总免疫球蛋白E（IgE）检测作业指导书 医学检验

总免疫球蛋白E（IgE）检测作业指导书 医学检验 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件已阅声明表》 《Procedure circulation form》 文件名称:总免疫球蛋白E(IgE)检测作业指导书 表号: KM-MP03•02•02 已阅声明:本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 (I have understood the relevant content of the document.I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure) 阅读人签名表 姓名(NAME) 职务(POSITION) 签名(SIGNATURE) 签名日期(DATE) STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/10总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 文件修改页 (Procedure amendment form) 表号: KM-MP03•02•03 序号 审批人 批准生效日期 NO. 页码内容更改说明(Description of Modified (Approved (Approved (Page) contents) by ) date) 换版 1 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/10总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 文件信息表 (Procedure information form) 表号: KM-MP03•02•04 文件名称 总免疫球蛋白E(IgE)检测作业指导书(KM-SOP0300•348) Title of DOC.(Doc. Code) 版本号 Edition 3.0 生效日期(Operative 2008-03-13 (Edition No.) date) 文控部门 实验室文控室 (Doc. Control Dept.) 回顾日期回顾人员签名( Signature ) 回顾日期/签名 (Review (Review date /signature ) date) 替代文件(Replaces) 总免疫球蛋白E(IgE)检测作业指导书(Edition 2.0) 存放地点(Location)/持有No. Location (Holder) No. Location (Holder) 1 实验室文控室(陈彬) 人(Holder) 2 化学发光室(段学成) 作者签名/日期(Author 廖巍俊 signature/date) 审批人签名/日期陈建波 (Authorized by : Signature/Date) 接收人签名/日期 (Receiptor/Date) 副本数(Copy No.) STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/10总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 总免疫球蛋白E检测作业指导书 (Standard operation procedure for analysis of Total IgE) 1. 原理(Test principle): 固相、化学发光免疫量度检测。 固相(包被珠)包被有鼠单克隆TIE抗体，试剂含有碱性磷酸酶标记的兔抗TIE多克隆抗体。试剂与样本中的TIE同时与包被有鼠单克隆TIE抗体的包被珠温育，形成抗体夹心复合物。未结合的酶标记物经离心去除，最终加入化学发光底物，产生与结合酶成比例的光信号。 2. 样本收集和储存(Specimen Collection and Storage): 标本收集(Specimen collection):类型(Type):血清(Serum);用量(Volume)0.6mL不抗凝血，仪器加样量(Sampling volume)50μL(样本杯加样量必须超过样本总用量至少100μL) 拒收标本(Specimen rejection):推荐使用超速离心清除脂血(lipoprotein)样本。溶血(hemolysis)样本提示样本在送达实验室之前处理不当，因此检测结果将受到影响，应予以注意。血清(serum)样本在未充分凝集前离心将导致纤维蛋白的存在。为避免纤维蛋白对结果的影响必须确保离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。源于不同生产商的血样收集试管，由于原材料和添加剂不同，包括凝胶或物理涂层、促凝剂和/或抗凝剂，可能导致得到不同的结果。本试剂盒没有对所有可能应用的收集管类型进行测试。 标本储存条件(Sample storage): 2-8?3天;-20?6个月，十天后处理标本。 3、试剂(Reagent): 3.1美国DPCIMMULITE 原装试剂。 3.1.1试剂内组份(Components): 试剂盒组分必须成套使用，条码为实验必需。 Total IgE 检测单位(LIE1) 每个带有条码的检测单位内有一个包被珠，包被有单克隆鼠抗IgE抗体。2-8?可稳定至失效期(Stored in 2,8?based on manufacturer insturction)。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/10总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 LKIE1:100个，LKIE5:500个 打开包装之前应恢复至室温，从包装顶部剪开，完整保留拉链隆起缘。使用后将拉链重新封好，避免潮湿。 Total IgE 试剂楔(LIE2) 试剂楔带有条码。7.5mL碱性磷酸酶标记的多克隆羊抗IgE抗体缓冲液，含防腐剂。封盖低温保存:2-8?可稳定至失效期。建议打开包装后在提示保存条件下30天内用完。 LKIE1:1个，LKIE5:5个 Total IgE 校正(LIEL，LIEH) 两瓶(低、高),每瓶2.0mL，为含IgE的非人血清/缓冲液基质，含防腐剂。开封后2~8?可稳定30天，或-20?可稳定6个月(分装)。 LKIE1:1套，LKIE5:2套 3.1.2未随试剂盒提供的组分 Total IgE 样本稀释液:(LIEZ) 用于人工稀释病人样本。每瓶25mL，为不含IgE的非人血清/缓冲液基质，含防腐剂。开封后，2~8?可稳定30天，或-20?可稳定6个月(分装)。 LSUBX:化学发光底物 LPWS2:探针清洗液 LKPM:探针清洗试剂盒 LCHx-y:样本杯架(带条码) LSCP:样本杯(一次性) LSCC:样本杯盖(可选) IECM:总IgE质控。 其它必需:样本加样戏管、蒸馏水或去离子水、质控。 3.2试剂准备(Reagent praperation):将试剂从冰箱中取出并平衡至室温;不同批号的试剂不能混用;新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refrigeratory to room temperature New reagent lots must be tested in parallel with old lots for proper time; STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/10总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Recod the results. 4 仪器(Instrument):美国IMMULITE. 4.1 仪器准备(Prepare apparatus):使用前将仪器的液体与固体垃圾清空;加入足够的蒸馏水，清冼液，底物及样本杯。然后运行仪器操作软件。而后排水及底物，防止内有残留气柱。将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。 5.安全防范(Safety Precautions): 操作时必须穿戴手套和工作服;工作后的台面应消毒擦洗;用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理;为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间;遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。 6校准(Calibration if Applicable): 6.1校准品储存和使用(Calibration material storage and usage):美国IMMULITE 原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8?可稳定到有效期。Stop using overdue calibration material.use it within expiration date,storage in 2-8? 配制(Calibration material redissolve):开封后用有盖小子弹头分装600μL/个，标明开封日期，校准品批号，分装人以及有效日期，于,20?冻存备用。Label confecting date ,calibration lot,person who confected, expiration date.then 开封后校准品成分的稳定性:保存于15~25?，可稳定8小时 保存于2~8?，可稳定2天 保存于(-15)~(-25)?，可稳定1个月(不可反复冻融)。 6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准(If one of the two happens, recalibration ): STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/10总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 (1)试剂批号改变(Reagent lot changes) Recalibration based on quality control problem) (2)根据质控需要进行校准( (3)校准周期(Frequency of calibration):两周(Two weeks)。 6.3步骤:在计算机屏幕上选择kit Entry项，用扫码器扫描药盒上的条码，选择Patient Entry项，输入校正信息.然后将两个样本杯中分别加入至少600ul的A，B校准品 ，放在加样履带上。点击GO。 校准结果判断标准: 仪器自动识别校准是否通过，但是每次做校准后，必须跟做所有浓度的质控，如质控在控则校准通过。 7操作过程:(Procedural Steps) 7.1 将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清. 本项目编号为2xxx(一个x代表一个阿拉伯数字)。 7.2取出空样本杯架，将空的样本杯放入样本杯架上。将离好的血清加入对应的样本杯中。 7.3将样品杯放到进样链条的箭头处，其后放入IgE反应杯。在Worklist Enter中输入样品杯中样品相对应的实验号。结果出来后，打印机自动打印出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。 7.4数据联机入系统( Send data to LIS ) 数据审核(Data checkup):联机是否正确,对照格与仪器LIST中的实验号和加样杯号是否一一正确对应，原始导出结果与系统结果是否对应。 8质量控制(Quality control): 使用专用质控,当室内质控失控时，重取质控品重新检测一次;若室内质控仍不能满足要求，则检查校准是否过期，重新校准，再检测室内质控;仍不能满足要求时，则做期间核查，检查仪器是否正常。室内质控操作过程:从冰箱冷冻格拿出的分装质控品必须放置室温半小时以上，每次用量至少180ul，上机操作同日常标本。IgE最大允许误差ALE为25%，室内质控CV为7.15%(低)、6.46%(高)，偏移为6.70%,过程稳定性<2%.根据:?SEc=(ALE-Bias)/CV-1.65利用计算软件可得, 低值选择的质控规则: 1/2/R/4 N=2; 高值选择的质控规则1/2/R/4 N=2,当质控失控时，3s2s4s1s3s2s4s1s 应按照《室内质量控制程序》处理 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/10总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 9计算(Calculations if Applicable):N/A 10 参考范围:(Reference interval) 应用IMMULITE IgE对源于非遗传性过敏症个体的血清样本进行参考范围的研究。 结果按年龄如下，于参考文献一致。 年龄 中位值(IU/Ml) 95%范围(IU/Ml) 例数 0~1 6.6 29 15 1~2 10.1 49 34 2~3 12.9 45 29 3~9 14.4 52 106 成年人 20.4 87 48 11 结果解释:(Interpretation of Results) 多数IgE介导型变态反应患者的血清总IgE水平与健康成人相比有所升高，但并 不是所有的过敏患者都表现总IgE升高。 因为并不是所有的遗传性过敏症反应都是由IgE介导的，所以参考范围中的总IgE 结果应当根据其他的临床资料予以解释。 特异性IgE实验可以说明升高的总IgE结果。 12的局限性(Method Limitations): 多数IgE介导型变态反应患者的血清总IgE水平与健康成人相比有所升高，但并 不是所有的过敏患者都表现总IgE升高。 因为并不是所有的遗传性过敏症反应都是由IgE介导的，所以参考范围中的总IgE 结果应当根据其他的临床资料予以解释。 特异性IgE实验可以说明升高的总IgE结果。 人血清中的嗜异性抗体会与试剂盒组分中的免疫球蛋白发生反应，从而干扰体外 免疫检测【见Boscato LM，Stuart MC.Heterophilic antibodies:a problem for all immunoassays.Clin Chem 1988:34:27-33】。经常接触动物或动物血清制品的病人样 本可证明这种潜在导致异常结果干扰的存在。已经证明这些试剂可以将这种风险最小 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/10 总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 化，但是少数情况下血清与实验组分之间潜在的交叉反应还是会出现。为达到诊断目的，次实验的检测结果要与临床检查、病史和其它的检查结合使用。 12.1准确度(Accuracy) 参加CAP与其他实验室结果比较,结果可接受. 12.2精密度(Precision): 2.1 批间精密度:取2006年11月份的TIE质控记录作统计(单位pmol/L) Mean SD CV% 38.01 2.7183 7.15% 172.233 11.1222 6.46% 总体数据均在1/3SD范围内，与厂商声称的情况相比基本一致，符合要求。 2.2批内精密度:选择医学决定水平附近的病人样本,在相当短的时间测定10个数据,测定时带质控,且质控在控:(结果为CPS值) Mean SD CV% 44.1 3.9016 3.62% 总体数据均在1/3SD范围内，与厂商声称的情况相比基本一致，符合要求。 12.3灵敏度(Sensitivity):1.0IU/mL 12.4测试范围(AMR):N/A~2000IU/mL 12.5病人结果报告范围(CRR):N/A~2000 IU/mL 12.6稀释(Dilution): 12.7干扰物质(Interfering Substances): 胆红素影响(Bilirubin):样本中胆红素的浓度直至200 mg/L，在实验允许的精密度范围内对结果没有影响。 溶血影响(Hemolysis):样本中压积红细胞的浓度直至30 µL/mL，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。 脂血影响(Lipoprotein):样本中甘油三酯的浓度直至5000 mg/dL，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。 12.8注意事项(Notices)仅供体外诊断使用。(Use only for invitro diagnosis) , 试剂:2,8?保存。其处理应遵守相应的法律规定。 , 对于所有组份都要将其视为传染原，按照全球传染病预防法来处理和防范。 源自人血的原材料全部经过检验，与梅毒、HIV 1&2抗体、HBsAg和HCV抗体没有STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 9/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 9/10总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300?348 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 反应。 , 加入浓度小于0.1g/dL的叠氮钠作为防腐剂。其处理措施应采用在铅或铜质容 器中以大量水冲洗，避免易爆的金属叠氮化合物聚集而产生潜在爆炸危险。 化学发光底物:避免污染和日光直射。12.9其他(Others):方法学比较或项目的特殊要求等。 13 临床意义:(Clinical Significance) 临床意义:IgE是血清球蛋白中含量最少的一种(约占0.002%)，它是一种亲细胞 性抗体。它在I型变态反应性疾病(如注射异种血清后休克等)和寄生虫感染时会 升高。IgE型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等病人血清IgE也 均增高。 14参考文献:(References) ? Boscato LM，Stuart MC.Heterophilic antibodies:a problem for all immunoassays.Clin Chem 1988:34:27-33 ? IMMULITE Total IgE试剂说明书 ? 中华医学检验全书 ? IMMULITE 操作说明书 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 10/10STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 10/10总免疫球蛋白E检测作业指导书(2008-03-13)