HPLC法测定精氨酸谷氨酸注射液的有关物

HPLC法测定精氨酸谷氨酸注射液的有关物 [标签:来源] 作者:陆宏国，金餿，张正艮，徐玉凤 【摘要】H的建立HPLC法测定精氨酸谷氨酸注射液的有关物质。采用NH2柱(4. 6mm X 250mm, 5\i m), 温为30?C。结果精氨酸、谷氨乙腈-0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液(10: 90)为流动相，检测波长210nm,柱 酸与降解产物焦谷氨酸分离良好,其最低检测限分别为10.2ng、 69.2ng和4.1ng?结论本法快速、准确， 可用于精氨酸谷氨酸注射液的质fi控制。 【关键词】HPLC;精氨酸谷氨酸;注射液;有关物质;焦谷氨酸 [Abstract] Objective To study a new method for the determination of related substances of arginine glutamate Injection by HPLC. Methods Separation was carried out on a NH2 column using acetonitrile-0. 05mol/L potassium dihydrogen phosphate (10:90) at detection wavelength 210 nm. Results Arginine and glutamate and pyroglutamic acid were separated completely. Their detection limit were 10.2ng, 69.2ng and 4. Ing. Conclusion This method is sensitive and accurate with good repeatability and suitable for the quality control of arginine glutamate Injection. 【Keywords】 HPLC; arginine glutamate; Injection; related substances; pyroglutamic acid 精氨酸谷氨酸(arginine glutamate,以下简称I)是由日本味之素公司研究开发的降高 血氨药物，临 床主要用于治疗因急、慢性肝病如肝硬化、脂肪肝、肝炎所致的高血氨症，特 别适用于因肝脏疾患引起 的中枢神经系统症状的解除及肝昏迷的抢救。本品临床应用多年， 疗效确切，并早已收载于日本药典， 其中有关物质采用TLC法检查，但TLC法检测灵敏度较 差，不能有效检出I的降解产物焦谷氨酸，参考 文献[1，2],笔者现改用HPLC法测定其有关 物质。 1仪器与试药 XS205电子天平(瑞士梅特勒);Agilent 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);ZORBAX NH2柱 (4.6mmX 250mm，5|J m);精氨酸对照品(编号:140685-200802)，谷氨酸对照品(编号: 140690-200401)， 均为中国药品生物制品检定所提供;L-焦谷氨酸(纯,批号:F20090909, 国药集团化学试剂有限公司提供);I注射液(规格:200ml: 20g，批号分别为:071010、071011、 071012，扬子江药业集团有限公司提供);配制流动相用乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试 剂为分析纯。 2方法与结果 2. 1色谱条件与系统适用性试验 以氨基键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(10: 90)为流动相，检测 波长为210nm,柱温为30?C,进样ffl为20|J 1。分别取配制好的精氨酸溶液(浓度为lmg/ml)、 谷氨酸溶液(浓度为lmg/ml)、焦谷氨酸溶液(浓度为0. lmg/ml)和混合溶液各20|J 1,注入液 相色谱仪，记录色谱图(见阁1?4)，结果见表1，由图可知混合溶液出峰顺序依次为精氨酸、 谷氨酸和焦谷氨酸，各峰之间的分离度均符合规定。图1精氨酸峰图2谷氨酸峰图3焦 谷氨酸峰图4混合溶液各物质峰表1系统适用性试验结果 2. 2溶液配制 取样品溶液lml置50ml _S:瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液;精密fi 取供试品溶液lml置100ml fi瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液;另精密称取 焦谷氨酸适ft,用流动相溶解并稀释制成每lml中含0.02mg的溶液，摇匀，作为杂质对照品 溶液。 2.3检测限 在上述色谱条件下，以信噪比S/N=3计算，精氨酸、谷氨酸和焦谷氨酸的检测限分别为 10.2、69. 2 和 4. 1。 2. 4溶液的稳定性 取系统适用性试验项下配制的I溶液，分别于0、2、4、6、8h取样检测，记录精氨酸、 谷氨酸和焦谷氨酸的峰而积，计算得RSD分别为0.24%、0.09%和1.09%,表明I溶液在8h 内稳定。 2. 5专属性试验 3讨论 I原料药经酸、碱、氧化、高温及光照破坏试验。结果表明，经酸、碱、氧化、高温及 光照破坏后产生的杂质峰能与主峰基线分离。 2. 6有关物质检查 分别取对照溶液、供试品溶液和焦谷氨酸杂质对照品溶液各20m 1，注入液相色谱仪， 记录色谱阁至谷氨酸峰保留时间的2. 5倍。结果三批样品有关物质检测结果见表2。表2三 批样品有关物质检查结果 文献报道[3]，I主要降解产物为焦谷氨酸，而焦谷氨酸为有害物质，故需进行控制。因 I为氨基酸类衍生物，在紫外无吸收，只能采用末端吸收波长210nm进行检测，选用NH2柱 比C18柱分离效果好。因I溶液注入液相色谱仪中有精氨酸和谷氨酸两峰，且各自响应值不 同，无法采用主成分自身对 :。 照法计算有关物质，故只能采用杂质对照品法计算焦谷氨酸含S 【参考文献】 1莫靖欣，贺英菊.HPLC测定复方谷氨酰胺肠溶胶襄中的有关物质.华西药学杂志，2007， 22(6): 696-696. 2孙彥君,于恩中.RP-HPLC测定人参降糖胶囊中L-焦谷氨酸的含量.中成药,2006，28 (9): 1399-1401. 3 丁启龙，刘国卿.焦谷氨酸药理学研究进展.中国药理学通报，1998, 14(2): 481-483.