3种血清总胆红素测定方法的比较
3种血清总胆红素测定方法的比较 '
3462?现代中西医结合杂志
ModernJournalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine2007Aug.16(24)
3种血清总胆红素测定方法的比较
贾丽霞,张红艳,程书珍
(河北工程大学医学院,河北邯郸056002)
[摘要]目的对钒酸氧化法,改良J—G法,胆红素氧化酶法进行方法学比较,选择胆红
素测定的最好方法.方法用钒酸氧化法,改良J—G法和胆红素氧化酶法测定血清中的总胆
红素,按NCCLC评价方案系统评价其重复性,回收率,线形范围及溶血,脂血对胆红素测定的干
扰影响,然后对测定结果进行比较.结果钒酸氧化法与改良J—G法,胆红素氧化酶法有良好
的相关性;其回收率均在95.0%,105.0%;其线形范围分别是:0,678mol/L,0,634mol/
L,0,575;amol/L.三酰甘油?8.0mmol/L,血红蛋白?6,0mmol/L对钒酸氧化法无明显干扰.
结论钒酸氧化法测定胆红素准确,灵敏,稳定,线形范围宽,是测定胆红素的理想方法.
[关键词]胆红素;钒酸氧化法;改良J—G法;胆红素氧化酶法
[中图分类号]R730,43[文献标识码]A[文章编号]1008—8849(2007}24—3462—02 Comparisonofthreetechnologytodetermineserumtotalbilirubin
JIALi-xia,ZHANGHong-yan,CHENGShu-zhen (MedicalCollegeofHebeiUniver~tyofEngineering,Handan056002,Hebei,China)
Abstract:0bjectiveItistoselectthebestmethodtodeterminebilirubinthroughtechnologyco
mparisonbetween
vanadicacidoxidationmethod,improvedJ—
GmethodandBilirubinOxidasemethod.MethodsSerumtotalbilirubinwasde—
terminedbyvanadieacidoxidationmethod,improvedJ—
GmethodandBilirubinOxidasemethod.Reproducibility,recovery rate,filaterange,interferenceofhaematolysisandlipaemiawereevaluatedbyNCCLCsyste
m,andthentheresultswere
compared.ResultsTherewerefavourabledependabilitybetweenvanadicacidoxidationmet
hod,improvedJ—Gmethodand
BilirubinOxidasemethod.Recoveryratewereallbetween95.0%,
105.0%;filaterangewas0,678/,mol/L,0,634
~mol/L,0,
575~mol/Lrespectively.Therewerenotobviouslyinterferencetovanadicacidoxidationmet
hodwhenTG?8.0
mmol/L,HB?
6.0mmol/L.ConclusionVanadicacidoxidationmethodisaccurate.sensitive,stableandhas
widefilate
range.Soitisidealmethodtodeterminebilirubin, Keywords:bilirubin;vanadicacidoxidationmethod;improvedJ—
Gmethod;BilirubinOxidasemethod
血液中胆红素含量的改变能够反映机体肝胆脏器的功能
状况,胆红素测定作为肝胆疾病等诊断的一个重要指标已经
广泛应用于临床llJ.目前胆红素测定有改良J—G法,胆红
素氧化酶法等,但它们或显色时间相对较长,要求时间特别准
确,或所用试剂成本昂贵,无法长期稳定l2],都有其局限性.
随着科学技术的发展,尤其全自动生化分析仪的普及使用,要
求寻找一种更为简便,准确,稳定且能抗干扰的测定方法尤为
重要.笔者对钒酸氧化法,改良J—G法,胆红素氧化酶法测
定胆红素的结果进行比较,现报道如下.
1实验
1.1仪器日立7600全自动生化分析仪.
1.2试剂钒酸氧化法试剂:上海科华一东菱诊断用品有限 公司生产.改良J—G法试剂:宁波美康生物技术有限责任公 司生产.胆红素氧化酶法试剂:北京利德曼生化技术有限公 司生产.
1.3方法分别采用钒酸氧化法,改良J—G法,胆红素氧化 [作者简介]贾丽霞(1972一),女,实验师,主要从事生物化学教 学工作.
酶法测定总胆红素值,3种方法的参数见表1. 表1各实验参数表
1.4血红蛋白制备抽取4mL新鲜静脉血置于生理盐水试 管中,用生理盐水反复洗涤数次后,加人蒸馏水反复摇匀,使 红细胞完全溶解(瑞氏染色镜下检查),离心沉淀后取上清液, 用红细胞分析仪多次测定其血红蛋白浓度为80g/L. 2结果
2.1重复性实验?批内变异:制备不同的混合血清2份, 分别用钒酸氧化法,改良J—G法,胆红素氧化酶法在全自动
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分析仪测定总胆红素20次.混合血清的平均批内变异系数 (CV)分别为1.36%,1.15%,1.57%.?批间变异:将上述的 混合血清,分装成19份置于0.5mL离心管内,避光保存于一 20?冰箱中.每天各取1份标本,用钒酸氧化法,改良JG 法,胆红素氧化酶法测定血清总胆红素,连续检测20d,平均 批间CV分别为2.34%,2.18%,2.79%,重复性较好. 2.2回收试验取总胆红素浓度为44.8/~mol/L混合血清
标本0.9mL两份,分别加入浓度分别为212.5t~mol/L和 356.7"mol/L胆红素标准血清0.1mL,混合均匀后分别用钒 酸氧化法,改良JG法,胆红素氧化酶法测定总胆红素浓度, 其平均回收率分别为:103.5%,98.2%,101.6%. 2.3线形范围取患者黄疽血清和健康人正常血清各1份, 将健康人正常血清标本编为1号,患者黄疸血清标本编为5 号,2,4号标本分别由健康人正常血清与患者黄疸血清按4: 1,1:1,1:4混合而成,用钒酸氧化法,改良J—G法,胆红素氧 化酶法测定1,5号标本的总胆红素浓度,平行测定4次,取 其平均值作为测定值,与设定值作线形对比.按NCCLS制 定的评价方案进行评价,钒酸氧化法在675/,mol/L范围 内,线形良好:Y=1.04X一0.48,r=0.95;改良J,G法在 653/,mol/L范围内,线形良好:Y2:0.96X+2.84,r=0.97;胆 红素氧化酶法在649tanol/L范围内,线形良好:Y3=0.99X+ 1.53,r=0.98.各方法在其相应线形范围内,均有良好的线 形相关.
2.4干扰试验?溶血干扰试验:取1份黄疸患者血清混合 而成的中值血清标本,分为2份.其中一份取0.9mL,加人 0.1mL的生理盐水,作为1号标本;另一份取0.9mL,加人 0.1mL上述制备的血红蛋白液,作为5号;1号和5号按3:1 混合作为2号,二者等量混合为3号,1:3混合为4号.1,5 号标本血红蛋白的浓度分别为0,2.0,4.0,6.0,8.0g/L.分 别用钒酸氧化法,改良J—G法,胆红素氧化酶法对1,5号标 本进行测定,结果见表2.?脂血干扰试验:取1份重度脂血 标本(已知三酰甘油含量为7.84mmol/L,按上述溶血干扰试 验方法测定三酰甘油对这3种方法的干扰情况,结果见表3. 3讨论
血清胆红素定量测定是检查肝,胆功能的一项重要检测 项目,是诊断和鉴别诊断黄疸性疾病的重要指标,对观察病程
表2Hb对3种测定方法的干扰试验(4-_s,/~mol/L) 表3三酰甘油对3种测定方法的干扰试验(?S,tLmol/L) 有积极的意义.目前,胆红素的检测常用的方法有改良J—G 法和胆红素氧化酶法.改良JG法有较高的灵敏度和精密 度,但试剂无法长期稳定,需要临用时配制;胆红素氧化酶法 则因试剂成本较贵,限制了其在临床上的广泛应用.钒酸氧 化法是日本学者Tokuda等l4]建立的测定血清胆红素的实验 方法.其测定原理是:在pH3.0的条件下,血清胆红素与钒 酸作用生成胆绿素,在450nm通过检测其吸光度的变化,其 差值与胆红素的含量成正比,然后与标准相比较求得标本中 的胆红素含量.钒酸氧化法采用双试剂,克服了单一试剂易 受血清本底干扰和试剂不稳定的不足,能更有效地抵抗标本 溶血,脂血的干扰影响;钒酸氧化法具有较好的准确性和重复 性,批内差异和批间差异均小于5%,回收率103.5%;其线形 范围良好,在线形范围内有较好的相关性;钒酸氧化法方法简 单,试剂价格便宜,存储要求低,易于全自动生化分析仪使用, 适合于临床上广泛应用.
[参考文献]
[1]AminSB.Clinicalassessmentofbilirubin—inducedneurotoxicityin
prematureiMants[J].SeminPerinatol,2004,28(5):340—347 [2]宋克征,沈瑛.胆红素及检测方法研究的进展[J]国外医学临 床生物化学与检验学分册,2002,23(5):283—284 [3]杨昌国,许叶,张抗.线形评价和干扰试验中NNCCLS评价方 案的应用[J].临床检验杂志,1999,17(3):184—186 [4]TokudaK,Tanimotok.Anewmethodofmeasuringhilirubinin
serumbyVanadieaeid[J].JpnJClinChem(inJapaneswithEng— lishabstract),1993,22:116—122
[收稿日期]2007—03—22
(上接第3461页)使得可以在
单上备注说明白色假丝酵
母菌及热带假丝酵母菌干扰仪器法红细胞结果.此外,有报 道其他氧化酶阳性的细菌也会出现类似的干扰情况,常见的 菌如金黄色葡萄球菌,假孢菌等,Tsukaharal4有相同的报道. 因而对于菌尿的标本一定要注意细菌对干化学法红细胞的影 响,尤其对假丝酵母菌菌尿,因其在镜检形态有时易与红细胞 混淆.只有准确认识尿分析诸多干扰因素及机制才能为临床 提供更准确可靠的实验结果.
[参考文献]
[1]马骏龙,丛玉隆.,菌尿对尿液分析仪测定尿红细胞的影响[J]. 中华医学检验杂志,1999,22(4):205—207
[2]HeangML.False'hematuria'duetobacteriuria[J].ArchPathol
LabMed,1995,119:717—719
[3]刘少娟,彭湘明,郭雅军,等.泌尿系统感染病原菌分布及耐药 分析[J].广州医药,2006,(3):37
[4]TsukaharaKDeterminationofthesiteresponsibleforhematuria
[J].ShoniIgaku,1990,23:773—776
[收稿日期]2007一O1—31