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为什么大多数内切酶被称为"限制性内切酶

2019-01-09 9页 doc 26KB 89阅读

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为什么大多数内切酶被称为"限制性内切酶为什么大多数内切酶被称为"限制性内切酶 No.16 为什么大多数内切酶被称为“限制性内切酶。 ---(问答题) 据Science杂志报道:一种重要的遗传疾病可由导致DNA中碱基替换的诱变剂在体外进行人工诱导。设计一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。 ---(问答题) 为了绘制长率3.0kbBamHI限制性片段的限制性图谱,分别用EcoRI、HpaII、EcoRI+HpaII、消化这一片段的三个样品,然后通过凝胶电泳分离DNA片段,溴化乙锭染色后观察DNA带型(图15(2)。请根据这些结果,绘制一个限制性图谱,要标明E...
为什么大多数内切酶被称为"限制性内切酶
为什么大多数内切酶被称为"限制性内切酶 No.16 为什么大多数内切酶被称为“限制性内切酶。 ---(问答) 据Science杂志报道:一种重要的遗传疾病可由导致DNA中碱基替换的诱变剂在体外进行人工诱导。一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。 ---(问答题) 为了绘制长率3.0kbBamHI限制性片段的限制性图谱,分别用EcoRI、HpaII、EcoRI+HpaII、消化这一片段的三个样品,然后通过凝胶电泳分离DNA片段,溴化乙锭染色后观察DNA带型(图15(2)。请根据这些结果,绘制一个限制性图谱,要标明EcoRI、HpaII识别位点间的相对位置,以及它们之间的距离(kb)。 ---(问答题) 会文序列 ---(概念题) 同列酶 ---(概念题) 限制性物理图谱 ---(概念题) 按适当的顺序,列出将一种mRNA的cDNA克隆到达载体所用到的酶. ---(简答题) 为什么反转录酶在聚合反应中会出错? ---(简答题) 什么是测序酶(sequenase)? ---(简答题) 什么是S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)? ---(简答题) 基因工程中,为什么不喜欢用BAP来脱去DNA的5’端的磷酸基团? ---(简答题) RNaseA和RNaseH在催化活性和应用上有何不同? ---(简答题) 切口移位(nick translation)标记DNA前,用DNaseI处理DNA时,应注意什么? ---(简答题) 核酸酶与外切核酸酶?用于系列缺失突变有什么不同? ---(简答题) 1967年,有5个实验室几乎同时独立发现了DNA连接酶,每个实验室的实验有什么特点? ---(问答题) 简述DNA和RNA连接酶的催化反应机制。 ---(问答题) 影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些? ---(问答题) 什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用? ---(问答题) 如何利用T4DNA聚合酶制备3’隐含末端或双链平末端? ---(问答题) 如何利用T4DNA聚合酶进行双链DNA的3’末端标记? ---(问答题) 如何利用T4DNA聚合酶制备平末端? ---(问答题) 反转录酶有两种类型,一是来源于禽类骨髓母细胞瘤病毒(AMV,avian myeloblastosis virus),另一种来源于鼠类莫洛尼氏白血病毒(M-MLV,),它们之间有什么不同? ---(问答题) 与E.coli RNA聚合酶相比,细菌噬菌体的SP6RNA聚合酶、T7RNA聚合酶和T3RNA聚合酶具有哪些优越性? ---(问答题) 什么是多核苷酸激酶的向前反应和交换反应? ---(问答题) 细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途? ---(问答题) 外切核酸酶(1amba exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用? ---(问答题) Mn2+Mg2+对DNaseI的活性有什么影响?DNaseI在基因工程中有什么作用? ---(问答题) 比较S1-Mapping和Footprinting在原理上、方法上、应用上有何不同? ---(问答题) 1, 连接酶(ligase)是一类用于核酸分子连接形成( )键的核酸合成酶,有DNA连接酶和RNA连接酶之分. ---(填空题) 原核生物主要有两种类型的DNA连接酶:E.coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。基因工程中使用的主要是T4DNA连接酶,它是从T4噬菌体感染的E..coli中分离的一种单链多肽酶,分子量为。( )kDa,由T4噬菌体基因( )编码.。E.coli DNA连接酶是由大肠杆菌基因( )编码,也是一条多肽链的单体,分子量为( )kDa。这两种DNA连接酶有两个重要的差异:第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同,T4DNA连接酶用( )。E.coli DNA连接酶则用( )作为能源。第二是它们催化平末端连接的能力不同,在正常情况下只有T4DNA连接酶能够连接平末端,E.coli DNA连接酶则不能。即使是调整反应条件,E.coli DNA连接酶催化 平末端的连接效率也只有T4DNA连接酶的( )。 ---(填空题) YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时,YAC具有优越性? ---(简答题) DNA连接酶的单位通常用Weiss单位表示,一个Weiss单位是:( ) ---(填空题) 列举质粒载体必须具备的4个基本特性。 ---(简答题) DNA聚合酶I是( )在1,,5年从大肠杆菌细胞中分离的,所以又称为( )聚合酶。该酶由大肠杆菌基因( )编码,是一种单链球蛋白。分子量为1,,kDa,酶蛋白中含有一个zn原子。 ---(填空题) 什么叫穿梭载体? ---(简答题) ,,DNA聚合酶与Klenow酶一样,具有5’?3’聚合酶和,’?,’外切酶两种活性,但是它的,’?,’外切酶的活性比Klenow酶强( )倍。该酶的,’?,’外切活性既能作用于单链DNA也能作用于双链DNA,不过作用于( )链的活性要强于( )链。 ---(填空题) 反向转录酶(reverse transcriptase)是由( )kDa和( )两个亚单位成的二聚体,作用时以RNA为合成DNA。 ---(填空题) 从小牛胸腺中分离纯化的末端转移酶催化的基本反应是将( )同时释放出游离的无机磷。催化反应时不需( ),但需要引物,单链DNA是最好的引物,单链DNA受体的长度最短需有( )个dNTP。具有3’突出末端的双链DNA也是较好的反应底物。二价离子和DNA末端状态对催化反应影响较大,但是用( )作为辅助离子,可以催化任何形式的末端(突出的、隐含的、平齐的)加接单核坩酸,但突出的3’端效率较高。 以Mn2+/Mg2+作为辅助因子,只能在单链DNA或双链DNA的3’突出端加尾。 ---(填空题) 说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。 ---(简答题) 虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难,但是通过带动转移将质粒转移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。请举一例说明之。 ---(简答题) S1核酸酶(S1nuclease)是从米曲霉(Aspergillus oryzae)中分离纯化的一种含( )金属蛋白,分子量为32kDa,是一种耐热的酶(37—65?). ---(填空题) 为什么来自Hfr×F‐的重组体几乎总是F‐? ---(简答题) 解释为什么不同的Hfr菌株具有不同的转移起点和方向? ---(简答题) 在,,保护实验中,,,切割的温度有两种:,,?和,,?,这是因为:在,,?时( );在,,?时( ) ---(填空题) ( )技术可以用来鉴定,,,分子中与,,,结合蛋白相互作用的特异序列。 ---(填空题) 怎样从一个E.coli的Hfr菌株中分离到一个F′gal+的菌株? ---(简答题) 真核生物有两种,,,连接酶,连接酶,主要是参与( ),而连接酶,,则是参与( )。 ---(填空题) 你已经分离了一个新的F′因子,怎样用最简便的方法知道最初的F因子的部分DNA已经被切除,并被一个外源DNA(也就是细菌DNA)所替代? ---(简答题) ,,,,,连接酶是,,,,年发现的,并于,,,,年纯化。该酶是由,,噬菌体基因( )编码,作用是不需要模板。它在体内的作用是参与,,噬菌体( )它不参与,,,合成的连接,但在( )中有可能。 ---(填空题) 你能用哪一种基因转移的方法确定 (1) E.coli染色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置; (2)一个新分离的突变在基因内的位置。 ---(简答题) ,,,聚合酶,的 Klenow大片段是用( )切割,,,聚合酶,得到的分子量为,,,,,的大片段,具有两种酶活性(,):( );(,):( )的活性。 ---(填空题) 反向转录酶除具有以DNA和RNA为模板合成DNA的5’?3’合成酶的活性外还具有4中酶的活性(1):( );(2):( );(3):( );(4):( )。 ---(填空题) RNA连接酶作用是除需要ATP和Mg2+,还需要( ) ---(填空题) 用加有注释的图表说明F质粒是怎样从一个F+细胞转移到F—细胞。并简要说明转移复制如何不同于营养体的复制。 ---(简答题) DNA聚合酶I是一种单体酶,分子量为109kDa它含有金属离子( )。 ---(填空题) 什么是复制子(replicon)? ---(问答题) 为了防止DNA的自身环化,可用( )脱去双链DNA( )。 ---(填空题) T4单核苷酸激酶进行DNA片段5’端标记时,主要是通过两种反应即( )和( )。 ---(填空题) 什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么? ---(问答题) 什么是质粒的带动转移? ---(问答题) CIP催化脱磷酸时有两种最适温度,一种是37?,适用于( )端脱磷酸;另一种是56?,适用于( )端脱磷酸。 ---(填空题) 说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。 ---(问答题) λ外切核酸酶可丛双链DNA的5’端依次切下5’单核苷酸,但对不同末端的底物来说,作用效率不同,( )最高,( )最低。 ---(填空题) Co1E1衍生质粒拷贝数调节机理的机理是什么? ---(问答题) EGTA是( )离子螯和剂。 ---(填空题) 测序酶是修饰了的T7DNA聚合酶,它只有( )酶的活性,而没有( )酶的活性。 ---(填空题) 切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用( )的( )和( )的作用。 ---(填空题) R1质粒拷贝数受到怎样的调节控制? ---(问答题) 欲将一具有突出单链末端的双链,,,分子转变成平末端的双链形式通常可采用( )或( )。 ---(填空题) 反转录酶除具有催化,,,的合成外,还具有( )的作用,可将,,,,,,,杂种双链中的()水解掉。 ---(填空题) T4DNA 连接酶和 E.coli连接酶都能催化平末端和黏末端的连接。 ---(判断题) 质粒如何维持在细胞中的稳定? ---(问答题) T4DNA 连接酶和 E.coli连接酶都能催化双链DNA和单链DNA的连接。 ---(选择题) 引起质粒不相容性的主要原因是什么? ---(问答题) 反转录酶能够以单链DNA或单链RNA为模板,在引物的引发下合成一条互补的DNA链DNA链。以RNA为模板合成的DNA是互补DNA(complementary DNA,cDNA)。若是以DNA模板合成DNA,dNTP的掺入速度很低(约5个核昔酸,秒),比T7DNA聚合酶的合成速度差不多低100倍。 ---(判断题) 以RNA为模板,用反转录酶可同时产生单链和双链的cDNA,双链DNA是由自身引物引导合成。但这种自身引物引导的合成效率远低于外加寡核反苷酸引物引导的合成。 ---(判断题) 由于基因工程是人为改变遗传信息的操作,因此必须注意被操作基因的安全,进行严格的监控,质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面? ---(问答题) Bal31核酸酶(Ba131 nuclease)是Ca2+依赖性的,在反应混合物中加入EDTA便可抑制它的活性o ---(判断题) 请指出质粒pSCl01的一些生物学特性(包括结构和遗传)及在基因工程中的作用。 ---(问答题) λ外切核酸酶不能在双链DNA的gap和nick处切割DNA。 ---(判断题) 自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多,即使是Co1E1和pSCl01这两个自然 质粒也不尽人意,通常需要进行改造,请问质粒改造包括哪些基本内容? ---(问答题) 当一个DNA结合蛋白同它识别的核苷酸序列结合以后,就保护了它们的磷酸二酯 键免遭切割,其结果,电泳胶上就有明显可见的空缺带(与对照相比),这就是DNA足迹法。 ---(判断题) T4 DNA连接酶和E.coli连接酶作用时都需要ATP和NAD+作为辅助因子。 ---(判断题) 多核苷酸激酶之所以能够用于DNA片段的标记,是因为它能够将单个的32P标记的单核苷酸加到每一DNA链的5’端。 ---(判断题) 质粒改造的发展过程如何? ---(问答题) 在反转录过程中,•使用AMV比使用M-MLV可得到较多的产物。 ---(判断题) 在质粒中如何增减酶切点? ---(问答题) 真核生物可能有两种DNA连接酶,连接酶I和连接酶II都能在DNA合成和连接中起作用。 ---(判断题) DNA聚合酶I有三种酶活性,其中3’?5’外切核酸酶的活性在较多的dNTP存在 下,常被5’?3’合成酶的活性所掩盖。 ---(判断题) 有人用限制性内切核酸酶EcoR I分别切割松弛型质粒Co1E1和严紧型质粒pSCl01(各有一个切点),然后重组连接形成一个杂种质粒pSCl34,请推测这种质粒有什么特性和用途。 ---(问答题) 用同一种酶切割载体和外源DNA得到黏性末端后,为防止它们自身环化,要用CIP 将它们脱磷酸。 ---(判断题) λ外切核酸酶的作用产物可以作为末端转移酶的作用底物。 ---(判断题) 用外切酶III作系列缺失突变时,可以从突出的3’端开始。 ---(判断题) nick和gap的含义是不同的,前者指DNA的单链中有较小的缺失,后者仅是断开了一个磷酸二酯键. ---(判断题) 现分离了4种新的大肠杆菌Hfr菌株,通过中断接合实验,针对每一菌株确定了高频转移的标记基因和它们进入F—受体的时间分别为: Hfr1 Hfr2 Hfr3 Hfr4 man 13min mal 29 lys 16 pur 6 标记基因和第一 trp 6 met 14 arg 9 trp 3 次进入的时间 his 23 thr 4 mal 2 thr 31 pur 3 uvr 20 his 32 lac 23 gal 14 (gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖;arg、his、met、trp: 生长需要精氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸;uvr: 紫外线敏感)。 任何没有给出的标记都是不能高频转移的。上述数据能够说明大肠杆菌的染色体 是环状的吗?以分钟表示图距构建一个大肠杆菌染色体的连锁图。假定整个染色 体用了100分钟转移,而且苏氨酸被认为位于0分钟或100分钟处。 ---(问答题) T4 DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的,这种连接酶( ) ---(选择题) DNA连接酶在体内的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口,( ) ---(选择题) YAC克隆载体常出现哪些问题? ---(问答题) 在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( ) ---(选择题) 末端转移酶是合成酶类( ) ---(选择题) 在转导过程中,通常需要把受体菌和在供体中生长的噬菌体悬浮液分别铺在选择性培养基上,为什么? ---(简答题) 在以下关于噬菌体SP6RNA聚合酶特性的描述中,( )是不正确的。 ---(选择题) 如何将野生型的入噬菌体改造成为一个理想的载体? ---(简答题) 在基因工程中,可用碱性磷酸酶( ) ---(选择题) 用Sal I切割从噬菌体J2分离的DNA时,得到8个片段,分别是: 1.3、2.8、3.6、5.3、7.4、7.6、8.1和11.4kb。但是,用Sal I切割从被感染的寄主细胞中分离到的J2噬菌体DNA时,只得到7个片段,分别是: 1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9和11.4kb,根据这些结果,您得到哪些信息? ---(简答题) 从E.coli中分离的连接酶: ( ) ---(选择题) 在c I基因正常时为什么也会出现浑浊的噬菌斑?不正常则是清亮的噬菌斑? ---(简答题) λ噬菌体DNA被包装到噬菌体的头部,需要哪些基本条件?为什么? ---(问答题) 为什么野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体? ---(问答题) 什么是蓝白斑筛选法? ---(问答题) 下列酶中,除( )外都具有磷酸酶的活性 ---(选择题) 蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性, ---(问答题) 下列哪一种酶作用时需要引物? ( ) ---(选择题) 什么是cI筛选法? ---(问答题) EDTA是一种螯合剂,可以抑制大多数酶的活性,但在下列酶中,( )不受它的影响 ---(选择题) S1核酸酶的功能是( ) ---(选择题) λ噬菌体载体具有哪些优点与不足, ---(问答题) Klenow酶与DNA聚合酶相比,前者丧失了( )的活性。 ---(选择题) 用Bal31核酸酶作系列缺失突变时,( ) ---(选择题) (中国生物论坛 www.biooo.com copyright reserved)
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