):346,347.352 硒酸锌金属自显影技术检测游离锌离子在小鼠卵巢的分布 张莉,池志宏,王月,牛犁,王占友 (1.中国医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,辽宁沈阳110001;2.辽宁医学院基 础学院组织胚胎学教研室,辽宁锦州121001) 【摘要】目的研究游离锌离子在小鼠卵巢的定位分布.方法应用硒酸锌金属自显 影技术(znSe.~.MG)检测 小鼠卵巢内的游离锌离子分布.结果游离锌离子在卵巢内分布广泛,在原始卵泡, 初级卵泡,次级卵泡,闭锁 卵泡以及问质细胞中都有大量棕黑色的AMG染色颗粒.结论小鼠卵巢内含有丰 富的游离锌离子,锌离子可能参 与了卵泡的发育以及性激素的合成. 【关键词】游离锌离子;硒酸锌金属自显影技术;卵巢 【中图分类号】R335+.5【文献标识码】A【文章编号】1006—2947(2007)04—0346 —02 TheDistributionofFreeZincIonsinMouseOvariesbyZinc SelenideAutometallography ZHANGLi..,CHIZhihong,WANGYue,NIULi,WANGZhanyou (1.DepartmentofHistologyandEmb~ology,ChinaMedicalUniversity,LiaoningShenyang 110001;2.DepartmentofHistologyand Emb~ology,LiaoningMedicalCollege,LiaoningJinzhou121001China) 【Abstract】 ObjectiveToinvestigatethelocalizationoffreezincionsinmouseovaries.MethodZincselen ide autometallography(ZnSe'1wasusedtodetectfreezincionsinmouseovaries.ResultsExtensi veAMGstainingwas observedallovertheov~es,includingtheprimordialfollicles,primaryfollicles,secondaryfo llicles,atreticfolliclesand interstitialtissueofovaries.ConclusionLotsoffreezincionsinovariesmaybeinvolvedinthe developmentofthe folliclesandthesynthesisofsexhormone. 【Keywords】Freezinc;Zincselenideaut0metall0graphy;Ovaries 锌是人体必需的微量元素之一,在维持机体正 常生理功能中起重要作用….研究表明,锌离子在人 体组织内分布广泛,尤其是在神经系统中分布较 多.已经证实,在大脑的海马及脑室室管膜,小 脑,神经节,坐骨神经等处都存在着大量游离锌离 子.而锌离子在卵巢内的分布却鲜见报导.我们 利用硒酸锌金属自显影技术,检测卵巢中游离锌离 子的分布. 1材料与方法 1.1实验动物 雌~CDl/Jx鼠,体重18—22g,由中国医科大学实 验动物部提供.分笼饲养,常规饮食. 1.2硒酸锌金属自显影技术(ZnSe 动物首先经腹腔注射0.1%硒酸钠(15mg/kg),存 【收稿日期】2007—07—12 【基金项目】国家自然科学基金资助项目(No,30370452) {通讯作者Towhomcorrespondenceshouldbeaddressed) 活1.5h后腹腔注射4%戊巴比妥钠麻醉动物,然后用 蠕动泵经左心室灌注生理盐水和2.5%戊二醛150ml, 取双侧卵巢,2.5%戊二醛后固定3h.标本置于30%蔗 糖液4口c冰箱保存过夜.恒冷箱制备10Ill的冰冻切 片,切片置于AMG孵育液并在恒温(26?)振动水 浴箱内孵育60min,封片后,在光学显微镜下观察. 2结果 光学显微镜下观察卵巢中游离锌离子的分布. 结果发现:AMG反应产物呈棕黑色颗粒状,在整个 卵巢中广泛分布(图A).原始卵泡及初级卵泡中央 的卵母细胞及外周的卵泡细胞中均分布有大量的棕 黑色颗粒(图B,c).次级卵泡卵丘中央的卵母细 胞,卵泡液中以及外周的颗粒细胞中均分布有大量 的棕黑色颗粒(图D).闭锁卵泡及间质细胞中也见 有大量AMG染色颗粒存在. 兰至垒鲞笙塑张莉等硒酸锌金属自显影技术检测游离锌离子在小鼠卵巢的分布.347. ,n't. . 毛?? 誊. Figs.Thedistributionoffreezincinmouseovariesbyzincaut0metall0graphicstaining.A:Lo tsofAMGpositivegranulasinthe ovaries,×100.BandE:AgreatquantityofAMGpositivegranulasintheprimordialfollicles(B1andatre ticfollicles(E).×1000.C andF:Agreatdealofbrownish-blackgranulasintheprimaryfollicles(C1andinterstitialtissu eofovaries(F,×400.D:AbundantAMG positivegranulasinthesecondaryfollicles,×200. 3讨论 锌是机体必不可缺的微量元素之一,有重要的 生理功能.研究表明,锌参与DNA复制,RNA转 录,核酸及蛋白质代谢,影响细胞增殖及分化,增 加机体免疫力,具有抗氧化作用;此外,锌还是多 种酶和蛋白质的重要组成成分,并对酶活性有催化 作用:因此,锌对维持机体的正常生理功能意义重 大. 金属自显影技术(AMG)是检测细胞内外游离 锌离子的有效手段,光学显微镜下观察AMG染色颗 粒呈棕黑色.我们发现,在卵巢中存在大量的游离 锌离子,其棕黑色颗粒产物分布广泛.在原始卵泡 及初级卵泡中央的卵母细胞及外周的卵泡细胞中均 分布有大量的棕黑色颗粒;次级卵泡卵丘中央的卵 母细胞,卵泡液中以及外周的颗粒细胞中均分布有 大量的棕黑色颗粒;闭锁卵泡及间质细胞中也见有 大量AMG染色颗粒存在.可见,锌离子可能在整个 卵泡发育过程中起重要作用.此外,由于次级卵泡 的卵泡膜中的膜细胞可以合成雄激素,该激素透过 基膜,在颗粒细胞内能转化为雌激素并进一步释放 进入血液,作用于外周的靶器官及靶细胞.因此, 游离锌离子在次级卵泡内的广泛分布也提示了锌离 子可能参与了雌激素的合成与分泌. 近年来有报导表明,锌与生殖关系密切.锌作 为类固醇合成酶必需成分或活化剂直接或问接地与 性腺中的特殊受体结合而影响促性腺激素.体内锌 离子水平降低可以影响促性腺激素的分泌,从而使 卵巢功能减退,第二性征及生殖器官发育不全,出 现闭经,性功能减退和不孕.此外,锌与卵巢癌的 发生密切相关,卵巢癌患者血清中锌含量明显低于 正常对照组.可见,锌对维持生殖系统的正常生 理功能起着重要的作用. (下转第352页) ? 352?解剖科学进展2007年第13卷第4期 RGN,SCN2b,Sortilin一1,Synapsin2BmRNA与衰 老,记忆和认知功能的相关性. 本研究发现,这13个基因的mRNA在不同月龄的 小鼠海马和额叶中均有表达,但水平各异,经统计 学处理,仅SCN2b基因SAMP8/b鼠额叶的幼年组分 别与成年组和老年组中的表达有统计学差异 (P<0.05),其他12个基因的mRNA在3个观察时间 段的表达无统计学差异,提示这12个基因可能不参 与SAM/b鼠的海马和额叶衰老过程,但不能排除它 们在正常生理功能维持方面的作用.SCN2b是电压 门控Na通道的一个亚型.许多文献报道SCN2b与癫 痫的发作有一定的关联,但是目前,国内外未见关 于SCN2b在脑老化及相关疾病中作用的研究报道. 经典的电生理学早已揭示电压门控Na通道在神 经细胞动作电位的形成和传播过程中起着极其重要 的调控作用.电压门控Na通道是神经系统中动作 电位的主要承担者,主要介导可兴奋性细胞信息的 快速传递.rB?型在大鼠整个发育阶段均表达,并在 脑的吻侧区域明显表达.电压依赖性钠电流的增 大,会造成钠离子内流增加,使得神经元胞内钠离 子浓度增大,从而抑制Na,K*-ATP酶的活性,进 一 步增大了胞内钠离子浓度,加速了能量消耗.另 一 方面,胞内钠离子浓度的显着增加,又会影响细 胞膜上的Na/Ca交换,使得神经元胞内钙离子浓度 增加,导致蛋白酶,磷脂酶,核酸内切酶活化,引 起蛋白质,磷脂和DNA损伤.而且还会启动耗能代 偿机制,导致与功能有关的系统紊乱,甚至诱导细 胞凋亡.~[INa通道在神经细胞的过表达会导致与 功能有关的系统紊乱,甚至诱导细胞凋亡. 本实验研究得出:SCN2bmRNA的表达在成年组 额叶中比幼年组的明显增高,老年组比幼年组也明 (上接第347页) 【参考文献】 [11ChimientiF,AouffenM,FavierA,eta1.Zinchomeostasisregu—lating proteins:newdrugtargetsfortriggeringcellfate[J].CurrDrugTargets, 2003,4(4):323-338. 【2】王占友,何峥,刘琰.游离锌离子轴突运输的实验研究【J1.中国组织 化学与细胞化学杂志,2003,l2(2):131—133. 【31池志宏,柳玉霞,张莉,等.znT7及游离锌离子在小鼠室管膜和脉 络丛细胞的分布『J1.解剖科学进展,2007,13(1):59—61. 显增高.提示SCN2bmRNA的增龄性表达变化可能与 衰老相关的功能减退有关,SCN2b与快速老化小鼠 额叶的老化有关. 综上所述,随着SAMP8/b鼠月龄的增加,当其 度过生长期后快速老化,大脑皮层神经元脱落,脑 萎缩并伴随出现学习,记忆功能障碍,而此时 SCN2b基因的表达却反而增加,由此可以推测. SCN2b与衰老,记忆和认知功能相关,但其具体机 有待进一步深入研究. 【参考文献】 f1】TakedaT,HosokawaM,TakeshitaS,eta1.A/leWmurinemodelof acceleratedsenescence[J].MecAging,2004,17:183-194. 【2】OkumaY,NomuraY.Senescenceacceleratedmouse(SAM)asan animalmodelofseniledementia:phar-macologica1.neurochemical andmolecularbiologicalapproach【J1_JpnJPharmacol,1998,78:399— 404. 【3】NomuraY,OkumaY.Age—relateddefectsinlifespanandlearning abilityinSAMP8mice[J1_NeurobioAging,1999,20:111-115. I4】LehmannG,BudovskyA,MuradianKK.Mitochondrialgenomean- atomyandspecies—specificlifespan[J].RejuvenationRes,2006,9(26) :223—226. 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