异丙酚抑制豚鼠心室肌细胞异丙肾上腺素诱发的氯离子电流

异丙酚抑制豚鼠心室肌细胞异丙肾上腺素诱发的氯离子电流 ( ) 异丙酚 Propofol是一种临床常用的新型静脉复合麻醉药 ,全身应用时可明显降低人和动物的动脉舒张压 ,不 μ影响或略降低心输出量 。我们的实验曾明 ,预防性使用 30mol/ L Propofol 可显著对抗离体大鼠缺血再灌注损 伤 ,改善缺血后心脏舒缩功能 ,增加冠脉流量和提高心肌 SOD 活力 。为进一步探讨其作用机制 ,我们观察了该药 对缺血再灌注损伤可能密切相关的氯离子电流的影响 。( 1 实验与 豚鼠 220 - 270g ,雌雄不拘 ,击头致晕后迅速开胸取心 ,置冰冷的分离液 成分 mM : NaCl 116 , ) KCl 5 . 4 , Na HPO1 . 2 , Na HCO15 , MgSO1 . 2 , Glucose 15 , p H 7 . 35中清除结缔组织 ,连于 L angendorff 装置 ,用 2 4 3 4 2 + μ() 37 ?持续通入 95 %O+ 5 %CO的上述分离液灌流约 5min ,继用含 Ca100M 、牛血清白蛋白 BSA , Sigma0 . 2 2 2 + ( ) μ5mg/ ml 、胶原酶 Sigma ?型0 . 33mg/ ml 的分离液灌流 5min 左右 ,取下心脏 ,在含 Ca250M 、BSA1mg/ ml 的上述 液中剪除心房 ,剪碎心室肌 ,轻匀搅拌后经尼龙网过滤 ,梯度复钙至 1 . 0mM 水平 ,室温下贮存 1 h 以上再进行电生 ( ) 理实验 。吸取细胞悬液滴入浴槽中 ,待沉降贴壁后用改良台氏液持续灌流细胞 ,溶液成分为 mM: NaCl 135 , CsCl Ω ( ) 5 . 4 ,CaCl1 . 8 ,CoCl2 , MgCl1 , HEP ES 10 , Glucose 10 ,p H7 . 4 。用阻抗为 224M的玻璃微电极 [ 内充 mM: CsCl2 2 2 20 ,Cs2aspartate 110 , T EA2Cl 20 ,MgCl2 , E GTA 5 , HEP ES 10 , NaA TP 1 ,p H7 . 2 wit h CsO H 与细胞形成 giga2seal ,2 2 3 ( ) 进而形成全细胞模式后 ,给细胞施加一持续 6ms 的210mV 脉冲刺激 ,对产生的膜电容电流用 I= A exp 2t2k/ ( ) tτ+ C 进行指数拟合 ,由此计算出膜电容 。膜离子电流经对膜电容相除算出其相对密度 ,以尽可能减少细胞大小差 () 别造成的个体差异 。由未补偿的电容瞬量估测串联电阻 ,根据需要对其进行补偿 一般至 80 %以上。电流信号经 CEZ22300 型膜片钳放大器通过接口卡与计算机相连 ,由后者运行 p Clamp 5 . 6 程序控制信号的发放与采集 。细胞 (φμ( μ) ) 外液经一对准细胞的自制细管灌流装置 260m持续灌流细胞 细胞大小一般在 150m 左右,药物直接加入灌 流液中至所需浓度 ,药物效应可立刻呈现 ,显著缩短了实验时程 。观察给药前后膜电流的改变 ,数据用 x ?s表示 , 结?x? 果用配对 t 检验进行统计分析 。 2 结果与讨论 + 实验在室温 20 - 22 ?下进行 。将电位钳制于240mV , I基本失活 ,在胞外应用 CoCl阻断钙通道 ,胞内外用 Cs 替 Na2 + 代 K,又在胞内应用较大剂量的钾通道阻滞剂 T EA2Cl , 因此可认为所得到的离子电流是较“纯净”的氯离子电流 。 2 胞内加入天冬氨酸盐旨在维持 Cl ]在 44mM ,有利于控制电流的大小 。图 1 为从一代表细胞获得的电流的图象 ,i 图 1A 则为在基础状态下从钳制电位 V 240mV 给予 0 . 2 Hz 超级 、去极化刺激时得到的较弱的非选择性“漏”电流 ; H μ( ) ( ) 在给予细胞 3M 异丙肾上腺素 Isop roterenol , ISO后 ,各测试脉冲下引出的膜电流均有明显增加 图 1B,在减去 ( 漏电流后得出净 ISO 诱发电流 ,该电流具有快速激活和非时间依赖的特点 ,在 I2V 曲线上呈轻度的外向整流 图 μ) 2,与文献报道之氯电流十分接近 。如果在含 ISO 的灌流液中加入 50M 的 Propfol ,则该电流可明显减少 ,在多个 () 电压水平均有统计学显著性意义 图 2。当再用不含药物的 ISO2台氏液灌流细胞时 ,可使受抑电流大部分恢复 。 足证电流之改变为药物所致 。心肌细胞 I受胞内 cAM P 水平调控 ,在静息态时 , 它通常被认为无多大作用 ,但在 Cl 心肌缺血缺氧 、再灌注等病理状态 ,常见儿茶酚胺增加 ,因而 I被激活并可能成为继发性心律紊乱和心肌功能损伤 Cl 的重要原因之一 ,而异丙酚对 I的抑制则可能在心脏手术麻醉中发挥有益作用 。 Cl( )19962128 收稿 199624211 修回 PTX 对内毒素休克大鼠血浆 TNF 、TF 及 TFPI 的影响 许建平 肖苏红 贺 蓉 邓常青 李俊成 贺石林 ()湖南医科大学生理学教研室 , 长沙 410078 () 己酮可可碱 pento xif ylline , P TX可通过改善血液流变性 、扩张血管 、抑制白细胞2内皮细胞反应 ,降低休克动物 的死亡率 。为探讨其作用机制 ,我们对内毒素休克大鼠血浆 TN F 、TF 及 TF P I 进行了观测 。 () 1 与方法 24 只 SD 雄性大鼠 ,体重 270 - 320g ,戊巴比妥钠 40 - 60mg/ kg ,ip麻醉 ,左颈总动脉插管监测平 ( ) ( ) ( ) ( ) 均动脉压 MA P和心率 HR,右颈外静脉插管输液或给药 。动物随机分为三组 ,各组 n = 8 , 1正常对照组 NC; () () ( ) 2内毒素 lipopolysaccharide L PS组和 3P TX + L PS 组 。P TX + L PS 组 预 先 静 脉 输 入 P TX25mg/ kg ; 15min 后 P TX + L PS 组和 L PS 组给予 L PS3mg/ kg ,NC 组给予等量的生理盐水 ,并分别于 60 、90 、120min 观察 MA P 和 HR , ( ) ( ) 60 、150min 各做一次白细胞 WBC和血小板 PL 计数 。150min 后颈动脉放血处死动物 ,分离血浆230 ?保存待测 。 () () 血浆 TN F 含量 军事医学科学院基础所药盒、血浆 TF 含量和 TF P I 含量 美国 AD I 公司提供药盒测定均用酶联( ) () 免疫吸附法 EL ISA; 血浆抗凝血酶 ?A T ?活性用发色底物法测定 。 2 结果 ( )Ta b. 1 Effect of P TX o n t he change of MA P in rat s induced by L PS k Pa ( )MA P k Pa Gro up 0 30 min 60 min 90 min 120 min NC 17 . 2 ?1 . 917 . 1 ?3 . 417 . 0 ?3 . 314 . 7 ?2 . 413 . 3 ?3 . 433 33 33 3 L PS 17 . 4 ?1 . 513 . 5 ?3 . 9 12 . 6 ?3 . 1 10 . 0 ?2 . 0 5 . 8 ?2 . 5 3 33 33 P TX + L PS 10 . 5 ?3 . 017 . 4 ?2 . 412 . 7 ?3 . 4 12 . 5 ?3 . 8 11 . 2 ?3 . 3 3 3 3 P < 0 . 05 P < 0 . 01 vs NC Ta b. 2 Effect of P TX o n t he changes of WBC and PL count s in rat s induced by L PS 910 ( ) ( ) WBC ×10 / L PL ×10 / L Gro up 60 min 150 min 60 min 150 min NC 7 . 0 ?3 . 3?3 . 67 . 7 ?1 . 66 . 1 ?2 . 18 . 4 3 33 3 L PS 6 . 9 ?1 . 45 . 0 ?0 . 93 . 9 ?0 . 6 3 . 4 ?1 . 7 33 P TX + L PS 5 . 3 ?1 . 3 5 . 9 ?1 . 35 . 0 ?1 . 2 6 . 1 ?1 . 3 3 3 3 P < 0 . 05 P < 0 . 01 vs NS 由表 1 可见 ,NC 组的 MA P 在实验中较平稳 ,L PS 组则呈进行性下降 ,120min 时陡降至最低点 5 . 8 ?2 . 5 k Pa 。 P TX + L PS 组亦呈进行性下降 ,但 120min 时仍较平稳 。说明 P TX 可使 MA P 逐渐趋稳 。与 NC 组相比 ,各组不同( ) 时间的心率变化无显著差异 P > 0 . 05。 ( ) 由表 2 可见 ,60min 时 L PS 组 WBC 明显低于 NC 组和 P TX + L PS 组 P < 0 . 01, P TX + L PS 组与 NC 组相比