传统动物免疫法和硝酸纤维素膜皮下包埋免疫法的比较

传统动物免疫法和硝酸纤维素膜皮下包埋免疫法的比较 传统动物免疫法和硝酸纤维素膜皮下包埋 免疫法的比较 200竖!Q:!塑塑照佥?煎瘴杂志(JCellMolImmuna1)2001:17(2 文章编号:1007.8738(2001)02.200-01 传统动物免疫法和硝酸纤维素膜皮下包埋免疫法的比较 丁天兵,任育华,汪海丹,于淑湘 {第四军医大学'微生物学教研宣,'九五级学员,陕西西安710032;西安交通大学附 属第二临床医院干部病房) 美蕾词动物免麦;佐荆;硝酸圩雏素:包埋 中圈分类号:R392l1文I吐标识码:B 在建立单克隆抗体杂交瘤细胞系的过程中,动物免疫是 极其重要的一个环节,也是决定融合盹否成功的首要因素. 传统动物免疫的基础免疫需制备佐剂{通常为福氏佐荆).尽 管已有市售的佐荆产品.但要制成油包水型的免疫翻剂仍然 相当费时费力此外,传统免疫法的缺点还在于免疫原的用 量及其活性在制备免疫翩荆的过程中,可能都有不同程度的 损失而影响免疫效果.为此.我们在橱备单克隆抗体杂交瘤 细胞系时,采用硝酸纤维素{NC)膜皮下包埋法(将免疫原直 接点至Nc膜上),分别使用了两种不同的免疫原对小鼠进行 免疫,并.与传统免疫法进行了比较. 1材料和 1.1材科硝酸纤维素{NC)膜.购自华美生物公司 免疫原:?自制mAb2H4和2F2腹水以辛酸一硫酸铵沉淀 法"纯化.?原核选的Doppel蛋白由秦克锋博士提供. 并经离子交按柱SP—sephm纯化】.福氏完全佐荆及福 氏不完全佐剂均为自橱.实验动物为6wk龄的雄性Balb/c 小鼠,由本枝实验莉物中心提供. 1.2方涪 1.2.1抗原膜的科鼻将Nc膜剪成约8mm×3nun的小 条,用微量移漉器将已定量的纯化免疫蛋白1次或多次点 加在NC膜的反光面上,免疫原mAb2H4/2F2剂量为100 /只,共4只;Doppd蛋白为30I,Lg/只,共3只.于室 温下自然干燥或于37SC孵糖中烘干后,将免疫用小条措纵 轴方向对折两次{反光面向外),做成3mmx2mm的小片 备用 122动糟免疫传统莉物免疫方法按参考文献b]进行. 免疫剂量mAb2H4/2F2各为800/只,共2只1Doppel 为50g/只,共3只.NC膜皮下包埋免疫法的具体操作 如下:用750mL/L酒精消毒小鼠一侧腹股沟皮肤,用眼 科剪剪开一仅及皮下约2man的小口,将折叠好的NC膜用 眼科慑沿皮下向内上方送^腹壁皮肤的深处,慢慢退出眼 科镊,蒲保NC膜片}l|留在腹壁皮下,切口再次酒精消毒, 不必缝合,待其自莉盘合.2wk后,在另1侧腹股沟处重 复以上操作追加免疫均同传统免疫法.免疫效果采用间 接EL【sA进行比较. 2结果 以Doppel和2H4/2F2蛋白作为免疫原,分别用传统免 收孵日期2O00-04-05;格目日期:2000-09-13 作者简介:丁天兵(1966-),男,江蓐省南京市人,讲师,博士 西安卞告乐西摹17号.Te1.(029)3374526 疫法和NC膜皮下包埋免疫法免疫小鼠.免疫结束后,取血清 进行检测,以待检孔与阴性对照孔光吸收A值的比值? 21为阳性.检测结果如下表. 表1两种免麦方法免疫效果的比较f) 表1显示,用Nc膜包埋法免疫Doppel的小鼠均产生 了相应的抗体,阳性率为100%.高于传统免疫法 f66.67%).以2H4/2F2为免疫原,用两种方法进行免疫 后.均呈阳性,但NC膜包埋法的"值均明显高于传统 免疫法.统计学处理结果表明NC膜包埋免疫法的免疫效果 显着高于传统免疫法. 3讨论 鉴于传统动物免疫法的基础免疫比较费时,费力.实 疫的免疫原量及活性可盹有不同程度的损失,所以人 l『j一直在寻找更简便的缓释载体.李元等?曾将电泳后的 少量蛋白转印至Nc膜后,再皮下包埋免疫动物,取得了较 好的效果.我们将其方法稍做改动{即将免疫原直接点加在 NC膜上),然后皮下包埋免疫.也获得较好的免疫效果. 在mAb2H4/2F2免疫中,用100~g/.q小鼠的包埋免疫就 可选到传统免疫800g/只小鼠的免疫效果,而且血清 ELISA检测的A.*值也均高于传统免疫法与传统方法相 比较,包埋免疫有以下优点:?纯化的免疫原毋需做任何 盘t理直接被带^动物体内,吸附了免疫原的Nc膜可起到缓 释荆的作用,抗原的活性和敷量都无损失,因而免疫效率 商.具体表现为免疫原用量少,效价商和动物产生抗体的 阳性率高.因而也相应地可以缩短免疫时间.对于一些手 头蛋白量稀少的动物免疫,这种免疫法的高效性舅{J显得尤 其重要.?包埋免疫法操作简便,快速.在本实验中,两 种不同抗原的免疫都提示了相似的结论,表明埋膜免疫法 具有较好的适用性.我们初步认为,rqc膜皮下包埋免疫法 可替代传统的免疫法而作为实验室常规的动物免疫法. 参考文荫 【lJMc~eneyMMI?oh^,^mpln?.c|L—0jc噼to rl衄眦哪吐from…andiI?nu[".帅qg口 198796{2):271—278 【2JQm.=1YB?gD,Y'口gY,c.pP盯(II)一i?duc~mtiom,lcIl 弹卸d口qc-ta…n?b如tand1InP:dkctdpfmein n[J).删凸叩,2?O.2"(25):19121—19l31 [,]棘恚主尊.宴用单克隆抗体技术[M]西安:陕西辩学技木出版社. 1991:9一IO. [4】车元.马文摄,白光軎.等.空斑岳韩进具有中和}舌性的抗表原件牯连蛋 白m^b(J).蛔臆与分于免疫学杂击.1996,I2J:49—52