绝经期后女性腹部皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mrna表达的研究

绝经期后女性腹部皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mrna达的研究 绝经期后女性腹部皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mrna 表达的研究 青岛大学 硕士学位论文 研究 姓名:鲁梅芳 申请学位级别:硕士 专业:内科学(内分泌) 指导教师:闫胜利;袁鹰 20030301 Y618097 中文摘要 绝经期詹女性腹部皮下、大网膜脂肪组织 芳香化酶mRNA表达的研究 专 照 肉警 学 内分泌 研究生 鲁梅芳 学 静 闰胜利袁磨 中文摘要 霾的:―r簿绝经后妇女腹帮皮下、大网璇月,舫翁织中芳香诧酶mRNA的表达永平， 其与空腹真胰岛素水平、血糖、m脂、体重指数、腰臀比、血压等指标的关系。 方法;术中辩敬绝经后肥辟、lE胖台并子宫内膜痛及lE常体重妇女腹 部皮下( 大网麟脂肪组织，进行总R猢提取，并应用半定量逆转录一聚台酶链反皮，检测芳香 化酶mRNA的表达。同时应用全自动生化分析仪测定窄腹血糖、总胆固醇、甘油三酯; 全自动电化学发光纹测定空腹囊胰岛索承乎。缝内赛糙应耀配对t检验;组闻资料 应用t检验、方差分析、0检验，各变量与芳香化酶mRN^表达水平的关系应用直线 辊关及多元逐步黪归势瓣。 结果:1(绝经屙肥胖妇女皮下、大刚膜脂肪组织芳香化酶n,RNA的装达水平高于 正常体重酌绝经后女。陆 sc:0(842?0(083VS0，715?0，054P O(OOl:谢:0(398 ?0(022VS0(345?0(032P 0(001 。2(绝经后女性皮下脂肪组织芳香化酶mRNA的 表达水平高于大网膜脂髓组织 肥胖组;0(842?O(083vS0(398?O(022P 0(001: Vs0，345?0。032 聪照组:0(715?0(054 P 0。001 。3(亚缌分掇显示:缝经蜃目0黪 伴子宫内膜癌患者皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mRHA的表达水平与同组肥胖女性 gS 比较盂显著差异 Sc:O。845?0(0830。839?0。084P 0。05:甜:0(397?0(016 VS0(398?0(027P 0 05 。4绝经后肥胖女性皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶 mRNA 的表达与腰臀比、簪疆胰岛素晕芷框关 SC:p O(019，p踟(040 锄:p O(031， p:0(022 结论:绝经后肥群女性腹部皮下、大网膜脂肪组织中芳香化酶m硝A的表选水平 较绝缀后正常体重女性增加，与腹型肥胖及赢胰岛豢血症相关，绝经后女噬羰型肥 胖及肥胆相筵的胰岛素抵抗与腹部脂肪组织内芳香化酶mI NA表达水平有关。 ,关键 司】 芳香优酶指肪组织绝经崧后 半定量一逆转录聚合酶链反应 茎壅塑垩 STUDYONARoMATASE mRNA EXPRESSIoNIN SUBCUTANEOUSAND OMENTALADIPoSE TISSUEOF PoSTMENoPAUSAL FEMALES Abstract i veTo thearomatasemRNA in and subcutaneous Object study expression omental of tissues femalesand theirrelationwith adipose postmenopausal to age，bodyweightindex，waisthip ratio，bloodpressure，total and and cholesterol，serumtriglyceridefastingplasmaglucose fastingplasma insulin。 and MethodsSubcutaneousomental tiSSUeSwereCOllectedfrom adipose 30 women abdominal were postmenopausal undergoing surgery(Tissues froze and in at一70? forfurtherRNA 1iquid immediately nitrogen kept from54 65 to 10 extraction(Patients，agedyears，included obesity， i0obesity withendometrium of normal carcinoma，10 women(The subjects body weight of 1evelaromatasemRNAin WaS tissues expression adipose by assayed reverse chain reaction Semi―quantitativetranscriptasepolymerase measuredtotal cholesterol、serumand ampiification(We triglyceride fasting insulin(Thedatasassessed of plasmaglucose、fastingplasma byanalysis ttestand of variables variance，paired―samplesqtest，correlations multiple bymultiplestepwiseregression analysis( Results women(thearomatase In mRNA in postmenopausal expression subcutaneousWaS in thanthat theomental higher significantly adipose VS 0(3984-0(022 P O(001: ControlS: tissues Obesjty groups;0(842?0(083 VS P O(001 (Thelevelof 0(3984-0(022 aromatasemRNAin 0(3454-0(032 obesity was thanthatincontrolsatbothsites groupsigni higher ficantly VS VS SC:0(8424-0(0830(715?0(054P O(00l:OM:0(398?0(022 0(3454-0(032 P O(001 (InsubdivisiondifferentionofaromatasemRNA groups，rio expression in tissuesWaSfound and between with endometrium adipose obesity obesity careinoma VS0(845?0(083 P O(05:OM:0(398 ?0(027 groups Sc:0(8394-0(084 VS0(397 mRNA of 4-0(016 levelssubcutaneous P O(05 (Aromantase expression 英文摘要 andomental tissuesinthe were correlatedwith adipose obesity positivelY waistto ratioand hip fastingplasma p O(03l:p O(022 ( aromatasemRNA ConcIUSionIn levelof postmenopausal，theexpression in WaS than inabdominaltissues obesitygroupsignificantiYhigher adipose in thatinnormal mRNA adipose bodyweightwomen，aromantaseexpression and correlatedwithwaistto ratio tissueswas hip positively related and obesity hyperinsuinism(Inpostmenopausalwomen，centralobesity mRNA tothe levelofaromatasein insulinresistancecontributed expression abdominaltissues adipose Mei of Endocrin。 logy fang Department Postgraduate:Lu Yan Directed Shengli，YuanYing by words]Aromatase:Adipose [key reaction chain reverse transcriptasepolymerase 1前言2与方法 前言 目前，胰岛素抵抗及与其相关代谢综合征的病因及其发病机制研究已成 为热点， 肥胖相关性疾病 如糖尿病、高脂血症、高血压、脑血管病、多囊卵巢综合征、及 肿瘤尤其妇科肿瘤等 发病率的增高及严重后果越来越受到重视。己发现，脂肪细 胞不仅有能量储存功能，还有复杂的内分泌及代谢作用。性激素特别是雌激素除在 卵巢及肾上腺产生外，脂肪细胞亦为重要的产生场所，脂肪组织被称为制造雌激素 的“大工厂”，雌激素是脂肪细胞分化及体脂分布的重要调节因子。国外研究【l】已证 明脂肪组织内雄烯二酮转化为雌酮与体重有关，血清中雌酮和雌二醇的水平与体重 呈正相关。在绝经后妇女，由于卵巢功能的衰退，脂肪组织成为雌激素合成的主要 部位。 芳香化酶P450 aromatase cytochrome 一步限速酶，它催化睾酮转化为雌二醇，催化雄烯二酮转化为雌酮，在性腺、脂肪 组织、大脑和皮肤均可见芳香化酶mRNA的表达。近年来国外研究【2。“】发现在雌 激素依赖性疾病如乳腺癌、子宫内膜癌、子宫内膜异位症等疾病中，病灶组织芳香 化酶mRNA高表达，芳香化酶抑制剂已应用于临床治疗乳腺癌、子宫内膜异位症。 关于脂肪组织芳香化酶mRNA表达的研究在国内尚未见报道，其与肥胖及相关代谢 因素的相关研究在国外也甚少。本研究拟观察绝经后肥胖及正常体重女性腹部皮下、 大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达水平，并分析其与体重指数 BMI 、腰臀 比 WHR 、空腹血胰岛素水平 FINS 、血脂等指标的关系。 材料及方法 1研究对象 所有研究对象选自青岛大学医学院附属医院及胜利油田中心医院普通外科及妇 科接受慢性胆囊炎、胃、十二指肠疾病、肝血管瘤、胆石症及子宫内膜癌等择期手 术患者。 1(1病历选择选择绝经后肥胖、肥胖并子宫内膜癌及体重正常女性各10例， 年龄54―65岁，均无慢性肝肾功能损害，排除多囊卵巢综合征、继发性肥胖 如下 2材料与方法 丘脑综合征、垂体瘤、甲减、皮质醇增多症、胰岛素瘤 等疾病，近3个月体重无 明显变化 体重变化 10, ，未接受过节食及减肥药物治疗。手术前测空腹血糖、空 腹血清胰岛素、血脂、血压、身高、体重、腰围、臀围。 1(2分组肥胖症的诊断依据2000年2月WHO西太平洋地区肥胖症特别工作组 提出的亚洲成人体重分级分组: 肥胖组:绝经后肥胖女性20例，其中伴子宫内膜癌10例，BMI?25kg,m2。 对照组:绝经后非肥胖女性10例，BMI 23kg,一。 2试剂和仪器 2(1(试剂 1(RNA提取试剂盒 TRIzol试剂盒 ，购自Sigma公司。 RT―PCR试剂盒，购自德国Qiagen公司。 2(0nestep 3(氯仿。 4(异丙醇。 5(无水乙醇。 6(DEPC，购自Sigma公司。 7(琼脂糖凝胶。 8(溴化己锭 EB 染液 10mg,M1 。 Na210(29硼酸559，加蒸馏水至 9(5xTBE电泳缓冲液 PH8(0 :TrislOSg、EDTA 250ml。 11(芳香化酶引物、磷酸甘油醇脱氢酶引物均由上海生物工程公司技术服务有限公司 合成。 芳香化酶 AROMATASE : 上游引物:5’一GGTcAcAGTcTGTGcTG从Tcc一3’ 下游引物:5’一ACTcGAGTcTGTGcATccTTCc一3’ 磷酸甘油醇脱氢酶 GAPDH : 上游引物:5’--AGGTGAAGGTCGGAGTCAACG--3’ 下游引物:5’--6CTCCTGGAAGATGGTGATGG--3’ Ladder，购自青岛福林生化公司。 12(Maker核酸分子量MakerslOObpDNh 2 2材料与方法 】3(真胰岛素钡0定试剂，购自美国Roche公司，批间差异2(5,，批内差异1(9,。 14，萄萄糖测定试剂盒，购自美国Beckman公司，批阅差异6(2,，批内差异3。6,。 15(胆固醇测定试剂盒，购自美国Beckman公司，批问差异2(1,，批内差异1(6,。 16(甘油三酯测定试剂盒，购自美国Beckman公司，批问差异2(2,，批 内差异i(5,。 2(2(仪器 Research公司PTC-100 。 1(PCR仪 美国MJ 2(低温超速离心机 美国BECKMAN 。 3(超低温冰箱 日本SANYO 。 4(电泳仪 美国BIORAD公司PhC300 。 5(水平电泳槽 北京六一仪器厂DYY―IIl3IB 。 6，微量移液器 法国GiIson德国Brand 。 AEl00 。 7(电子称量仪 METTLER 8(电热磁力搅拌器 深圳天南海北有限公司 。 9(紫外光光度分析仪 10(全自动生化分析仪 日立公司产品7170型 11(旋涡混合器 上海医科大学仪器厂XW一804 。 12(控温烘干箱 潍坊医疗器械厂Kw―I型 i3(匀浆枧 德国IK矗公司 14(紫外光透射仪 WP一92-t型 15(电化学发光仪 德国罗氏公司生产Elecsys2010型 ]6(实验室常用的玻璃仪器 3(研究方法 3(1标本采集和保存 术中取腹部皮下、大网膜脂肪组织300rag，PBS液冲洗后放入冷冻管迅速放入 液氮，然后存入-70。C冰箱中。 3(2检测方法 2材料与方法 3。2，l身高、体重、腰围、臀围和血压测量方法 按照WH01995年推荐方法。身高测量:受检者脱鞋、帽、外衣，背对测量尺， 双足跟并拢，头、后背、足跟紧贴测量尺，准确读出测量数值，以cm为单位，取小 数后一位数:腰围测量:被测者双手下垂站立，双脚分开25cm，用皮尺测量髂嵴上 缘和第12肋下缘连线的中点水平线，重复测量2次，如果误差大于1am，则重新测 定，以cm为单位，取小数后一位数;臀围测量:被测者要求同前，测量环绕臀部的 骨盆最大周径，重复要求和单位同上。血压测定方法:按标准测量方法，被测者安 静休息5分钟，测量基础收缩压、舒张压，以休息后10分钟2次测量，取平均值为 准。 分离心15分钟，取血清，用全自动生化分析仪检测空腹血糖 FBG 、血脂;电化学 发光法测定空腹血真胰岛素水平。 3(2(3有关指标计算方法 1 (体重指数 BMI 体重,身高2 kg,m2 2 (腰臀比 WHR 腰围,臀围 3(3(实验步骤 3(3(1总RNA提取 mlTRIzol匀浆。 1 称取皮下、大网膜脂肪组织各200mg，放入匀浆瓶，各加入2 将匀浆液分别移入1(5mlEP管。 2 2-8。C12000Xg离心10分钟，去除上层脂肪。 3 室温孵育5分钟，使核蛋白复合物彻底分离。加0(4ml氯仿，盖好盖，用手剧烈 震荡15秒。 下层红色酚一氯仿相、中间相和上层的无色水相。RNA完全溶在水相中。 5 把上清水相移入一个新EP管，加入异丙醇lml使RNA从水相中沉淀，室 温孵育 侧壁形成胶状沉淀。 4C离心5分钟，离心 6 RNA的洗涤:移走上清液，加2m175,乙醇洗涤震荡后，2-8 力7000×g。 3(3(2紫外光光度分析仪测量0D260及0D280值，计算RNA浓度 4 2材料与方法 一――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――一 3(3(3 RT―PCR 在50ul反应体系中依次加入下列各组成分: 5xBuffer lOul 5xQ―solution lOul dNTP 2ul 19ul 无RNA酶的水 芳香化酶引物上游:lul 下游:lul GAPDH引物上游:lul 下游:lul RNA lul 约lug 2ul RT―PCR混合酶 OneStep 各引物终浓度为0(6uM，混匀 10000Xg瞬时离心，反应体系置于PCR仪中，按如下程序扩增: 50。C30分钟反转录 95。C 15分钟PCR反应初始激活 Taq DNA聚合酶激活，反转录酶灭活， eDNA模板 预变性 然后 94?45秒变性 52?45秒退火 72?1分钟延伸 共40个循环，最后72。C延伸lO分钟。 3(3(4琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物: u 取PCR扩增产物15l，按5:1 V,V 与6×上样缓冲液混合后，上样于2, p 琼脂糖凝胶 含0(5 g,ml 射仪下观察结果，扩增片段长度分别为600bp、737bp。 3(3(5凝胶成像计算机软件分析 将电泳结果拍照后用计算机软件进行图像灰度扫描半定量分析，以与GAPDH的 相对指标。 4(统计学处理 3结果 应用SPSSl l，0统计软件处理所有数据。所有数值用均数?标准差表示。空腹胰岛素 非正态分布，行数据转换后进行统计学分析。均数比较采用t检验;组问差别采用方差 分析、Q检验;单因素分析用pearson相关分析;多因素分析用多元逐步回归分析。 P O(05为差别具有显著性，P O(01为差别有极显著性。 结 果 一、临床及生化资料比较: 表1 。 VS 肥胖组与对照组体重指数 28(32+1(46 vs VS 1 0(Sg+O(03 O，80?o(05，P O(001 、空腹膜岛素 1S(07+1(50l。 61+2。27， 油三酯 TG 、总胆固醇 Tc 差异无显著性。 二、琼脂糖凝胶电泳结果: 图1 图2 本实验PCR扩增产物芳香化酶737bp，内参照600bp。 三、皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达比较: 表2 。 肥胖组、对照组皮下脂肪组织芳香化酶mRNA的表达量均高于大网膜脂 肪组织 0，398?0，022 VS VS 月巴胖组:0(842?0(083 P O(001:对照组:0， 715?0(054 0(345?0(032 P O(001 。 表2 肥胖组皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达量均高于对照组 SC: VS 0，842?0(083VS O(345 ?0(032 0(715?0(05;P O(00l:OM:0(398?0(022 t3 0(001 。 表3 。 四、亚组分析:各亚组皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mPSh的表达比较: 表4、表5、 表6 其中肥胖合并子宫内膜癌的患者比较肥胖不伴子宫内膜癌者皮下、大网膜脂肪 VS0(839?0(084 组织芳香化酶mRNA的表达无差异 SC:0(845?o(083 P O(05，OM: VS 0(397?0(0160(398?0(027P O(05 。 五、皮下脂肪组织芳香化酶mRNh的表达量与各参数相关分析: 表7 与SBP、DBP、FBG、TC无相关。 对照组皮下脂肪组织芳香化酶mRNA的表达量与各参数间无相关性。 6 4讨论 六、大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达量与各参数直线相关分析: 表8 无相关。 对照组大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达量与各参数间无相关性。 七、多元逐步回归相关分祈: 变量进行多元逐步回归分析显示 表9 :肥胖组WHR、FINS进入回归方程， 与皮下 019、O04。 脂肪组织芳香化酶mRNA的表达正相关，P值分别为O 量进行多元逐步回归分析显示 表10 :肥胖组FINS、WHR进入回归方程， 与大网 03l。 膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达正相关，P值分别为0(022、o 讨论 芳香化酶是雌激素合成过程中的关键酶。绝经后妇女随着卵巢功能的丧失，体 内性激素会发生很大变化，雄激素在脂肪组织通过芳香化酶的作用局部合成雌激素， 脂肪组织成为体内雌激素的主要来源部位。在脂肪组织，由于脂肪细胞中脂质小滴 隔绝了类固醇激素的作用，芳香化酶mRNA的表达主要位于脂肪间质细胞，随着年龄 的增长、体重的增加，循环中的雄烯二酮转化为雌酮的效率逐渐增加，脂肪间质细 胞芳香化酶的特异活性也在增加„。我们观察在绝经后肥胖女性皮下、大网膜脂肪 组织芳香化酶mRNA的表达水平较正常体重女性高，提示脂肪组织芳香化酶mRNA的 表达水平与体重有关，肥胖个体脂肪组织内雄激素转换为雌激素增多。 国外研究发现在绝经后子宫内膜癌患者的癌组织中有芳香化酶mRNA的表达，芳 香化酶的活性增强，而在正常的子宫内膜和蜕膜中未发现有表达，还有研究发现在 子宫内膜癌的患者卵巢无芳香化酶mRNA的表达pl，提示子宫内膜癌与癌灶局部雌 激素水平增高有关。本文亚组分析结果表明，肥胖合并子宫内膜癌的患者腹部皮下 及大网膜脂肪组织中芳香化酶mRNA的表达水平较正常体重的绝经后女性 高，但与同 组的肥胖女性无差别，提示子宫内膜癌的发生与腹部皮下及大网膜脂肪组织中芳香 化酶mRNA表达水平增高引起局部雌激索水平增高无关。 皮下脂肪与内脏脂肪具有不同的生物学特性，国外Philip[61等研究发现由于在 皮下脂肪、内脏脂肪中糖皮质激素受体的分布不同，影响了糖皮质激素可诱导的芳 香化酶活性，皮下前脂肪细胞芳香化酶的活性高于内脏前脂肪细胞，约为其Io倍左 7 4讨论 右。体外细胞培养发现，糖皮质激素可刺激绝经后大网膜前脂肪细胞芳香化酶活性， 而在绝经前女性大网膜前脂肪细胞芳香化酶活性无明显增加;当给予糖皮质激素及 胰岛素共同刺激芳香化酶活性，绝经期前、后女性大网膜前脂肪细胞芳香化酶活性 无差异。提示在绝经期这个特殊的生理状态改变了芳香化酶的活性及对某些激素的 反应。本研究发现在绝经后女性皮下脂肪组织芳香化酶mRNA的表达水平高于大网膜 脂肪组织，约为其2倍，与国外研究芳香化酶活性不同，这种差异可能是由于脂肪 细胞的分化、翻译水平的调控及mRNA的稳定性不同导致。 有研剂?表明肥胖相关性胰岛索抵抗受体内脂肪组织总量及其分布的影响。腹 部或内脏脂肪和皮下深部脂肪组织均与胰岛素抵抗关系密切，且与糖尿病、 脂质代 谢紊乱密切相关。国外有研究表明在脂肪间质细胞中，瘦素能调节芳香化酶的活性 【8】，皮下脂肪为瘦索产生的主要部位【9l，肥胖个体存在瘦素抵抗，肥胖女性瘦素水平 的增加可引起皮下脂肪组织芳香化酶水平的升高。最终引起局部雌激素的升高[”。 女性内脏脂肪较少，皮下脂肪多，绝经后出现腹部脂肪沉积 腰围增加 ，内脏脂肪 组织含量仅为总脂肪组织的6-20,，但其与胰岛素抵抗密切相关。本研究显示在绝 经后女性皮下脂肪组织芳香化酶mRNA的表达水平高于大网膜脂肪组织。肥胖女性大 网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达水平高于正常体重女性，表明芳香化酶mRNA的 表达水平与脂肪组织的量和分布有关，提示可能与肥胖相关性胰岛素抵抗有关。 绝经期后，随着芳香化酶活性增加，局部雌激素水平的增加导致雄激素代谢的 活跃，尤其是在伴有内脏型肥胖的女性，腹内大网膜脂肪组织雄激素水平逐渐增加 [11，出现雄激素与雌激素比例的失调，局部性激素的含量是决定脂肪分布的重要因 素。雌激素可刺激乳腺及皮下组织的脂肪生成，雄激素则能促迸中心性肥胖的形成， 雌激素通过其脂肪分解和脂质合成的作用增加前脂肪细胞的分化和成熟脂肪细胞的 大小，来调节脂肪组织的量。在脂肪组织内，局部雌激素的水平主要取决于芳香化 酶mRNA的表达水平，因此，芳香化酶在调节脂肪组织的分布和大小上起着重要作用 【”。11]J。绝经后肥胖女性脂肪组织芳香化酶mRNA表达增强，导致局部雌激素水平的 增高，改变体脂分布，内脏脂肪沉积，加重胰岛素抵抗。本研究结果显示，肥胖组 皮下与大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达水平均与WHR呈正相关，提示芳香化酶 映胰岛索抵抗程度[121。 本文结果还显示脂肪组织中芳香化酶mRNA的表达与FINS呈正相关。雌激素对 胰岛素敏感性有双重作用【”】，适量雌激素可改善胰岛素抵抗，大量雌激素则加重胰 岛素抵抗。又有研究认为胰岛素可促进雌激素的合成，在动物卵巢颗粒细胞体外培 诱导芳香化酶mRNA的表达的作用增强。芳香化酶mRNA的表达与胰岛素之间可能有 8 5结论 一个正反馈作用，最终加重胰岛素抵抗。芳香化酶mRNA的表达是由多个组织特异 性的启动子驱动的，在正常脂肪组织中芳香化酶的启动子为I(4，在病理状态也可 为P II、I(3ll”。脂肪细胞分泌的多种细胞因子均可以通过介导启动子来调控芳香 胞因子均和胰岛素抵抗有着密切的联系，有研究表明，能改善胰岛素抵抗的曲格列 酮[191、二甲双胍120l可以降低芳香化酶的活性。由于芳香化酶随着年龄、体重的增加， 活性增加，同时女性在绝经期前后由于FSH、LH的增高，刺激芳香化酶的活性，且 孕酮的减少，解除了其对芳香化酶活性的抑制【21】在绝经期后芳香化酶mRNA表达增 强，局部雌激素水平增加，同时雄激素水平发生变化，影响了脂肪细胞的分化和增 生，改变体脂分布，内脏脂肪沉积，脂肪组织分泌的多种细胞因子与芳香化酶形成 正反馈，加重胰岛素抵抗。 结 论 绝经后肥胖女性皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达水平高于正常体 重绝经后女性;皮下脂肪组织芳香化酶mRNA的表达水平高于大网膜脂肪组织;脂肪 组织芳香化酶mRNA的表达水平与WHR、FINS水平呈正相关。提示绝经后女性腹型肥 胖及肥胖相关的胰岛素抵抗与腹部脂肪组织内芳香化酶m,,NA表达水平有关。 9 附图 附 图 Ladder;第二泳道为皮下脂肪组织;第三泳道 注:第一泳道为makerlOObpDNA 为大网膜脂肪组织 图l:2,琼脂糖凝胶电泳绝经后女性皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA 的比较，PCR扩增产物芳香化酶737bp，内参照600bp 附图 Ladder;第二泳道为肥胖合并子宫内膜癌:第 注:第一泳道为makerIOObpDNA 三泳道为正常对照;第四泳道为肥胖未合并癌 图2:2,琼脂糖凝胶电泳绝经后女性脂肪组织芳香化酶mRNA的比较，PCR 扩增产物芳香化酶737bp，内参照600bp 附表 附表 表l各组临床和实验室资料 in and 1 andbiochemicaldata control TablOC1inical obesity groups 28 089-士0 5(61士 0(5518(0741(50 59(1 34 3241(46 03 20 5?3 Obesity 56 27 21 080-X005 526土0 11(61土2 59(1帕051 4041(25 Control 8(537 0 12 6487 1(398 038 782 t值 0(001 O O(001 O(173 O(970 001 P值 删 例数 。 。，三毒 。三脚 。一TG?， 85 74 5土10(89 81，946 128 1(6540(58 5,20士0 20 Obesity 70 78士 7(89 68 12150士12 l 4340(62 4(7240 Control l 398 I571 I 723 0947 t值 0(303 0(807 0096 0352 P值 茳:Obesity:肥胖组;Control:对照组 blood blood pressure;gMI:体 pressure;DBP:舒张压Diastolic Age:年龄:SBP:收缩压Systolic to hip index:w豫:腰臀比Waist weight 重指数body insulin plasmaglucose:FINS:空腹胰岛素Fasting cholester01(FPG:空腹血糖Fasting lotal 附表 表2皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的t检验结果 2 of testofaromatasemRNA insubcutaneous TableResultt expression omental tissue and adipose AtomOm AtomSC t值P值 例数 组别 0001 083 29，802 20 O842:L0 O(398士0(022 Obesity 59 O(001 345土0032 19 10 O(715士0(054 O Control 注:Obesity:肥胖组:Controh对照组 subcutaneous:Arom Arom Om:芳香化酶大网膜脂肪 Sc:芳香化酶皮下脂肪Aromatase Aromataseomental 表3组间皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的t检验结果 mRNA insubcutaneous of ofttestaromatase 3 Result Table expression between tissue andomental groups adipose P值 Con打ol t值 项目 Obesity O(001 4366 0715士0054 0842土0083 Se Atom 032 5319 0(001 O 0398-1-0022 345-L-0 A?mOm 13 附表 表4亚组分析:各组皮下、大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的方差分 析 Table4 Subdivisionof ofvarianceofaromatasemRNA groups:analysis insubcutaneousandomental tissue expression adipose ControlEndometrium F值 P值 Obesity 项目 Simple 0845士0083 922 0001 0840715士0(054 AtomSe 0839士0 1361 0(001 016 Om 0(398土0(0270(345士-0(0320(397士0 Atom 注:Simple 表5亚组分析:皮下脂肪组织芳香化酶mRNA两两比较q检验结果 of mRNA of testaromatase of Subdivision Table5 groups:Resultq tissue insubcutaneous adipose expression 对比组 两均数之差 q值P 5 00021 3861 O(1301 Endometrium:Control 0 08532 2641 0(0064 Endometrium ObesiW Simple 5 0(0013 1220 0(1238 Obesity:Control Simple ―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――― 一――――――――――――――――――――――――――――――――――d_―――――――――――――――――――――――――――一 14 附表 表6亚组分析:大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA两两比较q检验结果 Table6 Subdivisionof of testof mRNA aromatase groups:Resultq inomental tissue expression adipose 对比组 两均数之差 p q值 6 0(0523 3220 0(0002 Endometrium:Contr01 0 09250 0011 0(1343 Obesity Endometrium:Simple 00534 0(4563 O(0003 Obesity:Control Simple 表7 皮下脂肪组织芳香化酶mRNA的表达与各临床指标的相关系数表 r 值 betweenthe levelof ofcorrelation 7 Coefficient Table expression Clinical tissueand insubcutaneous mRNA parameters aromatase adipose DBP Tc SBP TG 组别 例数 mmoVL retool,L 15 附表 表8 大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA的表达与各临床指标的相关系数表 r 值 8 TableCoefficientofcorrelationbetweenthe levelof expression aromatasemRNAinomental tissueand adipose clinica]parameters DBP TC TG SBP 例数 组别 mmol,L mmol,L 表9 多元逐步回归分析:以皮下脂肪组织芳香化酶mRNA为因变量 mRNA ofaromatase Table9 expression analysis regression multiplestepwise in tissue subcutaneous in obesitygroup adipose 5 Sx p 组别 自变量 16 附表 表10多元逐步回归分析:以大网膜脂肪组织芳香化酶mRNA为因变量 Table10 ofaromatasemRNA multiplestepwiseregressionanalysiS in inomental tissue expression adipose obesitygroup B Sx 组别 自变量 p 17 参考文献 参考文献 1 Cristina and CaberoAnna and Puche，Marta Jose，Albert MeseguerExpression the of P450ci7in human enzymatiC activity gene adipose of Journal Endocrinology2002， 146 :223―229 2 MaggioliniM，CarpinoA，Bonofig]io D，PezziV，RagoV，MarsicoS，Picard S(Thedirect stimulus of D，Ando proliferatire onMCI?7breastcancercellsiS ofaromatase( potentiatedby overexpression Mel CellEndocrinol200lNov 26:184 卜2 :163-7l 3 DheenadayaluK，MakI，GordtsS，CampoR，眦ghamJ，PuttemansP，White P450 I NA J(Aromatasemessengerexpression J，ChristianM，FusiL，Brosens is a marker in endometriumnot for endometriosis( specific pelvie eutopic Ferti】Steril2002 Oct:78 4 :825―9 4 Tarkowski S，Kotarski R，SkrzypczakM，Winiarczyk J，JakowickiJA， in (1akimiukAJ(Aromatase P450AROM mRNAexpression andaromatase inendometrialcancer andmal endometrium activity ignant Pol2000 tissueeulture(Ginekol Mar:71 3 :130一5 of Cacid ribonuclei 5 M(Urban messenger encoding RJ(Expression Nagamani in stereidogenicenzymespostmenopausa]ovaries(SocGynecolInvestig 2003 Jan-Feb:lO 1 :37―40 of 6 G(Mcternan，LEAHA(Anderson，etal，G1ucocorticoidregulation Philip site P450aromataseaetiviinhuman and ty adiposetissue:gender EndocrineMeta differenees(C1in 2002，87 3 1327―1336 of David a1(Subdivision 7 Thaete，FredThoost，et E(Kelley，F(Leland tissueandinsulinresistance(Am subcutaneousabdominal adipose J EndoerinolMetab 2000 278 :941―948 Physiol of 8 AJ(Leptin DA，Weitsman SK，dakimiuk regulation Magoffin SR，Aagarwal cellS women( aromatasein stromalfrom activityadipose regularlycycling Pol1999 Ginekol Jan:70 1 :1―7 9李秀钧(脂肪组织是又一个新的内分泌器官(国外医学内分泌学分 册(2002;22 120一13l 3 : S(Gender MeTernan PM，Kumar 10 MC，BarnettAH，Stewart PG，AnwarA，Eggo andactivi in ofP450aromatase the differences ty regulation expression 18 参考文献 in human tissue( Int Obes Relat adipose Metab J Disord2000 Jul:24 7 :875-8 U Joyner DP(Glucocorticoid JM，HutleyLJ，Cameron inhuman receptors and differences( preadipocytes:regional Endocrinol gender 2000 Jul: 166 1 :145-52 12龚艳春，郭翼珍，宁光，等(微小模型法分析高血压病非糖尿病患者胰 岛素抵抗( 中华心血管病杂志，2001，29 11 :674―679 13 a1(Insulin and WangerJD，ThomasMJ，Williams JK，et sensitivity cardiovascularriskfactorsinovariectomized with estrsdiol monkeys or alone combinedwith acetate( C1in Endocrinol nomegestrol Metab，1998，83 3 :896 14Bhatia CA(Insulinalterstheeffectsof follicle B，Price stimulating hormoneon in aromatasebovine cellSin vitro(Steroids200l granulosa Jun:66 6 :5ll一9 15 ofthehuman Hinshelwood瑚(MendelSOIl CR(Tissue―specifiC expression in and tissueof mice( CYPl9 aromatase geneadipose ovary transgenic BiochemMolBiol200l Steroid Dee:79 卜5 :193―201 16Purehit oftumornecrosis MJ(Inhibition A，GhilchikMW，Reed A，Singh aromatase factor alpha―stimulated by activity and Bioehem ResCommun 2-methoxyestradi01( agents，paclitaxel Biophys 1999 22:261 1 :214―7 Jul 17 ia LeoV( La M，Cianci G，Palumbo A，PetraglF，De MA，Morgante treatmentreducesaromatase in to activity Insulin―lowering response hormoneinwomenwith foll polycysticovarysyndrome( icle―stimulating FertilSteril2002 Dec:78 6 :1234―9 Y( 18 Machinal―Quelin F，DieudonneMN，PecqueryR，LeneveuMC，Giudicelli effectsof and onob Directinvitro androgensestrogens geueexpression inhuman tissue(Endocrine2002 and secretion adipose Jul:18 2 : leptin 179―84 Rubin ER( 19 CJ，Murata GL，DuongJH，ClyneCD，Speed Y，GongC，Simpson andthe forthe peroxisomalproliferator―activatedreceptorgamma Ligands retinoidX inhibitaromatase receptor cytochrome breast 2002 mediated IIinhuman by adipose(Endocrinology promoter Aug:143 8 :2863―71 19 参考文献 V( Leo ia F，De La A，Petragl 20 G，PalumboM，Cianci MA(^lorgante to in reduceswromatase treatment activityresponse Insulin―lowering with inwomen hormone ovarysyndrome( poiycystic foilic