嗜热链球菌部分生物学特性研究

嗜热链球菌部分生物学特性研究 嗜热链球菌部分生物学特性研究 ?42?中国奶牛?2007年第8期 嗜热链球菌部分生物学特性研究 陈芳,靳亚平 (西北农林科技大学动物科技学院,杨陵712100) 中图分类号:Q939.11+7文献标识码:B文章编号:1004—4264(2007)08—0042—02 摘要:对嗜热链球菌采用六种不同培养基,不同培养温度(37?,42~C,45~C)和培养基不同酸碱度(pH6.5,pH6.8, pH7.0)进行培养,对其在不同条件下的生长状态进行了研究,得出嗜热链球茵的最佳培养温度为42~C,最适酸碱度 为pH6.8.最佳培养基为乳酸茵培养基. 关键词:嗜热链球菌;温度;酸碱度;营养物质 嗜热链球菌(S.thermophilus,S.t)作为一种对人体 有明显食疗作用的有益菌.它的开发利用一直得到国 内外乳品界的高度重视.嗜热链球菌不但是一种很好 的发酵剂.也是微生物法检测牛奶中抗生素残留的常 用菌种之一.本文就嗜热链球菌的部分生物学特性进 行了试验研究.以期为实际应用中嗜热链球菌的保存 和传代提供参考. 1材料与方法 1.I材料 菌种:嗜热链球菌为西北农林科技大学动物科技 学院家畜生殖内分泌实验室分离保存. 收稿日期:2o07—03—29 作者简介:陈芳(1967一),女,陕西乾县人,硕士研究生. 通讯作者:靳亚平(1966一),男,陕西宝鸡人,教授,博士生导师,主要从 事家畜生殖内分泌学研究. 此.从心,肝,肺分离的细菌均为D型. 4小结 4.1本次临产母牛突然发病和死亡.从新鲜病料中分 离到魏氏梭菌强毒株,确定魏氏梭菌为牛猝死的病原. 4.2该菌不仅侵害肠道.而且侵害实质器官,细菌繁 殖产生毒素引起动物死亡.一般药物和抗生素不能中 和毒素.因此没有治疗效果.所以应以预防为主. 4.3魏氏梭菌广泛存在于自然界以及正常的动物肠道 中,普遍认为过多的精饲料(即高蛋白,过多淀粉)是引 起本病的主要诱因之一 5防治措施建议 5.1采取紧急措施防止疾病传播,加强牛的饲养管理, 立即更换饲料,搞好环境卫生,饲槽内剩料要及时清理: 做好紧急灭鼠工作:发现病牛立即隔离治疗:注意饲料 饮水卫生等,不喂发霉,变质,污染,有毒和刺激性大的 原料:蛋白胨,蔗糖,酵母膏,葡萄糖,琼脂,NaCI. KH2PO和吐温一80等均为市售,西红柿汁为自制. 1.2仪器与设备 恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂生产.型号:PYX— DHS-35x40).冰箱,高压蒸气灭菌锅(上海医用仪器生 产厂生产),超净工作台,显微镜,酸度计等. 1.3方法 1.3.1不同培养基的制备 1.3.1.1乳清培养基的制备 配方:乳清500mL,蒸馏水500mL,胰蛋白胨5g,葡 萄糖1g,酵母膏2.5g,琼脂粉20g,pH6.5t". 乳清的制备:新鲜牛奶1L加热至沸腾,冷却后加 入12mol/L的HCI少许.边加入边搅拌.直到牛奶凝结 成絮状.过滤后即得乳清,再用12mol/L的NaOH调 pH至6.5即可.培养基制备方法按文献【2】进行. 饲料:饲养工具要专用;做好消毒工作,每周更换一种消 毒液.对牛舍环境进行消毒,一天一次,一周后改为每 周一次即可:对被污染的粪尿及病死牛作无害化处理. 以防止疾病继续传播. 5.2治疗 5.2.1马上对牛群进行疫苗的紧急免疫接种.皮下注 射5mL.注射后2周可产生免疫力. 5.2.2对初生24h内的犊牛肌肉注射10%氟苯尼考注 射液,每次2mL,连续使用3d. 5.2-3对已发病的牛口服喹乙醇,2g/kg体重,2次/d, 连用4d,同时肌肉注射10%氟苯尼考2mL,连用4d.同 时注射破伤风抗毒素. 参考文献 【1】廖延雄.兽医微生物实验诊断-T-~[M],北京:中国农业出版 社.1995.395—398.口 中国奶牛?2O07年第8期?43? 1.3.1.2Elliker琼脂培养基的制备 配方:胰蛋白胨20g,蔗糖5g,酵母提取物5g,NaC1 4g,明胶2.5g,乙酸钠1.5g,葡萄糖5g,抗坏血酸0.5g,乳糖 5g,琼脂15g,蒸馏水lL;pH6.8.制备方法按文献阁进行. 1-3.1.3改良IRIE培养基 配方(%):胰胨0.5,酵母膏0.25,乳糖l,琥珀酸钠 1,KH2PO40.2,K2HPO40.2,琼脂1.5,加蒸馏水至100; pH6.8【31.制备方法同上. 1.3.1.4改良M17琼脂培养基 配方【4]:胰蛋白胨5g,鱼蛋白胨5g,牛肉膏5g,酵 母浸膏2.5g,抗坏血酸0.5g,硫酸镁0.25g,甘油10g, 乳糖3g,KH2PO40.2g,K2HPO40.5g,琼脂11g,蒸馏水 1000mL;pH6.8.制备方法同上. 1-3.1.5S培养基 配方(%):牛肉浸膏0.5,酵母浸膏0.25,蔗糖2.5, 维生素C0.2,乳清6.0,柠檬酸三铵0.4,七水磷酸镁 0.01,琼脂1.5,加蒸馏水至100;pH7.0.制备方法同上阎. 1.3.1.6乳酸菌培养基 配方:酵母膏7.5g,蛋白胨7.5g,葡萄糖10g, KH2PO42g,西红柿汁100mL,吐温一800.5mL,蒸馏水 900mL:pH6.8.配制方法同上同. 1.3.1.7改良IRIE液体培养基 配方(%):蛋白胨1,酵母膏0.5,乳糖l,琥珀酸钠 2,KH2PO0.2,K2HPO0.2.制备方法为,将上述原料按 分别称量后放入三角瓶中,加蒸馏水100mL.加热 并搅拌至完全溶解,调pH至6.8,分装于18mmx8mm试 管中,每个试管2-3mL,试管加塞后高压灭菌(1l5?, 15min),备用. 1.3.2菌种的复苏 将4?冰箱中保存的嗜热链球菌菌种.无菌操作接 种到改良IRIE液体培养基中,37?培养24h.取菌液 lmL加IRIE液体培养基9mL,37oC培养6h后备用. 1.3-3不同培养基的接种 取已活化的菌液lmL.用灭菌蒸馏水依次稀释 10,102,103,104,105倍,取稀释105倍的菌液0.1mL分 别滴于不同培养基上.使菌液在平板培养基上分布均 匀,每种培养基涂2个平皿,倒置于恒温培养箱中. 37?培养72h.每24h观察记录一次不同培养基平皿上 嗜热链球菌的生长情况及菌落形态.72h后统计菌落 数,相同培养基上的菌落数以平均值为准记数. 1.3.4嗜热链球菌在不同酸碱度和不同温度条件下的 活茵数测定 制备初始pH不同(pH6.5,pH6.8,pH7.0)的固 体乳酸菌培养基平皿.采用平板计数法.将活化好的嗜 热链球菌菌液进行101,102,103,104,l0s,106倍稀释,取 稀释倍数为106的菌液0.1mL在无菌条件下均匀涂布 至不同pH的乳酸菌培养基中,各2个重复.将涂好菌 液的平皿分别在不同温度(37?,42?,45?)下培养,48 h后,统计平板上生长的菌落数,乘以稀释倍数,再乘以 10,即为每毫升菌液中所含有的活菌数(cfu/mL),pH和 温度相同的2个重复以平均值为准. 2结果 2.1不同培养基上S.t的生长状况 6种固体培养基每种2个重复.不同培养基上嗜热 链球菌24,72h的生长状况及最终菌落数见表1. 表1不同培养基上嗜热链球菌生长情况 注:"一"表示未长菌;"+"表示长菌. 由表1可以看出.乳酸菌培养基24h就长出了嗜 热链球菌,生长速度最快,菌数量最多.而其他培养基 上嗜热链球菌的生长比较差.所以在培养和保存嗜热 链球菌时应选用乳酸菌培养基较好. 2.1S.t在不同温度和oH条件下的活茵数 S.t在不同温度和pH条件下的活菌数见表2.随 着温度的升高和pH的增大,S.t活菌数随之相应增 加,42?,pH6.8时活菌数最多,平均达到1.105× 109cfu/L 表2S.t在不同温度和pH条件下的活菌数 温度(?) 不同条件下活菌数(cfu/mL) pH6.5pH6.8pH7.0 3讨论与分析 3.1嗜热链球菌与人类的关系密切.用嗜热链球菌和 保加利亚乳酸杆菌混合培养发酵的乳酸饮品能补充人 体肠道内的有益菌.维持肠道的微生态平衡,且含有易 于吸收的营养素.具有抑制腐败菌,提高消化率,防癌 及预防一些传染病等功效,并能为食品提供芳香风味, 使食品拥有良好的质地[71.嗜热链球菌又是近年用微生 ?44?中国奶牛?2o0r7年第8期 低温清洗剂在奶源基地的应用 张亚东,王吉宏 (内蒙古伊利实业集团股份有限公司原奶事业部,呼和浩特010080) 中图分类号:TU266+2文献标识码:B文章编号:1004-4264(2007)08—0044—02 我国奶源基地现有奶站约10000多座.在奶站挤 奶设备的日常清洗过程中.清洗剂对水温要求一般均 在70?以上,由于各种因素的影响,尤其在北方,清洗 时的温度往往达不到规定要求.致使挤奶设备清洗效 果不理想.影响了原料奶的质量.在这种情况下,我们 在奶源基地推广使用低温清洗液.预使用低温清洗液 清洗时水温要求控制在35,55?.达到了与使用传统清 洗剂相同或更好的清洗效果. 1清洗剂的主要作用及原理 收稿日期:2007—07—03 物法检测牛奶中抗生素残留的首选菌种之一嗍.所以近 年来对乳酸菌的研究越来越多.本文对嗜热链球菌的 部分生物学特性进行了研究.得出嗜热链球菌的最佳 培养基为乳酸菌培养基.最适培养温度为42?.培养基 最适酸碱度为pH6.8. 3.2嗜热链球菌没有分解淀粉和大分子碳水化合物的 酶系,因此.不能利用大分子物质作碳源,能利用的碳 源主要是葡萄糖等单糖和一些寡糖.所以本试验中乳 酸菌培养基中的碳源为葡萄糖.嗜热链球菌体内的蛋 白酶活性通常较弱甚至缺乏必要的蛋白酶.因此.最适 于它们的氮源是蛋白质水解产物.所以本试验中乳酸 菌培养基中的氮源为酵母膏和蛋白胨.这与叶淑红等[9】 的研究相一致 3.3嗜热链球菌与其他细菌相比.对营养的要求比较 .在培养的过程中除了要求供给适量的水 严格,复杂 分,碳源,氮源之外,还需要加入维生素,氨基酸,肽类 等生长辅助因子.因此在培养基中加入适量的西红柿 汁可以促进嗜热链球菌的生长.西红柿汁不仅能为嗜 热链球菌提供碳源.而且含有嗜热链球菌生长不可缺 少的核苷酸和矿物质.营养丰富.能促进嗜热链球菌的 生长.这与田洪涛等【,q的报道一致 3.4嗜热链球菌不但具有复杂的营养要求.同时它们 也耐酸和嗜热.与其他细菌相比.它们能产生大量的乳 酸,能在较低pH的基质中和较高温度下生长,本试验 在挤奶管道的清洗中.清洗剂的主要作用是清除 挤奶装置内表面附着的奶渣.为了达到这个目的.清洗 剂需要满足:(1)将奶渣粘附着的表面松开,让松开的 奶渣悬浮于溶液中.防止这些奶渣再次粘到设备的其 他地方.防止形成奶垢层;(2)尽量减少对挤奶设备表 面(如橡胶件)的有害作用;(3)使用简单,安全,不含任 何会影响牛奶质量的物质;(4)环保. 1.1脂类的清洗 温度与DH值是影响残留奶中脂类清除干净与否 的关键因素.乳脂的固化温度为35?,所以清洗液的温 度在整个循环过程中都应该在38?以上.如果温度低 得出的嗜热链球菌的最适培养温度和最适酸碱度均与 嗜热链球菌的生物学特性一致.另外,在本次试验中发 现.嗜热链球菌菌液稀释时要用灭菌蒸馏水,不能用生 理盐水.盐水会降低嗜热链球菌的生理活性,影响试验 结果.其原因有待进一步的研究. 参考文献 [1】佟潇.酸奶中嗜热链球菌的分离和鉴定[J】.中国乳品工业, 2004,32(4):25-27. [2降健强,李六金.兽医微生物学实验实习指导】.西安:陕西科 学技术出版社.1999. [3】李锦子,行曙光,马杰,等.嗜热链球菌培养条件的研究叨.微生 物学通报,1996,23(3):138—140. [4]曹文海,任国谱.嗜热链球菌的检验培养基(M17)的改良叨.中 国乳业,2006,(1):46-48. [5]周家春.乳酸菌菌种的简便分离和培养[J】.食品科学,1998,19 (1):39—41. [6]陈芳,靳亚平.奶制品中有益菌的分离鉴定叨.黑龙江畜牧兽 医,2007,(3). [7]丁红辉,张梅,李晓柠.优化条件检测乳酸菌的应用优势[J】.饮 料工业,2006,9(4):6-7. [8】白建,黄素珍.纯牛奶中抗菌药物残留的检测阴.乳业科学与技 术,2006,116(1):15—17. 『91叶淑红,何连芳,张或,等.乳酸菌的发酵条件及其对发酵胡萝 卜汁风味的影响[J】.食品科学,2005,26(5):127—130. [1o]田洪涛,贾英民,马雯,等.嗜热链球菌促生长物质研究及增 殖培养基优化筛选[J】.食品科学,2002,23(5):60--62.口