止血中草药断血流的研究进展

止血中草药断血流的研究进展 ?454? 安 徽 医 药 A nhu i M ed ica l and Pha r aceu tica l Jou rna l 2007 M ay 11 5 m ?小专论 ? 止血中草药断血流的研究进展 1 2 1 2 程 霞 陈国广 石绍华 1. 南京工业大学制药与生命科学院 江苏 南京 210009 2. 江苏恩华药业集团 江苏 徐州 221007摘要 : 断血流是一味有着较高医用价值的止血类中草药 。本 风轮菜皂苷 A 7 10 kg粗粉 ? mg皂苷 A 。 600文综述了断血流近年来的研究进展 包括化学成分 、 有效成分 2. 2. 2 大孔吸附树脂纯化断血流总皂苷 该是将断血的提取工艺 、含量测定 、药理作用 、临床应用等 并提出了运用 流粉末通过乙醇回流 得断血流总皂苷提取液 回收乙醇 加新技术方法进行综合研究的内容 。 水溶解后用水饱和的醋酸乙酯萃取 取含断血流总皂苷的水关键词 : 断血流 有效成分 药理作用 临床应用 纯化断血流总皂苷 。 层溶液用 D101 大孔吸附树脂进行富集 、 洗脱时 用蒸馏水 、 乙醇 、 乙醇各以 3BV BV 为柱床 30 70 1 基源 沉降体积 以 1BV / h的速度依次洗脱 收集 70乙醇洗脱部 断血流 Herba C linopod ii最初是从安徽省发掘出来的民 位 70乙醇洗脱部位总皂苷洗脱率为 86. 8 。本法具有较间使用的草药 。其入药商品为唇形科植物风轮菜 C linopod i2 好的纯化效果 8 。um chenensis B en th. O. Kuntze 与多头风轮菜 荫风轮 C li2 3 断血流的质量控制nopod ium polycepha lum V an iot C. Y. W u et Hsuan 的干燥地上 随着对断血流活性成分研究的不断深入 用于鉴别和测部分 。风轮菜始载于明《 救荒本草 》 1406 年 荫风轮始载于 定其含量的方法也有了较大的提 风轮菜分布于浙江 、 江高 。最初报道的是采用分光《 植物名实图考 》 1848 年 西 、 福建 、 中 光度法测定断血流皂苷的含量 目前 2005 版《中国药典 》 广东 、 广西 、 贵州等地 荫风轮 主要分布于江苏 、 安徽 、 广西 、 断血流鉴别项下的是采用薄层色谱法用醉鱼草皂苷 ? b贵州 、 云南 、 四川等地 。 2005 版药典一部收载的断血流即为 曾用名 : 断血流皂苷 A 作为对照品 进行有效成分的鉴定 。上述二种原植物 1 。 3. 1 断血流制剂质量控制 针对断血流不同剂型 包括片2 化学成分及有效成分的提取与分离 颗粒剂 、 剂、 胶囊等 均有采用 HPLC 法进行含量测定 口服液 、 中药断血流的药用植物风轮菜和荫风轮中 含有皂苷类 、 的研究报道 9 其色谱条件 、 供试品溶液准备及测定 对照品 、黄酮类 、 氨基酸类 、 多糖类 、 酚性物质和挥发油等化合物 其中 方法基本与 2005 版《 中断血流片项下含量测定相 中国药典 》皂苷类和黄酮类化合物为断血流止血 、 抗炎的有效成分 2 3 。 同。2. 1 化学成分 3. 2 断血流原药材的质量控制 梁爱君等选择断血流皂苷2. 1. 1 黄酮类 已从风轮菜中分离出多种黄酮类化合物 。 A 作为指标成分 采用反相高效液相色谱法 HPLC 首次对包括香蜂草苷 dydim in 、 橙皮苷 hesperidin 、 异樱花索 2 2 7芸 断血流药材进行了含量测定 10 本法色谱柱为 D ISCOVERY香糖苷 isosakuranetin 2 2rutinoside 、 7 洋芹 芹菜素 ap igenin 、 C18 4. 6 mm × mm × μm 流动相为甲醇 2 73 ? 流 250 5 水 27素 1elereoin 、 皮 素 2 2 香 苷 nairutin 和 江 户 樱 花 苷 柚 7芸 p runin 4 。 速 0. 8 m l?m in - 1 检测波长 250 nm。结果断血流皂苷 A 在 -12. 1. 2 皂苷类 从风轮菜中分离得到了风轮菜皂苷 clinop 2 15. 0 ,39. 0 mm ?L 范围内呈良好的线性关系 平均加样回odiside B、 、 、 、 、 C D E F G 5 6 从荫风轮中分离出风轮菜皂苷 收率为 98. 5 RSD 为 1. 3 n 9 。该 试 验 结 果 表 明 clinopodiside A。 灵 敏 、 HPLC 法测定断血流皂苷 A 含量的方法简便 、 重现性2. 1. 3 挥发油 荫风轮中挥发油成分约占 0. 13 文献报 好 。 2005 版《 中 中国药典 》 断血流项下没有含量测定项 。为道的已鉴定出的挥发油成分有 44 种 主要是反式石竹烯 、 柠 使其质量标准更加科学可靠 有必要为原药材建立含量测定檬烯和匙叶桉油烯醇等 。 指标 并依此更好地控制原药材的质量 。本法实测得断血流2. 1. 4 其他成分 除上述成分外 从风轮菜中还分离出了 皂苷 A 在断血流药材干品中的含量约为 0. 03 ,0. 07 已β2 甾醇 、 谷 氨基酸 、 香豆精和鞣质等成分 从荫风轮中还分离 超过万分之一 按国家食品药品监督管理局的新药质量标准出香豆酸 、 树脂 、蛋白质等成分 。 研究技术要求 此成分可独立作为含量测定指标 。2. 2 有效成分的提取与分离 4 药理作用2. 2. 1 风轮菜皂苷 A 的提取分离纯化 2 醇回流柱层析法 乙 4. 1 一般药理学试验研究 彭代银等进行了断血流皂苷的风轮菜干燥全草粗粉 80乙醇 EtOH 回流提取 提取液减 一般药理学研究 其目的是为了进一步探讨断血流在药用基压回收 EtOH 至干 得浸膏 。 ? 2 kg浸膏 转溶1. 础上的安全性 。该研究结果表明 在药效剂量下断10 kg粗粉 血流总苷于 50 ? 热水中 过滤 水溶液用 EtOAc 提尽黄酮类成分 继用 小鼠的神经系统 家猫的呼吸系统及狗的心血管系统 对大鼠 、水饱和得 n2 BuOH 萃取 合并 n2 BuOH 萃取液 减压回收溶剂 均无明显影响 体现了本品有较高的安全性 。在子宫活动试得浸膏 10. 8 g 将 10. 8 g 浸膏进行低压柱层析 硅胶 H500 验 g CHCl3 2 eOH 2 2 O 中发现 断血流皂苷对正常子宫有兴奋作用 但这一作用有 7 ?? 3 洗脱 每份收集 100 m l薄层 M H 3 0. 利于止血药效发挥 11 。检测 20 , 28 份 合 并 用 硅 胶 H200 g 再 进 行 常 压 柱 层 析 4. 2 药效CHCl3 2Et Ac 2 eOH 2 ??洗脱得粗皂苷 M eOH 重结晶得 O M 1 2 4. 2. 1 止血作用 断血流的止血作用主要表现在直接 创 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 安 徽 医 药 A nhu i M ed ica l and Pha r aceu tica l Jou rna l 2007 M ay 11 5 m ?4 5 5 ?伤 止血 、 间接促进凝血 、 收缩血管三个方面 。 1 家兔颈动 显提高钴 60 照射后的存活率 。脉切口 、 股动脉切口 家兔肝脏 、 后肢皮肤 、肌肉切割 外敷断 4. 3 毒性作用 风轮菜用体积分数为 75的乙醇 荫风轮 、血流粉 止血作用均强于淀粉 P lt 0. 01止血时间均比云南白 提取 提取物配成体积分数为 50的水溶液 其 LD50 gt 20 g?药明显缩短 P lt 0. 01 。 2 对进行了 6 d 断血流醇提液灌 -1 荫风轮用体积分数为 27的乙醇提取 。提取 kg 。风轮菜 、胃的小鼠进行断尾出血时间 、 出血量和凝血时间测定 毛细 坏 物配成体积分数为 50 的水溶液 可使家兔耳出现红肿 、玻璃管法 试验 。结果经方差分析 断血流缩短出血时间 、 减 死等现象 但短时间内即可恢复正常 。小鼠灌胃风轮菜及荫少出血量比生理盐水 阴性对比 作用明显 P lt 0. 01 断血 风轮用体积分数为 27的乙醇提取 提取物配成体积分数为流缩短出血时间 、 减少出血量与云南白药 阳性对比 相比差 -1 50的水溶液 。其 LD50均大于 20 g?kg 。小鼠灌胃给予不异无显著性 P lt 0. 01 而凝血时间试验表明断血流与生理 同剂量的断血流浸膏 其 LD50为 14. 6 ? 4 g?kg - 1 。 0. 6 g 2.盐水组的凝血时间差异无显著性 P lt 0. 05 凝血时间分别 ?kg - 1断血流浸膏对小鼠的发育有一定促进作用 而 3. 6 g?为 : 生理盐水 183. 0 ? 35 s云南白药 126. 0 ? 7 s断血 57. 46. - kg 断血流浸膏则对小鼠的发育有一定的抑制作用 但无明流为 165. 0 ? 47 s。此结果提示断血流的止血作用不在于 51. 显差异 且断血流浸膏对小鼠的血象及肝肾功能无明显不良促进凝血 。但有相反结果文献报道 断血流总苷剂量 20 mg 影响 。剂量在 20 ,100 mg?kg - 1内的断血流浸膏不会影响家?kg - 1和大剂量 40 mg ? kg - 1 相当临床试用量按体重计 6. 兔心电图波形及心电传导时间 只有超过 120 mg?kg - 1时 才67 倍和 13. 33 倍 用于小鼠 可明显缩短小鼠断尾出血时间 会产生致命的影响 。断血流浸膏对家兔血压也有相似的作减少出血量 并缩短凝血时间 。家兔大剂量 10 mg?kg - 1和中 用。剂量 5 mg?kg - 1 相当临床试用量 3. 34 倍和 1. 67 倍 可使血 5 临床应用浆复钙凝血时间 PRT缩短 10 mg? kg - 1也可明显缩短凝血 断血流为 70 年代从民间验方筛选 经临床验证后被国家酶原时间 SPT和白陶土部分凝血活酶时间 KPTT 但对大 药典录入的少数几个单味药之一 其疗效确切 安全性高 被鼠优球蛋白溶解时间无明显影响 表明本品可通过激活凝血 公认为中医临床首选口服妇科止血药 。临床上断血流制剂广系统 促进纤维蛋白形成而凝血 从而发挥止血药效 。 3 取 泛用于治 单纯性紫癜 、 原发性血小板减少性紫癜家兔 8 只 用断血流醇提疗各种出血 、 物 20水溶液进行离体兔耳血管灌 等症 。流法试验 每次给药 0. 5 m l测定 20 m in 内血流量变化 与给 5. 1 治疗子宫出血 100 例使用宫内节育器后的妇女服用药前比较 。结果经 F 检验 风轮菜可使灌流量明显减少 取 断血流颗粒 月经量减少 95 例 无效 5 例 。未服断血流颗粒大鼠 24 只分成 4 组 断血流醇提物配 水溶液进行大 的 100 例妇女中有效 70 例 无效 30 例 。分析认为断血流成 0. 8 颗鼠在体肾脏灌流试验 每次给药 0. 1 m l观察给药前后灌流压 粒减少月经量的机制可能与减少子宫内膜的各种生化介质如差值和灌流压提高值 。结果经 F 检验 风轮菜明显提高灌流 纤溶原激活物 、 前列腺素和溶酶体等的释放有关 13 。口服米压 给药前后灌流压差值为 78. 66 ? 04 mmHg流量压提高 13. 索后服用复方断血流胶囊组与不服复方断血流胶囊组比较流11814 。此实验结果提示风轮菜止血作用主要在于收缩血 产效果 、 转经时间 月经恢复的平均天数 、 胚囊排出的平均管 。刘青云等研究发现醇提风轮菜提取物能比水提物更好的 时间无显著差异 而两组比较阴道出血时间 、 阴道出血量少于提高家兔离体胸主动脉 、 子宫动脉 、 肺主动脉 、 肾动脉 、 门静脉 自身月经量或相似的患者比例 、 ,24 h 胚囊排出时间等均 12等血管的收缩力 其中对子宫动脉作用最强 其次为肾动脉 、 有显著性差异 14 。米非司酮 、 米索前列醇配伍断血流胶囊用胸主动脉 、 肺主动脉 。起作用于去甲肾上腺素比 作用缓慢 于终止早孕可明显减少出血量 15 。服用断血流片的 49 例功温和而持久 硝普钠可拮抗风轮菜提取物的收缩血管作用 。 能性子宫出血患者中有效 39 例 服用安络血片的 20 例患者4. 2. 2 抗菌作用 采用平皿稀释法 对风轮菜和荫风轮进 中仅 4 例有效 。说明断血流片治疗功能性子宫出血有良好疗行不同浓度抗菌作用测定 培养观察 48 h结果显示风轮菜和 效。荫风轮的水提取液对金色葡萄球菌 、 绿脓杆菌 、 肺 痢疾杆菌 、 5. 2 治疗血友病 服用荫风轮片可治疗血友病 防止或减少炎双球菌 、 大肠杆菌有一定的抑制作用 且最小抑菌浓度为 出血 16 。1 ? ,1 ? 。 10 20 5. 3 治疗宫外孕 有人试用单味断血流 荫风轮 治疗宫外4. 2. 3 抗炎及免疫作用 荫风轮总皂苷对大鼠足趾肿胀 、 大 孕取得了较好效果 开创了单味草药治疗宫外孕的先例 17 。鼠炎性肉芽肿 、 小鼠皮肤及腹腔毛细血管通透性增高有抑制 5. 4 治疗其 他疾病 断血流片对遗传性毛细管扩张 、 过敏性作用 并可兴奋大鼠肾上腺皮质 表现出抗炎作用 12 。荫风 紫癜 、 单纯性紫癜等病症也有较好的疗效 。民间还用断血流轮总皂苷能抑制巨噬细胞吞噬功能 升高小鼠血清 IgG水平 、 治疗感冒头痛 、 痢疾 、 乳腺炎 、 荨麻疹 、过敏性皮炎 、黄胆型肝降低血清补体总量 。荫风轮浸膏对大鼠蛋白性关节肿 、 甲醛 炎、 胆囊炎等症 。性关节肿 、 小鼠耳壳炎症 、 毛细血管通透性增高有明显抑制作 5. 5 不良反应 少数患者有轻度恶心 、 腹泻现象 .