急诊、危重病专业优秀论文 c5a对中性粒细胞自噬凋亡转换的机制研究

急诊、危重病专业优秀论文 c5a对中性粒细胞自噬凋亡转换的机制研究 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 急诊、危重病专业优秀论文 C5a对中性粒细胞自噬/凋亡转换的机 制研究 关键词:反义肽 中性粒细胞 急性肺损伤 炎症反应 呼吸窘迫综合征 摘要:急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿 的蛋白通过自噬路径降解。命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90% 自噬过程需要形成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程有重要作用。现研究发现:Atg5被μ-，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节细胞的自噬/凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。 C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体C5a通过其受体C5a受体( (GPCR)，属于典型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加;但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 (实验组B:1.96?0.06;实验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B:0.92?0.08;实验组C:0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2; Atg5含量对照比实验组B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 正文内容 急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90%的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程有重要作用。现研究发现:Atg5被μ-，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活 凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a性，从而调节细胞的自噬/ 通过其受体C5a受体(C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加;但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B:1.96?0.06;实验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B:0.92?0.08;实验组C:0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 非常明显。R4组PMN凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2; Atg5含量对照比实验组B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器， 的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形以维持细胞正常的结构与功能，90% 成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程有重要作用。现研究发现:Atg5被μ-，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节细胞的自噬/凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a通过其受体 C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典C5a受体( 型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains ，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究活性而趋化PMN 提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加;但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B:1.96?0.06;实 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B:0.92?0.08;实验组C:0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2; Atg5含量对照比实验组B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI 自噬是广泛存在于真的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90%的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程 ，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其有重要作用。现研究发现:Atg5被μ- 氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节细胞的自噬/凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a通过其受体 C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典C5a受体( 型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加;但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B:1.96?0.06;实验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B:0.92?0.08;实验组C:0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2; Atg5含量对照比实验组B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 )急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90%的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程 -，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其有重要作用。现研究发现:Atg5被μ 氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a通过其受体细胞的自噬/凋亡。 C5a受体(C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 (RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加;但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B:1.96?0.06;实验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B:0.92?0.08;实验组C:0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2; Atg5含量对照比实验组B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90%的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形 Atg5)在自噬体形成的过程成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5( 有重要作用。现研究发现:Atg5被μ-，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节细胞的自噬/凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a通过其受体C5a受体(C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加;但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B:1.96?0.06;实验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B:0.92?0.08;实验组C:0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN ; Atg5含量对照比实验组凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2 B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从 而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90%的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程有重要作用。现研究发现:Atg5被μ-，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节细胞的自噬/凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a通过其受体C5a受体(C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加;但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B:1.96?0.06;实 :2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5验组C 较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B:0.92?0.08;实验组C:0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2; Atg5含量对照比实验组B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90%的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程有重要作用。现研究发现:Atg5被μ-，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节细胞的自噬/凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a通过其受体C5a受体(C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显 3、C5a及反义肽对中性粒细胞著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加;但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B:1.96?0.06;实验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B: :0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，0.92?0.08;实验组C 实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2; Atg5含量对照比实验组B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90%的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程有重要作用。现研究发现:Atg5被μ-，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节细胞的自噬/凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a通过其受体C5a受体(C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 (1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值 56kd)和tAtg5(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5( (24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加; :1.96?0.06;实但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B 验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B: :0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，0.92?0.08;实验组C 实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN ; Atg5含量对照比实验组凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2 B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90%的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程有重要作用。现研究发现:Atg5被μ-，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节细胞的自噬/凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a通过其受体C5a受体(C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5小时凋亡率增加的幅度变小。 变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加; :1.96?0.06;实但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B 验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5 (2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B:较对照组2 0.92?0.08;实验组C:0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2; Atg5含量对照比实验组B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 急性肺损伤(ALI)的本质是炎症反应和炎症损伤，而急性呼吸窘迫综合征(ARDS)则是其终末状态。中性粒细胞在炎症的发生、发展和转归中起着至关重要的作用，其凋亡控制着炎症反应的时间和强度。研究表明:中性粒细胞是参与MODS与ALI的主要效应细胞，ARDS的病因之一就是PMN凋亡延迟。 自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象，贯穿于细胞生长发育和生理病理过程。是基本的细胞稳态过程，大部分细胞都有一定基本水平的自噬，自噬主要降解长寿命蛋白、细胞器，以维持细胞正常的结构与功能，90%的蛋白通过自噬路径降解。自噬过程需要形成一个双重膜结构的自噬体。自噬相关基因产物5(Atg5)在自噬体形成的过程有重要作用。现研究发现:Atg5被μ-，m-calpain裂解后失去自噬活性，而其氨基端产物tAtg5(truncated-Atg5)靶向线粒体而具有促凋亡活性，从而调节细胞的自噬/凋亡。 C5a是补体系统级链反应的终末产物。C5a通过其受体C5a受体(C5aR)而产生生物学效应，C5aR是G蛋白偶联受体(GPCR)，属于典型的趋化因子受体家族。C5a为重要的前炎性介质，起炎症启动和放大作用，参与了许多炎症性疾病的发生。C5a通过C5aR影响中性粒细胞(PMN)内calpains 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 活性而趋化PMN，介导PMN脱颗粒、呼吸爆发及粘附分子的表达;此外，有研究提示，C5a延迟中性粒细胞的凋亡，因此考虑C5a对PMN的自噬及凋亡有调节作用。 本文拟验证C5a依浓度作用于PMN后，自噬向凋亡转换的作用减弱，细胞存活时间延长而凋亡延迟。这对于探讨ARDS发生机理及治疗有重要意义。 方法:采集健康志愿者外周血18ml，肝素抗凝，密度梯度离心法分离，获得PMN富集层，低渗法破解红细胞，重悬细胞体外培养，共分为8组进行实验:对照组(1，2，3)体外分别培养0、7或24h;实验组(A、B、C)C5a浓度分别为0.5、1.0和2.0μg/ml刺激组及反义肽干预组(R4)(C5a浓度1.0μg/ml，反义肽R4浓度10μg/ml)，体外均刺激7h，实验对照组(D)C5a1.0μg/ml刺激24小时。各组细胞按计划完成刺激后，采用Annexin-?法进行FITC/PI双染检测细胞的凋亡率。同时收集各培养瓶中所有细胞，用Western-blot法检测细胞中Atg5，tAtg5的含量。 结果: 1、 C5a对中性粒细胞凋亡率的影响 PMN凋亡 、B及C中PMN的凋亡率分别与对照组2相率依C5a浓度呈下降趋势，实验组A 比，均有显著降低;且A与C组对比差异显著;对照组2凋亡率显著低于对照组3点，实验组D凋亡率与对照组3差异显著。C5a组与对照组比较，7小时至24小时凋亡率增加的幅度变小。 2、体外培养人中性粒细胞凋亡率及Atg5/tAtg5变化 对照组PMN在0h、7h和24h凋亡率逐渐上升，两两比较差异非常显著，用Western blot对各组细胞Atg5/tAtg5含量进行检测，相对积分光密度值(RIOD)代表蛋白表达量的高低。结果提示:各组均存在Atg5(56kd)和tAtg5(24kd)片段阳性表达条带;而各时间点Atg5逐渐减少，与对照组1比较有显著性差异;与此相应的是tAtg5呈逐渐增加趋势，对照组3与对照组1比较有显著性差异，对照组2与对照组1比较有差异。 3、C5a及反义肽对中性粒细胞 随着C5a浓度的增加，Atg5含量也逐渐增加;凋亡率和Atg5/tAtg5的影响 但实验组A与对照组2比较无显著差异，其它各组(实验组B:1.96?0.06;实验组C:2.21?0.12)与之比较均有显著性差异。相反随着C5a浓度的增加，tAtg5较对照组2(2.13?0.07)含量逐渐减少(实验组A:1.93?0.95;实验组B:0.92?0.08;实验组C:0.65?0.15)，实验组A与对照组2相比差异不明显，实验组B组与实验组B对比有差异，其余各组间对比差异非常明显。R4组PMN凋亡率较实验组B比较明显高，但其仍低于对照组2; Atg5含量对照比实验组B组明显减少，tAtg5含量有所增加，但有所矛盾的是R4组与对照组1比较Atg5差异不明显，而tAtg5含量明显减少。 结论:PMN体外培养发生自发性凋亡同时，存在着Atg5的裂解。C5a依时间、浓度关系抑制其凋亡和Atg5裂解，从而抑制中性粒细胞从自噬向凋亡的转换，R4部分阻滞此作用。 《《《特别提醒》》》:正文内容由PDF文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 。如还不能显示，可以联系我q q 1627550258 ，提供原文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 " 垐垯櫃换烫梯葺铑 endstream endobj 2 x滌甸??*U躆? 跦??ǜ?l, 墀VGi?o嫅#^4K錶c&伣嘰呐q 虻U節鉡c姥 ? 哖?]驳疗" g讍蔍`7sQ\I vs疖 ?BL偤7.X ?S [J%J v I雓1傀鑥伍妰遠Y 魥 靤 /W鐼E 霯q聊湝 :;俐hEan[2ECu?knb?.:?澍羈 7?坋 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 P6?!八帊/=櫕貵`Wp?U脞姦%?qj ?颬 儼噃壂 G邊??Vг忣鏕裚?靈模慞 擭昄X?;萕屄P,' 枍U霩R嚵蝆RC`珵墂锬襵")焟滫?ob#噡滴覇羘幥d Peブt?Pf臕?m稅盠?恁 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 v_關lm ,OMK?^'vOp牯V睟艶頛4. ?鮠4l 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 O??鼎濔%滷?腵鳐 #C?另 v|j'珬 i|葙K 羇胞Tt?"1鱳忞1? ?#1? ?# 谺? 豣? 豅? [Fb癳$ [Fb癳$ [Fb懊U虶: }獊 {u餕n梕-炯鈝羡 n馴弁?裦$k~琽腌羨鯞x8dz阞睩飫 諥蛨)傣Nc鐓 婤嬬 踋D铅,j豃杮? 03o 膰澴饿垱,3cL Y 尧3?搮4kKh費Q C幎鲟f ? 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 洭孺V饞? \囝鮶}量躞蔋/熁疆??6??a瘄伮幨?.寒癧,拲梡ф?貃'毽?狎裦&癿??紣 兩D??孧璞?*讅A ~?G哊翞漷獔苐眄\^? 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 A+y鯱\ 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 h'Q伛R濵崇@~練谰澠蕱劜(頓r )g?雴s ?l7g缣t1@苬? h蚫芦窼???? 媢J?|`兊欨^y镩飃袩?lN1囁9廥Z,薩j屻 猆??5 郜?呁%8赻 誵?揃^ 6査9?? 狥U?噶8??l抔'瓫湾?摽郒i 鯦 捶摭螨?鶶 呁菸?%`毎 磆* ?R閁b太?.?• 6柧靘発 蕯?俔刔 彟2Z皙{,笜'?D 剧>珞H鏋K x時k,褝仆稀?i攸'闥-) 荮 vJ釔絓|?殢D蘰厣?籶(柶胊?0 7姻 R?l遜ee醳B?苒?甊袝t弟l?%G趓毘N蒖與叚繜羇坯嵎憛? >U?Xd*蛥?-.臟兄+鮶嵸/@ E 厤 U閄r,塎偨匰忓綹抔搉ok怊J?l? 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 庮蔘?唍@*舶裤爞K誵?X r 蛈 翏磾寚缳nE駔殞梕 壦e櫫蹴友搇]6碪近躍邀8顪??z'?Fi ?U钮嬧撯暼坻•7/??W?3RQ碚螅T憚磴炬B- 垥n國0fw丮"eI?a揦(?^7鳁?H?弋睟 栴?霽N濎嬄盯 鼴蝔4 sxr?溣?檝皞咃 hi#?攊(?v擗谂馿鏤刊x? 偨棆鯍抰}Lyy^|y箲丽膈淢m7汍衂法瀶?鴫C??,Q貖澔?wC( 腅•僼}碓 靔奲? D|疑維d[袣箈榉,慓採紤婏(鞄-h-蜪`7I冑?'匨+蘮.- 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 懸6鶚?蚧?铒 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 鷈?叛牪?蹾 檸?? 籕