【doc】注入Alum—PHA对小鼠guo淋巴结淋巴滤泡形成的影响

【doc】注入Alum—PHA对小鼠guo淋巴结淋巴滤泡形成的影响 注入Alum—PHA对小鼠guo淋巴结淋巴滤 泡形成的影响 CHlNESEJOURNALOFANATOMYV0【.23No.22000解剖学杂志2000年23卷2期 f;毛一ts7 注入Alum—PHA对小鼠胭淋巴结淋巴滤泡形成的影响 /2-Z, 钟淑琦-撩秋t-徐玉东?-海力斯t-张学军 -—,———, (哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室,暗尔滨150086 *大庆市中医医院内科*-2"暗尔滨医科大学解言!『学教研室) 摘要向小鼠采用一次及多次注人T细皇促有丝分裂剂植物血凝素铝暧附物(Alum—PHA)后,应用免疫组化 观寨淋巴小结的形成.实验分1趺注人及3趺注人组,不同时期取出胭淋巴结后,用免疫组化法,三维重建进行观 察.结果:(1)淋巴结中大量欢级淋巴小结形成,说明淋巴小结的形成不但与刺激T细胞有关,而且与活化巨噬细磨 有关.(2)1/3量注人组产生的淋巴小结教比垒量l欢注人组产生的多;但第l2周末不同组别产生的淋巴小结教差 别不大,12周末消退了许多生发中心.可见反应性淋巴小结的形成,不仅与刺激物性状和投人量有关,而且与投人 方式有关 美奠词淋巴结;淋巴小结 r.一A 植物血凝素铝吸附物;小鼠 当抗原物质注人小鼠体内,淋巴结内的淋 巴小结会出现反应性增多,而当抗原刺激减少 时淋巴小结可出现退化_2"J但是抗原物质对 于淋巴滤泡的形成有哪些影响,诸多闻题尚不 了然].倒如,有些促T细胞有丝分裂剂能刺激 淋巴小结形成,有些则不能],探究其原因是本 研究的目的之一.此外,有些研究指出淋巴小结 的形成与抗原性状及其投人量有关,但与投人 的方式和间隔是否有关,至今仍少报道.本文试 图对上述内容进行探讨 1材料和方法 1.1分组及实验方法动物:8周龄雄性 57BI/6N小鼠24只.刺激物:Alum—PHA(植物 血凝素铝吸附物)(AluminaPhytohemag— glutinin,Dileo)40mg.对照组{3例小鼠于实验 0日取出脶淋巴结.做免疫组化反应观察.实验 组:分全量(40mg)一次投人组共6侧,1/3量 (13g)一次投人组及1/3量3次投人组.(1) 全量1次注人组,6倒,注人一便I足底A1tim— PHA40mg,分别于注人第3周末.第12周末各 取出3例同便I胭淋巴结.(2)1/3量1次注人组. 3例.于实验0日注人Altim—PHA13mg,第3 周末取出胴淋巴结(同侧).(3)1/3量3次投人 一 ]36一 淋器俄 组{?6倒运物于实验前10日,5日,0日(动物 为8周龄)各注人Alum—PHA13mg.于第3周 末(tt组的第3周末已是第一次抗原注人后的 第4.5周;小鼠为成熟后第3周末),第l2周末 各取出3倒胴淋巴结.?6倒于实验前4周(小 鼠4周龄),前两周,实验0日各注人Alum— PHA13mg.于第3周末(此组的第3周末已是 第1次抗原注人后的第7周末;小鼠为成熟后 第3周末),第12周末各取出3例胴淋巴结. 1.2免疫组化法淋巴结用于冰一丙酮玲冻 后,在恒玲切片箱内连续切片(5,6vm).切片 分2组(隔片取1){(1)PNA—B法?用大鼠抗小 鼠CD45R/B22O单克隆抗体(Diego公司)检测 B细胞,成色剂为固蓝BB,B细胞被染成蓝色 ?用结台辣根过氧化物酶的花生凝集素[PNA (peanutagglutinin)Conjuntedtohorseradish peroxidase]与生发中心相结合],用DAB成色 (染成棕色).(2)PAP方法:由于FDC(滤泡树 突状细胞)能捕捉抗原抗体复合物,所以在体外 用过氧化物酶与抗过氧化物酶抗体复合物 (DAK0公司)标记FDC.并用DAB成色(染 成揭色).而其它细胞均染成绿色(用甲基绿染 色). 1.3三维重建计数淋巴滤泡在光学显微镜 下观察淋巴结的连续切片,并描出每个切片淋 巴结的扩大画面,标出皮质区,髓质区,在 PNA—B法切片上,绘上淋巴小结的轮廓并编 号;同时将生发中心再编号.统计出淋巴小结及 ,将总数 其中生发中心的总数.(如果3例动物 相加再除以3,即得平均每例的数目).用同样 方法观察PAP法切片.给淋巴小结及FDC编 号统计出淋巴结FDC群的总数. 2结果 2.1注人Alum—PHA后第3周末观察,见表l 及图1,2. 2.2第l2周末观察,见表2及图3,4. 裹l洼^ALum—PHA3周后誊泡数 3讨论 3.1正常滤泡的发生Sainte—Marie口观察了 刚成熟直到其后二年期内的大鼠的淋巴结.未 见别淋巴小结的消失与再形成的过程.一般认 为正常条件下形成的大部分淋巴小结没有生理 性退化,它可存在终生.实验条件下如果产生 了新的淋巴小结和生发中心,可通过观察淋巴 结连续切片,统计出全部淋巴小结数,减去正常 的数目(较恒定),便可知新产生的淋巴小结数. 3.2实验条件下产生的滤泡Hoshi_1的研究 指出,实验条件下产生的淋巴小结1O周左右开 始退化.本实验可见Alum—PHA投人后,体内 产生次级淋巴小结逐渐增多,到第3周末达到 顶峰,接着次级淋巴小结逐渐减少,第12周末 数量较少.我们的结果与Hoshi的研究结果相 似. 3.3促T细胞有丝分裂剂向动物体内注人 T细胞有丝分裂剂,如刀豆素A(ConA).引起 了淋巴小结形成]而向体内注人促T细胞有 丝分裂剂PHA时,未引起新的淋巴小结形成. 由此可见,引起淋巴小结形成,仅刺激T细胞是 不够的.而在奉实验中,将PHA与铝形成吸附 物,再将其注人动物体内.即可引起淋巴小结形 成与生发中心出现.实验说明,能使巨噬细胞活 化的同时又能刺激淋巴细胞,这样的抗原物质 才能诱发淋巴小结的形成. 3.4不同剂量,不同间隔注人Alum—PHA对 淋巴小结形成的影响Alum—PHA注人小鼠, 第3周末,l/3量3次注人组与全量1次注人组 一 137— 相比,前者不但次级淋巴小结增多,而且初级淋 ,两组的淋巴小结数 巴小结也增多.而12周末 目差别不大.此外,这两组都在第3周末产生的 次级淋巴小结数目达到峰值,以后逐渐减少. 参考文献 1HoshiH,KamiyaK.NagataH,eta1.Formation oflymphfolliclesindraininglymphnodesafterlo— calinjectionofvariousantigenicsubstancesin mice.ArehHistolJpn,1986,49:25. 2HorieK,HoshiH.Inductionoflymphfolliclesfor mationwithseveralmitogensandadjuvantsinthe mousepopliteallymphnode.HistolHistopath, 1989,4:17. 3HoshiH,NagataHtHorieK.Inductionoflymph follicleformationw1thendotoxin11p0p0lysacchar1de indraininglymphnodeofathymicnudemicePath ResPratt,1989,I84:6O 4HoshiH,HorieK,NagataH,etalAhistological andexperimentalstudyonthefateofanincreased numberoflymphnodebyexogenousantigenstimu— lation.ArchHisto1Cyto1,1989,52:485. 5AijimaH—ChenD,Okadaj,eta1.Hyperplasticre— actiondraininglymphnodesinducedbylocalinlet tion:Observationsofthepopliteallymphnodesin mice.JapJLymphol,1994,17. 6RoseMLtMalchiodF.Bindingofpeanutlectionto thymiccortexandgerminalcentresoflympoidtis sue.Immunology,1981t42:583. 7DiikstraCD.TeVddeAA,VanRooi~eaN.Local一 1zationofhorseradishperoxidase(HRP)anti—HRP complexesincryostalsectionsinflunceofendotoxin ontrappingo1immunecomplexinthespleenofthe rat.CelITissueRes,1983,232:1. 8Sainte—MarieG,SinYM.Structuresofthelymph nodeandtheirpossiblefunctionduringtheimi~une responseRevCanBinI,1986,27.19l_ EFFECTOFALUM—PHAINJECT10N0NTHE FORMATIONOFLYMPHFOLLICLESOFMICE P0PLITEALLYMPHN0DE ZhongShuqi,*XuQiujie,**XuYudong,**HaiLisi.**ZhongXuejun (DepartmentofHistologyandEmbryology,HarbinMedical University,Harbin150086,*DepartmentofMedicine,Daqing TranditionalChineseMedicalHospita1. **DepartmentofAnatomy.HarbinMedicalUniversity) TheAlumin—Phytohemagglutinin(Alum— PHA)TcellmitogenicsubstanceswereinIectedin— tomicewithdifferentforms.Afterinjectiontheformationofthelymphfollicleswasobserved by immunohistochemistrymethodanddimensionalreconstructionmethod.Results:Inthepopl iteal nodesalotofgerminalcenterswereproduced.Itsuggestedthatthelymphfolliclewasnotonly associatedwithirritatingTcellbutalsoassociatedwiththeactivatingmacrophage.Theresult s suggestthattheformationoflymphfollicleisnotonlyrelatedwiththenatureofstimulationsub — stanceshutalsowiththeinjectionform. Keywordslymphnode;lymphfollicletAlum—PHA;rat —— 138—— 田版说明 .3周末PNAB二重染色法显示淋巴结,F代表淋巴小结,G代表生11/3量1攻注^组 发中心,×40. 21/3量一班注^组,3周末PNA—B二重染色法显示淋巴结.F代表淋巴小结,G代表生发中心,×100 31,3量间隔2周3攻注^组,3周末PAP法显示淋巴结.D代表FDC,C代表其它细胞,×100 41/3量间隔2周3班注^组.12周末,pAP法显示淋巴结,D代表FDC,C代表其它细胞,X1o0. 139