青霉素结合蛋白2a乳胶凝集法快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

青霉素结合蛋白2a乳胶凝集法快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 青霉素结合蛋白2a乳胶凝集法快速检测耐 甲氧西林金黄色葡萄球菌 Vo1.252O07No.17 青霉素结合蛋白2a乳胶凝集法快速检测 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 洪湘辉,彭湘明 (1.潮州卫生学校,广东潮州521011;2.广州市红十字会医院,广东广州510000) 摘要:目的评价青霉素结合蛋白2a(PBP一2a)乳胶凝集法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的实验方法.方法用 苯唑西林盐琼脂筛选平皿法和PBP一2a乳胶凝集法对68株金黄色葡萄球菌临床分离株进行MRSA检测.结果用苯唑西林 盐琼脂筛选平皿法检出MRSA50株,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌~SSA)18株,用PBP一2a乳胶凝集法检测的结果与前法 完全相同.2种方法的符合率为100%.结论PBP-2a乳胶凝集法是一种快速,简便,准确检测MRSA的方法. 关键词:青霉素结合蛋白2a乳胶凝集法;苯唑西林盐琼脂筛选平皿法;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 中图分类号:G424.31文献标识码:B文章编号:1671—1246(2007)17-0106--02 由于抗生素的不合理使用,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MaSA)在医院内感染患者中的检出率越来越高?,已成为临床 抗感染治疗的棘手问题.MRSA的常规检测方法为苯唑西林盐 琼脂筛选平皿法.目前有一种新的检测MRSA的方法:青霉素 结合蛋白2a(PBP-2a)$L胶凝集法.笔者将PBP-2a乳胶凝集法 和苯唑西林盐琼脂筛选平皿法进行比较,现如下. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌株来源广州市红十字会医院2002年1O月至2005 年1月间分离自住院患者的68株金黄色葡萄球菌.菌株分布: 痰35株,脓汁及分泌物18株,血5株,尿4株,其他6株.用 MicroscanAs-4自动细菌及药敏分析仪鉴定为金黄色葡萄球 菌.质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923和广东省临床检 验质量控制中心提供的MRSA质控菌株. 1.1.2仪器和试剂MicroscanAs-4自动细菌及药敏分析仪(美 国Date公司),PBP-2a检测试剂盒国Oxoid公司). 1.1.3苯唑西林盐琼脂筛选平m圆按美国临床实验室委 员会(NCCLS)配制含4%氯化钠,6~g/ml苯唑西林的MH琼 脂平板. 1.2方法 1.2.1苯唑西林盐琼脂筛选平皿法将待测菌株制成0.5麦氏 单位浓度的悬液,点种在MH盐琼脂平板上,35?准确培养24 小时后观察结果.出现大于或等于1个菌落为MRSAt~.无菌生 长的平皿要继续培养至48小时. 1.2.2PBP-2a乳胶凝集法从新鲜血琼脂培养皿上取大约3, 5(约1O,2O个菌落)的金黄色葡萄球菌菌落悬浮于含有 200I提取液I中,置于沸腾的水中加热3分钟,室温下自然冷 却后,加入25提取液?,混匀,1500~pm室温离心5分钟,取 5O上清液于对照圈,加入PBP-2a无特异性单克隆抗体致敏 的乳胶凝集溶液25,作为阴性对照;另取上清液5O于试验 圈,加入25的PBP-2a特异性单克隆抗体致敏的乳胶凝集溶 , 】06一 液;混匀,摇动3分钟,于自然光下观察有无凝集颗粒出现.试 验圈有凝集颗粒出现的为MRSA,无凝集颗粒出现的为甲氧西 林敏感金黄色葡萄球菌ssA). 2结果 对临床分离出的68株金黄色葡萄球菌,用苯唑西林盐琼 脂筛选平皿法检出MRSA50株,阳性率为74%.50株MRSA用 PBP一2a乳胶凝集法检测结果全部阳性.2种方法的符合率为 100%(见表1). 表12种方法检测68株金黄色葡萄球菌的结果(株) 3讨论 由于抗生素的不合理使用,临床上出现的耐药菌株越来越 多.在临床感染的病例中,MRSA所占的比例越来越高.该菌对 目前临床上使用的所有B一内酰胺类抗生素均耐药.糖肽类抗 生素万古霉素,去甲万古霉素及替考拉宁是临床上治疗MRSA 最有效的药物[41. PBP是一组位于细菌内膜,具有催化作用的酶,参与细菌 细胞壁的合成,形态维持和糖肽结构调整等,能够与B一内酰胺 类抗生素结合.B一内酰胺类抗生素通过与PBP结合,抑制细菌 细胞壁的合成,达到杀菌的目的. 目前认为金黄色葡萄球菌对B一内酰胺类抗生素耐药的主 要原因是其产生了PBP-2am.PBP-2a是一类对B一内酰胺类抗 生素具有很低亲和力的蛋白质.当B一内酰胺类抗生素与MRSA 接触后,穿过细菌表面并以共价结合的方式使正常的4种主要 的PBP失活.在此种情况下,可能是依赖细胞信号的产生, PBP一2a替代其他几种PBP完成细胞壁的合成[I1. 快速检出MRSA对临床及时使用有效药物进行治疗,防止 院内交叉感染有重要指导意义.本实验中2种方法的符合率为 100%.PBP-2a乳胶凝集法检出1株MRSA只需不到30分钟的 时间.PBP-2a乳胶凝集法完全可以作为临床微生物实验室快 速筛查MRSA的方法. 综上所述,PBP一2a乳胶凝集法是一种快速,简便筛查 MRSA的方法,准确度高,可信度好,值得在临床微生物实验室 中推广. 参考文献: [1】张凤凯,金少鸿.B一内酰胺类抗生素的作用靶位——青霉素结合蛋 白田.国外医药抗生素分册,2000,5:107—109. f2降影林.中华医学检验全书(上卷)[j哪.北京:人民卫生出版社,1996. [3】刘瑛,潘仙花,沈霞.金黄色葡萄球菌的耐药性分析m.上海医学检 验杂志,1999,14:208-209. [4]l~hmanM.Alternativestovancomycinintreatingmethici~n-resistant StaphylococcusatH'eu8infecfion~J].JAntimicrobChemother,1998,41(3): 325. [5】李光辉,张婴元.耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌研究现状田.国外 医学内科学分册,1994,21:'390—393.A 护理学基础教学改革的几点尝试 王芳,卞加花 (连云港中医药高等IPo~tk技术学校,江苏连云港222006) 关键词:护理学基础;教学改革;尝试 中图分类号:G420文献标识码:B 文章编号:1671—1246(2007)17—0107-01 1培养"以健康为中心"的护理新观念 以系统化整体护理模式逐渐取代传统的护理模式,"以疾 病为中心"的护理观念逐步向"以健康为中心"的护理观念转 变.过去的护理教育基本上是"以疾病为中心",以技术操作为 分工来设置课程和教学内容,所培养出来的护士把疾病护理看 作是中心任务,认为疾病痊愈也就意味着护理的结束,忽略了 病人的心理需要,与现代护理的要求存在较大距离.系统化整 体护理模式的开展,要求护理人员视服务对象为一个功能整 体,在进行护理服务时,提供包含对服务对象生理,心理,社会, 精神,文化等方面的全面帮助和照顾【l】.理论教学中,应注重培 养学生具有"以病人为中心"的新观念;在进行技术操作时,应 改变仅重视护理操作本身,漠视病人心理感受的旧观念. 2教学方法与手段的改革尝试 2.1情境及角色扮演法 为使护理技术的抽象理论知识具体化,复杂问题简单化, 在对病人护理的教学过程中,采用了情境及角色扮演法.由教 师按照教学要求,事先设置教学情境及对相关学生进行培训. 课堂上,让培训过的学生分别扮演护士,病人及其家属,逐步演 示教学内容.学生通过听,说,看,做等体验,感受护理过程,掌 握重点,突破难点.这种教学方法生动,直观,效果好,极受学生 欢迎. 2.2尝试病案教学法 针对不同的教学内容灵活应用病案教学法,突出"以病人 为中心"的整体护理新观念.理论教学时注意选择临床常见病, 多发病,相对典型,难度适中,齐全的病案,组织学生讨论, 提高其整体护理能力.讲授输血技术时,可借助自血病的病案, 设置悬念,调动兴趣,激发学生的主人翁意识与对病人负责的 高度责任感.通过病案教学,使学生深切地体会到所学知识对 挽救病人生命的重要性.同时,鼓励学生运用学到的知识,自己 设计病案,从而激发学生学习的成就感,积极性和主动性.在病 案教学中还增加了对学生人文科学知识与沟通交流技巧能力 的培养翻. 2.3增强对操作技术的感性认识 改变以书本,粉笔和黑板为媒介的教学技术,利用多媒体 设备和教学软件进行理论讲授,借助声,文,图的诸多结合,使 课堂教学变抽象为具体,变单调为生动.如灌肠,导尿,吸氧,鼻 饲等操作技术就能以直观,形象,生动的方式展示给学生,增强 其对系统理论知识的深刻理解和对实践操作的感性认识,启迪 学生的科学思维,提高了课堂教学效果,以最优化的方式实现 了教学目标. 2.4增加课余剞侏时间,熟侏掌握操作技能 护理操作技术实践性很强,必须在临床实践过程中进行学 习和应用.根据现代护理学的发展,及时调整教学大纲和实习 大纲,转变教学模式,让学生走出课堂,加强课余训练,为学生 提供足够的技能训练时间与空间.实行实验室课外及节假日开 放制,给学生留出较多的自我练习时间.制定自训目标,学生对 照考试标准进行自测,以了解自己的不足,明确继续努力的方 向.学生在强化动手能力的同时开发思维,培养自我管理能力, 自我训练能力和创新能力.除了通过课余时间开放实验室,强 化训练外,还增加了护理技术操作考核等级评优. 3教学效果评价的改革尝试 在由临床护理专家及技术骨干组成的督导团定期对护理 技术教学质量进行评价的同时,可让学生参与,不定期地对教 师教学质量进行不记名评价. 参考文献: [1】彭幼清.护理学导论[M】.北京:人民卫生出版社,2006. f2】陶莉,彭艾莉,高小玲,等.病例教学法在《护理学基础》技能训练中的 应用m.护理研究,2005,19(3):457--458.A 一 1O7一