中性粒细胞碱性磷酸酶染色

中性粒细胞碱性磷酸酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色检查的操作程序(SOP) 实验室名称 项 目 编 号 制定日期 细胞室 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 **** ****年**月**日 【目的】 指导中性粒细胞碱性磷酸酶染色检查。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字:专业主管、质控主管、科主任。 【用途】 1)鉴别白血病(低)和白血病样(高)反应。 2)鉴别淋巴瘤(高)和何杰金病。 3)鉴别细菌性感染(高)与病毒性感染。 【染色原理】 基质中β—甘油磷酸钠在碱性磷酸酶与触媒剂镁离子的存在下，水解成磷酸钠与甘油，磷酸钠再与氯化钙结合成不溶解的磷酸钙，再与硝酸钴形成磷酸钴，最后与硫化铵成为黑色的硫化钴沉淀。 【分布】 血细胞的碱性磷酸酶(简称“碱酶”)活性，主要见于成熟的中性粒细胞(故称NAP)，定位于胞浆中。但当碱酶的活性极强时，由于扩散作用常可使黑色沉淀遮盖于胞核上。其他细胞系均为阴性反应。 【试剂配置】 1.作用液 3%甘油磷酸钠 10ml 2%巴比妥钠水溶液 10ml 蒸馏水 20ml 2%氯化钙 20ml 2%硫酸镁 2ml PH9.2-9.5为适当。 2. 2%硝酸钴(冰箱保存可用1—2个月)。 3. 1%硫化铵(用时新配，每50ml分装1瓶，冰箱保存)。 4. 0.5%伊红、1%藏红或2%甲绿溶液。 【染色步骤】 a) 新鲜干燥的涂片固定于95%酒精中10分钟。 b) 水洗数次，晾干。 c) 加入37?作用液中，孵育4—6小时(作用液事先预温30分钟)。 d) 自来水缓缓冲洗数次，待干。 e) 2%硝酸钴5分钟。 f) 水洗，待干。 g) 1%硫化铵5分钟(此液只能用4小时)。 h) 自来水冲洗，再用蒸馏水涮洗，待干。 i) 0.5%伊红复染3分钟或2%甲绿复染10分钟。 j) 水洗，晾干，镜检。 【对照样本】 选择已知酶活性强的标本与被检标本同时染色，如所染阳性样本未呈现应有的阳性反应，说明染色技术有问题。 【结果判断】 1.阳性颗粒呈棕黑色(与过氧化酶阳性颗粒相似，但粒小色淡)，定位于成熟 中性粒细胞胞浆内。 2.计数方法，按碱酶活性强弱，分为5级。 0级 胞浆呈原色，无颗粒。 ?级 胞浆呈浅棕色和浅灰色，小颗粒占胞浆面积25—50% ?级 胞浆呈棕色片状沉淀，小到中等颗粒约占胞浆面积的50—75%。 ?级 胞浆充满棕黑色沉淀，分布均匀，中到大颗粒占胞浆面积的75— 100%。 ?级 胞浆充满深黑色致密的团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中到大颗粒占胞 浆面积的100, 每例的血片，均计数100个中性粒细胞，求出碱性磷酸酶阳性细胞的百分比(阳性率)，并按碱酶活性的强弱不同，求得阳性指数(积分)。 【临床意义】 1.正常人:中性粒细胞的碱性磷酸酶活性较弱，阳性率为50%左右(20—80%)，阳性强度多为+,++，积分为80左右(60—100)。 2.炎症感染:各种化脓性感染，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性显著增加。病毒感染，则变化较小。 3.白血病样反应:碱酶活性增高最显著，阳性率为50—100%。阳性强度全部为+++或++++，积分为200左右(80—380)。 4.白血病 1)粒细胞性:急性、亚急性、慢性白血病和绿色瘤皆剧减，慢性之积分可降为 0。接受治疗缓解时可恢复正常，复发时可再度降低。 2)单核细胞:血涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶活性降低(积分多为0)。 3)淋巴细胞性:急性白血病、淋巴肉瘤、中性粒细胞的碱性磷酸酶活性增强。 5(贫血:各种贫血，其中性粒细胞的碱性磷酸酶的活性皆增高，尤以再生障碍 性贫血最显著。 6. 其他疾患:如多发性骨髓瘤、原神经细胞瘤、风湿热、糖尿病、真性红细胞增多症，以及外科手术后，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性都有所增高。 【注意事项】 1. 含有β—甘油磷酸钠的基质作用液必须新鲜配置，置冰箱中待用，两天内有 效。 2. 作用液的PH值，必须在9.4左右(以1N或0.2mol/L NaOH纠正)。 3. 每次实验应同时作阳性标本为对照。 4. 中性粒细胞的碱性磷酸酶活性在不同状态下的改变: 年龄:1岁以下的幼儿较高，60岁以上的老人较低。 性别:女性较高。 时间:清晨到中午逐渐增高，到下午6时以后又开始降低。 当垂体、肾上腺皮质功能亢进时:中性粒细胞碱酶的活性剧增。 在体温增高、代谢旺盛、妇女的经期及妊娠时:中性粒细胞的碱性磷酸酶活 性均有所增高。 操作人员 部门主管 质量负责人 姓名 王烈 日期 04年07月15日