比色法测定南蛇藤中总三萜类成分的含量

比色法测定南蛇藤中总三萜类成分的含量 比色法测定南蛇藤中总三萜类成分的含量 作者: 季春 张融 胡晨 游文玮 佟丽【摘要】 目的建立南蛇藤提取物总三萜类成分的含量测定方法，为南蛇藤药材的质量控制提供依据。方法采用比色法进定，以齐墩果酸为对照品，样品经5%香草醛-冰醋酸、高氯酸显色，在560 nm处测定。结果在0.42,16.8 μg?ml-1范围内吸光度与含量成良好的线性关系，r=0.999 3(n=7)，平均加样回收率为98.22%，RSD=3.77%(n=6)。结论该法操作简便、快速、灵敏，测定结果准确、可靠，可作为南蛇藤药材的一种定量方法。 【关键词】 南蛇藤 总三萜 比色法 南蛇藤Celastrus orbiculatus Thunb.系卫矛科(Celastraceae)南蛇藤属Celastrus藤本植物，又名过山风、黄藤、降龙草等。南蛇藤始载于清代《植物名实图考》,1,，其藤茎、根、叶、果实、种子均可入药，药性辛温、有小毒，功效祛风、除湿、活血、解毒、消肿，主要用于治疗筋骨疼痛、腰腿痛、风湿性关节炎、跌打损伤、痈肿疮疡等病症,2,。前期实验结果明，南蛇藤提取物具有较好的抗炎镇痛作用，并对大鼠佐剂性关节炎具有较强的抑制作用,3,5,。为进一步控制药材质量，本实验采用香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法，对南蛇藤提取物中的总三萜类成分进行含量测定。 1 仪器与材料 -可见光分光光度计(惠普公司 美国)，Sartorius CP225D十 1.1 仪器HP8453紫外 万分之一天平(赛多利斯有限公司 德国)。 1.2 试剂高氯酸、冰醋酸、醋酸乙酯、甲醇、香草醛均为分析纯，由广州化学试剂公司提供;齐墩果酸对照品购于中国药品生物制品检定所(批号110709-201704);南蛇藤从广东省药材公司购买，经南方医科大学中医药学院中药鉴定教研室马骥教授鉴定为南蛇藤Celastrus orbiculatus Thunb.。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的配制精密称取齐墩果酸对照品10.5 mg，置10 ml容量瓶中用甲醇定容。再准确移取2 ml此溶液至10 ml容量瓶中并用甲醇定容，制成0.21 mg?ml-1对照品溶液。 2.2 供试品溶液的制备称取南蛇藤原药材1 000 g，用8倍量75%乙醇回流提取2 h，过滤，滤渣再用5倍量75%乙醇回流提取1 h，过滤，合并滤液并浓缩至每克浸膏相当于原药材2,4 g。浸膏用蒸馏水洗涤，60?恒温箱干燥24 h。精密称取该干燥粉末100 mg，用甲醇超声提取30 min，转移至100 ml容量瓶中定容。准确移取4 ml至100 ml容量瓶中用甲醇定容，即得浓度为0.04 mg?ml-1的供试品溶液。 2.3 测定波长的选择取齐墩果酸对照品溶液，(空白对照为不加对照品溶液用醋酸乙酯稀释至刻度的混合溶液)加5%香草醛-冰醋酸0.4 ml，高氯酸 1.6 ml显色,6,后，进行可见-紫外全波长扫描。结果表明，对照品溶液在560 nm处有最大吸收峰(如图1)，多次重复，峰形一致且空白对照无干扰，故选择560 nm作为样品测定的波长。 图1 齐墩果酸可见-紫外吸收峰图 2.4 曲线的制备精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.02，0.05，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 ml，水浴挥干，分别加5%香草醛-冰醋酸0.4 ml，高氯酸 1.6 ml,6,，置70?水浴加热15 min，迅速冰浴冷却后，转移至10 ml的量瓶中加醋酸乙酯定容至刻度，摇匀。在560 nm波长处测定吸收值A，空白对照为不加对照品溶液而直接加5%香草醛-冰醋酸0.4 ml，高氯酸 1.6 ml，用醋酸乙酯稀释至刻度的混合溶液。 标准曲线: A=59. 983C-0.020 6，其中C为浓度(mg?ml-1)，A为吸收度。 相关系数: r=0.999 3，线性范围为0.42,16.8 μg?ml-1。