大鼠肾上腺髓质嗜铬颗粒数目和钙含量的关系

大鼠肾上腺髓质嗜铬颗粒数目和钙含量的关系 成年 大鼠 24 只, 体重 2002250, 雌雄兼用。 将大鼠绑于特制的框架中, 并反转使其背部 SD g 固定于平面上, 形成大鼠制动应急模型。以制动时间的不同, 将动物分为 015、1、8、16和 24hhhh h 制 动 后 大 鼠 用 乙 醚 过 量 麻 醉 各组, 共 5 组。 对照组为正常不制动大鼠。 每实验组 4 只动物。 3 处 死, 取 双 侧 肾 上 腺 髓 质, 切 成 小 于 1的 小 块, 先 后 在mm () 215% 戊二醛及 1% 011磷酸缓冲液配制4?固定 2。梯度酒精脱水, 树脂包埋。 O sO 4 m o l hSp u r r 切片经双染色后在 21200透射电镜下 15000 倍随机拍摄肾上腺素细胞, 用测试网格法测 J EM EX () () 出颗粒的数密度 值 图 1。N v 取材获得的新鲜大鼠肾上腺髓质立即在 280 型快速冷冻仪的氟立昂泥中作快 R e ich e r t K F 速冷冻固定, 然后用 2型冷冻超薄切片机切片, 带有切片的载网于低温4R e ich e r tU lt racu t E FC D - 4 下转移至 6167×10真空下干燥 8, 再于切片面喷薄层碳膜。P a h 切片于附有 210000 的 21200透射电镜下观察分析, 分析时采用六硼化镧灯 L in k A N J EM EX 丝, 加速电压 80, 将电子束聚焦于嗜铬颗粒, 光斑直径小于 012射线计数率为 1200, kV Λm X cp s 左右, 收谱时间 200 , 下 射线能谱图, 谱线用 ƒ生物薄试样定量分析软sX L in k Q u an tem FL S ) ( 件进行元素定量分析, 给出 干重为元素浓度单位。ƒmm o lk g 结果与讨论 11 细胞立体形态计量结果 大鼠经制动应急后肾上腺髓质细胞中的分泌颗粒数量减少, 并随制动时间增加而下降, 制动 () 24组数量最少 图 2。h 对正常对照组和制动 015, 1, 8, 16, 24组动物肾上腺髓质细胞的电镜照片进行细胞形 h h h h h 态计量学统计, 每组 4 只动物, 每只动物 30 张照片, 计算照片中颗粒的数密度 结果分别为, N v 47189?3187, 42133?4116, 29180?3141, 25120?2125, 24129?2130 和 4102?0198。 各时间组 () 颗粒数密度与对照组相比均明显减少 < 0101。P 21 电镜 射线显微分析结果 X 电镜下冷冻超薄切片中的肾上腺髓质细胞的细胞胞质及细胞核形 态均保持完好, 分析时将 2+ ( ) 电子束聚焦于嗜铬颗粒, 收集到 射线能谱图 图 3, 谱线上 元素峰线强度不一, 计算结果 X C a 2+ ) ( 如下: 正常大鼠嗜铬颗粒内含有较高浓度的 为 31125 ?3123ƒ干重, 在制动应急C amm o lk g 015, 1, 8, 16 和 24时分别降至 11177 ?1170, 8132 ?1143, 5122 ?1135, 1185 ?1107 和 1117 ?h 的改变, 并采用新鲜组织立即进行快速冷冻、冷冻超薄切片的方法, 能较好地原位保存组织中的 2+ 各种元素成分, 测得接近生理状态下 元素含量, 从而能很好地阐明肾上腺髓质嗜铬颗粒内 C a 2+ 含量变化与细胞分泌的关系。C a