【doc】间皮相关抗体在胸膜恶性间皮瘤和胸膜转移癌鉴别诊断中的作用

【doc】间皮相关抗体在胸膜恶性间皮瘤和胸膜转移癌鉴别诊断中的作用 间皮相关抗体在胸膜恶性间皮瘤和胸膜转 移癌鉴别诊断中的作用 ? 428?临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2004Aug;20(4) 间皮相关抗体在胸膜恶性间皮瘤和胸膜转移癌鉴别诊 断中的作用 喻朝霞郑晓刚夏思钧孟奎陆珍风马恒辉周晓军 【摘要】目的探讨calretinin,CK5/6,mesothelialcell(MC),CEA和vimentin在胸膜恶性间皮瘤及胸膜转移性肺腺癌中的 表达及其在鉴别诊断中的作用.方法用免疫组化EnVision二步法检测13例胸膜恶性间皮瘤和13例胸膜转移性肺腺癌中 的calretinin,CK5/6,MC,CEA,vimentin的表达情况.结果calretinin,CK5/6,CEA在恶性间皮瘤与胸膜转移性肺腺癌中 表达差异有显着性(P<O.05).MC,vimentin在恶性间皮瘤和胸膜转移性肺腺癌中表达差异无显着性(P)O05).结论间 皮相关抗体calretinin,CK5/6及癌抗体CEA对鉴别胸膜恶性间皮瘤及胸膜转移性肺腺癌有诊断价值. 【关键词】胸膜肿瘤;恶性间皮瘤;肺肿瘤;免疫组织化学;诊断,鉴别 【中图分类号1R734.3;R734.2【文献标识码】A【文章编号1i001—7399(2004)04—0428—04 Valueofthemesothelium—associatedautibodiesindistinguishingpleuralmalignantmesothelioma fromlungadenocarcinomainthepleura YuZhaoxia,ZhengXiaogang,XiaSijun,MengKui,LuZhenfeng,MaHenghui,ZhouXiaoju n (DepartmentofPathology,GeneralHospitalofNanjingCommand,Nanjing210002) 【Abstract】 PurposeToexploretheexpressionofcalretinin,cytokeratin5/6,mesothelialcell(MC),CEA,andvimentinin thepleuralmalignantmesotheliomaandlungadenocarcinomainthepleura,comparatively,aswellastosearchforthevalueof themindifferentialdiagnosisMethodThirteencasesofthepleuralmalignantmesotheliomasweredetectedbyimmunohisto— chemicalEn— visionmethod,comparedwiththecontrolofthe13casesoflungadenocarcinomasinthepleura.Theexpressionof calretinin,CK5/6,MC,CEAandvimentinwasdetectedinthesepatients.ResultTheexpressionofcalretinin,CKS/6,CEA betweenthemesotheliomasandadenocarcimomaswassignificantlydifferent(P<O.05).ButtheexpressionofMCandvimen— tinbetweenthemwasnotsignificant(P>O.05).ConclusionsThemesothelium— associatedantibodies(calretenin,CK5/6and CEA)areusefulforthedifferentialdiagnosisofpleuralmalignantmesotheliomafromlungadenocarcinomasinthepleura. [Keywords]pleuralneoplasms;malignantmesothelioma;lungneoplasms;immunohistochemistry;diagnosis,differential 胸膜恶性间皮瘤和胸膜转移性肺腺癌,特别是 胸膜上皮型间皮瘤,单纯从组织学上与胸膜转移性 肺腺癌鉴别是非常困难的.迄今为止,国内尚未有 对间皮相关抗体的研究报道.笔者采用"间皮相关 抗体"calretinin,CK5/6,mesothelialcell(MC)及 vimentin和癌抗体CEA,探讨免疫组化在恶性间皮 瘤和胸膜转移性肺腺癌鉴别诊断中的价值. 1材料与方法 1.1材料收集南京军区南京总医院病理科1993 收稿日期:2003—06一O2修回日期:2003—11—25 作者单位:南京军区南京总医院病理科,南京210002 作者简介:喻朝霞(1968一),女,进修医师 郑晓刚(1963一),男,副主任医师,主要研究肿瘤及超微病 理,通讯作者.Tel:(025)80860192,E—mail:gangyan@ jlonline.corn 年1月~2002年12月胸膜恶性间皮瘤手术切除及 胸膜活检标本13例,另随机收集13例胸膜活检的 转移性肺腺癌作对照.13例恶性间皮瘤,结合组织 学形态及临床影像学检查,每1例病理诊断均经其 后的临床进程所证实,男性11例,女性2例,年龄 30,81岁,平均51岁.13例胸膜转移性肺腺癌, CT及X线均示肺占位性病变,临床血CEA均高于 正常,胸水脱落细胞检查及纤支镜活检均示腺癌,部 分病例经电镜证实.男性7例,女性6例,平均年龄 54岁. 1.2方法全部标本经10中性福尔马林液固 定,常规石蜡包埋,切片厚4m,切片经lmol/L EDTA(pH8.O),高压锅热修复,免疫组化检测系 统用EnVision二步法,常规免疫组化染色,DAB显 色,鼠抗人单克隆抗体calretinin(CRT01),CK5/6 (D5/16B4),MC(HMBE一1),CEA(ZCEA1),vimen— 临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2004Aug;2O(4)?429? tin(V9)全部购自福州迈新生物技术开发有限公司. 1.3结果判定用已知阳性切片做阳性对照. calretinin:肿瘤细胞胞质及核着色阳性,MC:胞膜 着色阳性,CK5/6,vimentin均为胞质着色阳性, CEA为胞质阳性.阳性细胞数<1O为阴性,? 10为阳性. 1.4统计学处理阳性表达平均比较采用四格表 确切概率法. 2结果 2.1组织形态学弥漫性恶性间皮瘤有3个主要 组织学类型:上皮性,纤维性和混合性(双相性).本 组13例间皮瘤,2例肉瘤型:细胞密度大,梭形,核 椭圆形,胖梭形,核分裂象易见,瘤细胞束状排列.8 例上皮型:瘤细胞形态多形,圆形,椭圆形及多边形, 核圆形,不形,深染,异型性,巢状或弥漫分布 (图1).1例乳头型(图2):被覆单柱状或单层立方 上皮,未见核分裂象.2例双相型(混合型):瘤细胞 梭形,多角形,圆形,核大,深染,核椭圆形,圆形,瘤 细胞排列成裂隙状,腺样(图3),乳头状,部分瘤细 胞呈弥漫,束状排列. 13例胸膜转移性肺腺癌,均为胸膜活检组织, 光镜下见散在条索状腺管状及瘤细胞散在分布纤维 组织间,细胞不规则立方,柱状,圆形,核深染,异型 性明显,部分为不规则团块状,胞质嗜酸性. 2.2免疫表型结果见表1及图4,8.13例恶性 间皮瘤中,calretinin在2例肉瘤样型间皮瘤中为阴 性,CK5/6在大多数上皮型间皮瘤中表达,但在肉 瘤型间皮瘤少有表达.MC,vimentin在间皮瘤和胸 膜转移性肺腺癌都有过多的表达.CEA在13例胸 膜转移性肺腺癌中均强烈表达.calretinin,CK5/6, cEA在两组间表达差异均有显着性(P<0.05),而 MC及vimentin在两组间表达差异无显着性(P> 0.05) 3讨论 由于胸膜淋巴管和毛细血管丰富,转移瘤十分 常见,而胸膜的恶性间皮瘤较少见,约占胸膜恶性 肿瘤的5.文献报道,胸膜间皮瘤与石棉暴露有 关,但也有非石棉相关的间皮瘤的报道和研究,如遗 传,生物学环境因素.而恶性间皮瘤与胸膜转移 腺癌组织学图像非常相似,特别是在胸膜活检的小 组织中,鉴别非常困难.临床表现均相似,多发生在 4O岁以上,男性稍多于女性,均伴有咳嗽,胸痛,胸 水等症状.易误诊,确诊必须综合分析临床,影像学 及细胞,组织病理学资料".间皮瘤可分为上皮型, 肉瘤型及双相型(混合型),其中最多见为上皮型,呈 乳头状,分支腺管状,实性结构,组织学图像与胸膜 转移性肺腺癌难以鉴别.以前间皮瘤和胸膜转移性 肺腺癌的鉴别多数是根据整个间皮阳性和使腺癌阴 性的抗体(CKpan,Leu—M,B72.3,Ber—EP4,CEA, vimentin,HBM一1)加上中性黏蛋白阴性染色来加以 区分,另外辅以基因诊断及电镜观察.电镜下间 皮瘤腔面内衬细胞有细长微绒毛,并有微绒毛伸出 直接与结缔组织相连,但是分化低的间皮瘤往往看 不到这些特点,且其费用高,时间长.目前市场上出 现了上述的间皮相关抗体,可用于鉴别诊断. 3.1CK5/6低分子角蛋白"1985年,Blobel 等提出细胞角蛋白有助于鉴别上皮样间皮瘤和胸 膜转移性肺腺癌,但是到目前为止,此抗体仅限于冷 冻组织.1997年,Clover等通过抗原修复,将其 作为经福尔马林固定,石蜡包埋的上皮型间皮瘤标 记,结果显示22例腺癌阴性,23例上皮型间皮瘤阳 性,仅5/27肺腺癌阳性,其中4例表达很弱,其特异 性达85.而Ordonez报道1009/6的敏感和859/6 的特异性.2002年,有学者通过对509例的上 皮性肿瘤免疫组化研究,发现CK5/6在大多数恶性 间皮瘤中表达,在肺腺癌中表达仅少数.CK5/6还 可以在鳞癌,基底细胞癌,胸腺瘤,涎腺肿瘤及双向 恶性间皮瘤中表达,且在移行细胞癌,子宫内膜癌, 胰腺癌和乳腺癌中也有不同程度的表达,故 CK5/6只能适用于胸膜恶性间皮瘤与肺腺癌的鉴 别,而不适用于与非肺腺癌的鉴别.本组研究的结 果为699/5的敏感性和75的特异性,其中2例肉瘤 表113例恶性问皮瘤和13例胸膜转移性肺腺癌的免疫表型 注:+,卅均为阳性. ? 430?临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2004Aug;20(4) 图1上皮型间皮瘤,瘤细胞弥漫分布,细胞圆形,质红,核圆,居中或偏位图2上皮型间皮瘤,腺管乳头型 图3上皮型间皮瘤示腺样结构图4间皮瘤示肿瘤细胞calretinin核质阳性,EnVision法 图5间皮瘤肿瘤细胞MC膜弥漫阳性,EnVision法图6间皮瘤肿瘤细胞MC胞膜弥漫阳性,EnVision法 图7间皮瘤肿瘤细胞CK5/6胞质阳性,EnVision法图8间皮瘤肿瘤细胞vimentin呈胞质弥漫阳性,EnVision法 型及2例上皮型间皮瘤为阳性,故CK5/6可作为间 皮相关抗体之一. 3.2calretinin研究发现,用单克隆calretinin抗 体染色阳性定义为弥漫的细胞核和细胞质染色,有 或无细胞膜深染,前者表现为特征性的"煎蛋"样外 观,间皮起源的细胞和腺癌细胞calretinin染色不 同,差异有明显统计学意义.在报道中和转移腺 癌相比,它对上皮样间皮瘤的敏感性42,100, 特异性超过90,敏感性的差异可以部分解释为使 用了不同的抗体..本研究所用抗体获得了84 %的敏感性和91的特异性,其中2例肉瘤型间皮 瘤阴性,在腺管乳头型表达最强,而胸膜转移性肺腺 癌有1例有灶性,弱的表达.同时,胞核和胞质着色 则示较高的特异性.另外,有报道calretinin在滑膜 肉瘤及结肠癌中均有不同程度的表达率,且calreti— nin在肺的巨细胞癌,小细胞癌,大细胞癌均有较多 的表达,故calretinin只适用肺腺癌与恶性间皮瘤的 鉴别..本研究结果显示两组间差异有显着性 (P<0.05). 3.3MC间皮相关抗体之一,可用于福尔马林固 临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2004Aug;20(4)?431? 定,石蜡包埋组织中.有文献报道,MC在一些肉 瘤特别是软骨肉瘤,滑膜肉瘤,脊索瘤中有表达,偶 尔在淋巴瘤中也有表达.Ordonez等n"报道的MC 抗体在恶性间皮瘤常规处理切片上的表达率为 8O(16/20),而在肺腺癌也有63.6%(14/22)的阳 性,本研究MC在上皮型间皮瘤及混合型间皮瘤表 达较强而在肉瘤型则有散在局灶性弱表达.其敏感 性为61,特异性为66,两组比较差异无显着性 (P>O.05),故在实际应用中,对间皮瘤与胸膜转移 性肺腺癌的鉴别诊断价值是有限的. 3.4CEA腺癌相关抗体之一,习惯用于上皮型间 皮瘤与腺癌的鉴别.Ordonez的研究结果显示, CEA在肺癌有85,90%的表达,而在间皮瘤中 没有反应.Carella等n在回归分析中,也证明了 CEA是鉴别胸膜恶性闻皮瘤和肺腺癌中最敏感的 抗体.本组13例胸膜转移性肺腺癌CEA均阳性 (100),而间皮瘤只有1例阳性(7%),其特异性为 93,两组间差异有显着性.以上提示单克隆CEA 可以用来鉴别上皮型胸膜间皮瘤和转移性肺腺癌. CEA对腹膜间皮瘤和卵巢浆液性乳头状癌的病理 诊断没有实际应用价值,文献报道,仅有16的乳 头状癌表达CEA. 3.5vimentin多用于间叶性标记,但在间皮瘤和 肺腺癌中的表达文献报道为5O,因此对鉴别诊 断的作用是有限的.本组中vimentin在间皮瘤中 的敏感性为61,特异性为72%,两组间比较差异 无显着性,故它的作用是有限的. 研究结果表明,calretinin和CK5/6对鉴别胸 膜间皮瘤和胸膜转移性肺腺癌有重要作用.这两种 抗体的敏感性为69,84,与文献结果相近?. 敏感性的差异可能由于本组例数较少和使用抗体的 不同所致.由于calretinin在结肠癌中有表达,特别 是在分化低的结肠癌,CK5/6同时在卵巢癌,鳞癌 和移行细胞癌中均有表达,所以不是特异性抗体. 而且本研究也限于鉴别胸膜间皮瘤和胸膜转移性肺 腺癌,而不是其他类型的癌.因此,calretinin,CK5/ 6及CEA对鉴别胸膜间皮瘤与胸膜转移性肺腺癌 有较高的敏感性和特异性,而vimentin,MC的作用 不明显. 参考文献 1徐腊梅,杨小玲.胸膜恶性间皮瘤临床病理分析.肿瘤防治研 究,2002,29(1):30,1. 2WeissSW,GoldblumJR.Softtissuetumors.第4版,北京:人 民卫生出版社,2002:1063,84. 3CuryPM,ButcherDN,FisherC,cta1.Valueofthemesothe— lium—associatedantibodiesthrombomodulin,cytokeratin5/6, calretinha,andCD44Hindistinguishingepithelioidpleuralmeso— theliomafromadenocarcinomamestastictothepleura.Mod Pathol,2000,13(2):107,12 4AttanoosRL,WebbR,DojcinovSD,GibbsAR.Malignant epithelioidmesothelioma:anti—mesothelialmarkerexpression correlateswithhistologicalpattern.Hso加加oZog,2001,39 (6):584,8. 5CloverJ,OatesC,EdwardsC.Anti—cytokeratm5/6:apositive markerforepithelioidmescthelioma.Histopatho,og,1997, 31:140,3. 6OrdonezNG.Theimmunohistochemicaldiagnosisofepithelial mesothelioma.HumPathol,1999,30:313,23. 7ChuPG,WeissLM.Expressionofcytokeratin5/6inepithelial neoplasms:animmunohistochemicalstudyof509cases.Mod Pathol,2002,15(1):6,10. 8史育慧,廖松林.Calretinin鉴别有浆液渗出的间皮瘤或腺癌. 诊断病理学杂志,2001,8(5):266. 9MiettinenM,LimonJ,NiezabitowskiA,LasotaJ.Calretinin andothgrmesotheliomamarkersinsynovalsarcoma:analysisof antigenicsimilaritiesanddifferenceswithmalignantmesothelio— ma.^mJSurgPathol,2001,25(5):610,7. 10Mietl/inenM,Sarlomo-RikalaM.Expressionofcalretinin, thrombomodulin,keratin5,andmesothelininlungcarcinomas ofdifferenttypes:Animmunohistochemicalanalysisof596 tumorsincomparisonwithepithelioidmesotheliomasofthe pleura.AmJSurgPathol,2003,27(2):150,8. 11OrdonezNGThevalueofantibodies44—3A6,SM3,MC,and thrombomodulinindifferentiatingepithelialpleuralmesothelio— mafromlungadenocarcinoma:acomparativestudywithother commonlyusedantibodies.AmJSurgPathol,1997,21(12): 1399,408. 12CarellaR,DeleonardiG,D'ErricoA,eta1.Immunohisto- chemicalpanelsfordifferentiatingepithelialmalignantmesothe— liomafromlungadenocarcinoma.AmJSurgPathol,2001,25 (1):43,5O. 13AttanoosRL,WebbR,DojcinovSD,GibbsAR.Valueofmes— othelialandepithelialantibodiesindistinguishingdiffuseperito— nealmesotheliomainfemalesfromserouspapillarycarcinomaof theovaryandperitoneum.Ho户口^oZog,2002,40(3):237 ,44. 14ErkilicS,SariI,TuncozgurB.Localizedpleuralmalignant mesothelioma.PatholInt,2001,51(10):812,15. 15KerriganSA,TurnnirRT,ClementPB,eta1.Diffusemalig— nantepithelialmesotheliomasoftheperitoneuminwomen.a clinicopathologicstudyof25patients.Cancer,2002,94(2): 378,85.