尼尔雌醇对去势雌性大鼠1,25双羟维生素D水平的影响

尼尔雌醇对去势雌性大鼠1,25双羟维生素D水平的影响 尼尔雌醇对去势雌性大鼠1,25双羟维生素 D水平的影响 544 复里亏 Un 搪 iv 医 M 学 ed 版 SFudanUnivJMedSc2.1.s.p,37(5)i 尼尔雌醇对去势雌性大鼠1,25双羟 维生素D水平的影响 周轶蒲画华徐小雅李斌高建军金慰芳 (复旦大学放射医学研究所骨代谢研究室上海200032;上海市徐汇区中心医院上海200031 复旦大学附属妇产科医院妇产科上海200040) 【摘要】目的研究卵巢摘除(ovariectomy,OVX)后大鼠血清 25(0H)D,1,25双羟维生素DE1,25(OH)zD3水 平和骨表型的变化及雌激素干预效果.方法采用6月龄SD雌性大鼠双侧卵巢摘除术建立去势骨质疏松模型 并随机分为去势模型组(OVX组)和去势后雌激素干预组(OVX—E组),另设假手术对照组(SHAM组),每组10 只.术后5周OVX—E组开始灌服尼尔雌醇(1mg/kg,2次/周),其他组灌服饮用水作为对照,均给药13周.采 用酶免法(EIA)检测血清25(0H)D和1,25(0H)2D水平,用体积骨密度(volumebonemineraldensity,vBMD) 和骨小梁面积(Bv/TV)等指标进行骨表型分析.结果OVX组血清25(OH)D水平保持稳定,与SHAM组比较 差异无统计学意义.去势后1,25(OH)D水平显着升高,OVX组为63.1pmol/L,较SHAM组的38.5pmol/L增 加了64(P<O.001).OVX大鼠骨密度降低,较SHAM组分别减少9.5(股骨,P%0.001)和9.8(腰椎,P< 0.001).同时出现骨小梁面积减少和尿吡啶酚增加(58.7,P<O.05)等骨质疏松表型.VI服雌激素后,血清 1,25(OH).D水平较OVX组明显下降60.8(P<0.001),甚至低于SHAM组(P<0.01),同时延缓骨丢失和改善 骨微结构.结论去势影响大鼠维生素D(vitaminD,VD)代谢,致血清1,25(OH)zD水平明显升高,小剂量雌 激素对VD代谢改变和骨丢失具有显着纠正作用. 【关键词】卵巢摘除;1,25双羟维生素D;雌激素;骨质疏松 【中图分类号】R336;R589.5【文献标志码】A Changesof1,25dihydroxyvitaminDlevelsinovariectomy femaleratsafterNilestrioltreatment jun,JINWei ZHOUYi’,PUHua—hua.,XUXiao—ya,LIBin.,GAOJian— —fang? (DepartmentofBoneMetabolism,InstituteofRadiationMedicine,FudanUniversity,Shanghai200032,China .XuhuiCentralHospitalofShanghai,Shanghai200031,China;DepartmentofObstetricsandGynecology, ObstetricsandGynecologyHospital,FudanUniversity,Shanghai200040,China) [Abstract]ObjectiveTostudythechangesofrenalvitaminDmetabolismandskeletonphenotypesin ovariectomizedratsandeffectsofestrogentreatment.MethodsFemaleSDrats(=30)wererandomly dividedinto3groups(“=10foreach).Bilateralovariectomyforovariectomy(OVX)andOVX-estrogen (OVX-E)groups,andshamsurgeryforSHAMgroupwereperformedat6monthofagerespectively. Meanwhile,estrogen(1rag/kgNilestriolin2mLdrinkwater)inOVX-Egroupwasadministeredtwiceaweek bygavagesfrom6to18weeksafteroperation.Samevolumeof&inkwaterwasusedasthecontrolf0rOVX andSHAMgroups.TheserumvitaminDlevels,calciumandphosphate,andskeletonphenotypeswere investigatedatthemiddleorendofexperiments.ResultsTheserum1,25(OH)2DlevelinOVxratswas 63.1pmol/L,increasedby64(P<0.001)comparedwith38.5pmol/LinSHAMThehigh1,25(OH)2D leve1wasbackdovcnto24.7pmol/LbyestrogentreatmentinOVX_E(一 60.8versusOVX,P<0.001), whichwaslowerthanthatinSHAM(P%0.O1).TheosteoporoticphenotypesinOVXratswereshowedbythe decrease(一9.5%infemur,P<0.001and一 9.8inlumbar,P<0.001)ofvolumebonemineraldensity (vBMD),andthedecreaseofbonevolumeasdeterminedbyhistomorphometryanalysis.Boneresorptionwas activatedafterovariectomyasshowedbytheincreasedurinePyDexcretion(58.7%,P<0.05).Meanwhile, ?CorrespondingauthorE—mail:jinwf@shmu.edu.cn 周轶,等.尼尔雌醇对去势雌性大鼠1,25双羟维生素D水平的影响 545 thecalciumlevelsinserumandurineofOVXratswerelowerthanthatinSHA ?LTheskeletonphenotypes wereimprovedbyNilestrioltreatmentshowedbyincreasedvBMDandbonevolume,increasedserumcalcium anddecreasedurinePyDexcretion,whiletheurineCaexcretionstillkeptinlower1evel(一60%,versus SHAM,Pd0.01).ConclusionsTheserum1,25(OH),Dlevelwasincreasedinovariectomizedosteoporotic rats,whichwasfel1downbyestrogentreatmentalongwithimprovedbonequalityandstructure. [Keywords]ovariectomy;1,25dihydroxyvitaminD;estrogen;osteoporosis 雌激素缺乏是绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMOP,I型骨质疏松症)发生,发展的基 本原因,但其确切的内分泌机制仍未完全阐明]. 维生素D(vitaminD,VD)是钙磷平衡和骨代谢调节 的基本激素之一l_3],雌激素缺乏如何影响VD代谢 等问题值得关注.这些问题的阐明对认识绝经后骨 量丢失的机制和骨质疏松症防治研究有意义.为此, 本文通过卵巢切除术(ovariectomy,OVX)建立雌激素 缺乏骨质疏松大鼠模型,分析血清25羟基维生素D [25(OH)D]和1,25双羟维生素DE1,25(OH):D]水 平变化及其与骨代谢指标的关系,并观察了雌激素干 预的影响. 材料和方法 模型建立与分组4月龄雌性SD大鼠(上海斯 来克实验动物有限公司,许可证:SCXK沪20022— 002)清洁级喂养至6月龄,选取体重280~300g大 鼠30只,参考文献L6]方法,经氯胺酮(100mg/kg, 江苏恒瑞医药股份有限公司)腹腔注射麻醉,背侧切 口行双侧卵巢摘除,切除少量卵巢周围脂肪组织为 假手术对照组(SHAM组).卵巢摘除大鼠随机分 为单纯卵巢去势组(OVX组)和尼尔雌醇干预组 (OVX—E组),每组10只. 尼尔雌醇干预术后35天起OVX—E组大鼠 灌服尼尔雌醇(上海医药集团有限公司华联制药厂, 批号070401,溶于2mL消毒饮用水),每周2次,每 次1mg/kg体重.SHAM组和OVX组大鼠同时 灌服消毒饮用水,每次2mL/只.干预13周.给药 中期(给药后6周)收集晨尿标本一70?避光保存 待测.干预结束后大鼠经11乌来糖(中国医药集 团上海化学试剂公司)1mL/lO0g体重腹腔注射麻 醉,颈动脉取全血并处死后取腰椎,股骨等标本.血 清标本分装后一70?保存待测. 25(OH)D和1,25(OH)2D测定25(OH)D测定 采用山羊抗鼠25(OH)D酶免测定试剂盒(QRCT- 301330130221EIA,美国ADL公司)一次完成.批内 CV<8,检测下限5nmol/L.1,25(OH)D测定采 用OCTEIA1,25一(OH)2-VitD酶免测定试剂盒(英 国IDS公司)一次完成.批内CV%10,检测下 限6nmol/L. 骨表型分析参考文献_7方法,取左股骨和 腰椎L2,应用固体物理密度仪(AG204,瑞士)测量 体积骨密度值(g/cm);取左胫骨塑料包埋行不脱 钙切片(Leitz1600,德国),VonKossa染色,光镜下 观察和摄片(NikonE600,日本). 血尿生化分析血清E:采用E放免试剂盒 (深圳拉尔文生物工程公司)一次完成.尿吡啶酚 (Pyd):给药6周后避光收集尿液标本,应用Pyd试 剂盒酶免法(美国QUIDE公司)检测尿吡啶酚 (Pyd),自动生化仪检测肌酐(Cr),结果以Pyd/Cr (nmol?L/mmol?L)比值表示.血清钙,磷: 应用自动生化仪(日立7170,日本)测试,结果以每 升国际单位或摩尔浓度表示. 统计学分析结果以?s表示.数据以 Excel录入,并采用学生t检验(studentT-test)进 行组间差异显着性分析,P%0.05为差异有统计学 意义. 结果 血清25(OH}D和1.2S{OH}:D水平比较卵巢去 势5周,药物干预13周后,OVX组大鼠血清25(OH)D 水平为221nmol/L,与对照组比较未出现明显变化 (图1A),OVX组1,25(OH)D浓度为61pmol/L,较 SHAM组的38.5pmol/L增加了64.1(P<0.001) (图1B).尼尔雌醇干预组,1,25(OH):D水平明显下 降至24.7pmol/L,较OVX组减少60.8(P<0.001), 甚至低于SHAM组(Pd0.01). 骨表型分析比较卵巢去势组大鼠随着血清 E水平降低(图2A),骨吸收增强,尿Pyd排泄增加 (58.7,P<0.05,图2B),骨小梁面积减少 (图2C),股骨和腰椎体积骨密度明显减低(,9.5 和一9.8,P<0.001,图2D).口服尼尔雌醇可一 定程度提高血清E水平(87.5,P%0.05),有效 降低Pyd排泄至SHAM组水平,股骨骨小梁面积 明显增加,同时股骨和腰椎骨密度较OVX组分别 增加(6.6和6.3%,P%0.05). 周轶,等.尼尔雌醇对去势雌性大鼠1,25双羟维生素D水平的影响547 讨论 维生素D前体通过食物和皮肤光照获得并储存 于脂肪组织,经肝脏25羟化酶催化生成的25(OH)D 是其主要循环形式,后者再经.肾1a羟化酶催化生成 的1,25(()H)D是其主要活性形式一.VD是首先作 为一种抗佝偻病因子被发现和使用的,至今仍作为骨 质疏松症防治的基础药物之一.大量研究表明, 1,25(OH)D具有刺激骨形成,促进矿化的骨正性 效应,这些效应很大程度上是通过钙磷间接发挥 的l_3].近年来1,25(OH)D对骨代谢影响的直接 作用也逐渐得到认识’”.作为钙磷平衡和骨代谢 调节的基本激素之一,VD在PMOP发生发展中作 用和机制仍未阐明.绝经后妇女常伴有VD缺乏, 其中25(OH)D水平和1,25(OH)D水平的变化和 意义可能不尽相同.OVX作为模拟PMOP 的经典动物模型常用于骨质疏松发病机制和抗骨质 疏松药物的药效评价研究.OVX后VD代谢的变 化势必会对骨代谢和药物药效研究产生影响.为 此,我们利用OVX大鼠模型观察了雌激素缺乏状 态下血清25(OH)D和1,25(OH)D水平变化及骨 密度,骨小梁面积和血钙磷等指标变化,并给予小剂 量雌激素干预后观察以上指标的改变,以期对雌激 素缺乏状态下VD代谢变化有初步认识. 去势大鼠血清1,25(()H)D水平变化的报道并 不一致.Chen等采用3月龄大鼠于()VX后21天 检测分析,未发现OVX对血清1,25(0H)D有影响, 而O’Loughlin等也曾有类似报道,其差别可能与 实验大鼠月龄和饲料中钙含量或其他组分差异有关. O’Loughlin等[1发现采用低钙饲料(0.()2Ca)喂养 时,OVX组血清1,25(oH)D明显高于对照组,也高 于高钙饲料(0.4Ca)喂养组.本研究采用常规饲 料(().5Ca)喂养,去势18周大鼠血清25(OH)D水 平维持稳定,血清1,25(OH)D水平升高,反映肾VD 合成代谢增强,与Iiel等实验结果类似.提示在 雌激素缺乏状态下,由于VD抵抗l1或由于雌激 素缺乏直接引起肠钙吸收障碍2o],刺激PTH分 泌,后者促进肾1,25(OH)D合成,但高水平的 1,25(OH)D不能有效改善肠钙吸收.低血钙,高 1,25(OH)D与PTH等一起激活骨吸收,动员骨组 织钙流出,使实验鼠尿Pyd排泄增加(图2B),维持血 钙处于正常低水平(图3A),血磷基本稳定,而尿钙却 明显降低.给予尼尔雌醇干预后肠钙吸收恢复,血清 1,25(()H).D显着减低,与文献报道一致.血 钙,磷水平的有效恢复,特别是血磷水平升高,增加了 骨组织钙沉积,促进骨形成和矿化,同时骨吸收减低, 延缓了骨量丢失. OVX引起骨吸收增强的内分泌机制仍未完全 阐明,1,25(OH):D水平升高在其中的作用和意义 有待进一步研究.此外,本研究中给予OVX大鼠 雌激素后尽管血钙已恢复正常,尿钙水平仍维持低 水平,提示仍存在继发的钙磷调控变化,这些变化产 生的确切机制值得继续关注. 参考文献 [1]MartinTJ,GaddyD.Bonelossgoesbeyondestrogen[J].Nat Med,20()6,】2(6):612—6】3, [2]EastellR.Pathogenesisofpostmenopausalosteoporosis[M]// FaVUSMI.PrimerontheMetabolicBoneDiseasesandDisorders ofMineralMetabolism.6ed.2006AmericanSocietyforBone andMineralResearch,Washington13(2,USA,259—262. 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[141ChenC,KaluDN.Modulationofintestinalestrogenreceptorby ovariectomy,estrogenandgrowthhormone[J].JPharrrvacolE’a’p Ther,1998,286(1):328—333.(下转第551页) 刁雯静,等.外阴上皮内非瘤样变的发病高危因素及组织学特征分析551 疗效果.它是利用超声波在组织内良好的能量穿透 性和沉积性等特点把能量沉积到病变的真皮层内, 发生一系列效应,同时促进局部微血管形成,增加血 管通透性,改善微血管和神经末梢的营养,促进组织 修复和再生,使病变的局部皮肤得以改善,治疗后6 个月的有效率约为95].在我院宫颈门诊因外 阴白斑接受聚焦超声的患者中,绝大多数在治疗后 一 个月便有明显的改善,无论是临床症状还是体征 都是如此.但是,要注意的是聚焦超声治疗的时问 一 定要掌握恰当,治疗的局部皮肤面积不宜过大,过 广,一方面要考虑治疗时患者的耐受程度,另一方面 也要避免外阴治疗区域的皮肤出现溃疡,因此外阴 白斑病变面积较大者可以分次进行治疗. 外阴上皮内非瘤样变是妇科常见难治病之一, 但由于其多没有生命危险,往往为患者或医师所忽 视.国内目前关于外阴上皮内非瘤样变的研究相对 较少.国外报道其发病率为1/300,1/i000,占外 阴疾病的50.而国内尚没有有关该病发病率的 统计资料.本研究从临床病历资料及组织学特征分 析结果两个方面对其进行了初步探讨,外阴上皮内 非瘤样变可能与精神压力,饮食偏好,化工及射线暴 露及自身免疫性疾病有关,其中精神压力和化学射 线曝露史可能是外阴上皮内非瘤样变的诱发因素, 而外阴非特异性皮肤组织慢性炎可能是外阴上皮内 (上接第547页) [15]0’LoughlinPD,MorrisHA 非瘤样变的前期病理改变,但样本量较少,有必要加 强针对该病的流行病学和临床基础研究,为制定正 确的预防和诊疗标准提供指导性建议. 参考文献 [1]JantosM.Vulvodynia:apsychophysi.logicalprofilebasedon electromyographicassessment3.AppliedPschophysioOg andBiofeedback,2008,33(1):29—38. 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