槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定

槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定 实验二 槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定 槐米为豆科植物槐(Sophora japonica L()的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症:肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。 槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12,16,，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。 [目的要求] 1(通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2(掌握槲皮素的制备原理及操作。 3(熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4(通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 [实验原理] 芦丁(rutin):CHO?3HO，浅黄色针状结晶，mp174,178?2730162 (含三分子水);188?(无水物)。难溶于冷水(1:8000,10000)，可溶于热水(1:180,200)，热甲醇(1:10)，冷甲醇(1:100)，热乙醇(1:60)，冷乙醇(1:650);难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素(quercetin):CHO?2HO，黄色结晶，mp313,314?151072 (2分子结晶水)，316?(无水物)。能溶于冷乙醇(1:290)，易溶于沸乙醇(1:23)，可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等;难溶于水、苯、石油醚等溶剂。 1 +鼠李糖+葡萄糖 芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。 [实验] 一、芦丁的提取分离及精制 方法? 槐米粗粉(50g) 置1000ml烧杯中，加入500ml饱和石灰水，加热，并维持pH8,9 煮沸20分钟，趁热用脱脂棉滤过 滤液 药渣 用300ml饱和石灰水煮沸10分钟，维持pH8,9 趁热滤过 滤液 药渣(×) 合并 在60?,70?下用浓HCl调pH至4 ,5 静置，抽滤 沉淀 低温(80?)干燥，称重。按1:200的比例加水， 加热使溶解，趁热滤过 滤液 静置，抽滤，减压干燥，计算收率 芦丁精制品 2 方法? 利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离。 槐米粗粉 沸水煮沸5,10分钟，反复2次 趁热滤过 水提取液 药渣 放冷 沉淀析出(粗芦丁) 热水重结晶 或乙醇重结晶 芦丁结晶 二、槲皮素的制备 称取精品芦丁1g 置250ml烧瓶中 加2%HSO200ml 24 加热回流1小时 放冷，静置，抽滤 酸性滤液 沉淀 中和 水洗两次，干燥 乙醇重结晶 中性滤液 称重，计算收率 浓缩 黄色细针状结晶 浓缩液 (槲皮素) (供糖的PC鉴定) 三、检识反应 1(芦丁的定性反应 取芦丁适量，加乙醇使溶解，分成三份供下述试验用: (1)盐酸镁粉试验:取样品液适量，加2滴浓HCl、再酌加少许 镁粉，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色至深红色。 (2)锆-枸试验:取样品液适量，然后加 2,ZrOCl的甲醇溶液，2 注意观察颜色变化，再加入2,枸椽酸的甲醇溶液，并详细记录颜色 3 变化。 (3)α-萘酚-浓硫酸反应:取样品液适量，加等体积的l0,α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色。 2(芦丁的UV (1)鉴定试剂的配制 ?甲醇钠溶液:取0.25g金属钠，切碎，小心加入色谱甲醇10ml中，此液置于玻璃瓶中，用橡皮塞密封。 ?三氯化铝溶液:取1g无水三氯化铝，小心加入色谱甲醇20ml中，放置24小时后全部溶解即得。 ?醋酸钠:用无水粉末醋酸钠。 ??硼酸饱和溶液:取无水硼酸，加入适量色谱甲醇、制成饱和溶液。 (上述贮备液可放置六个月) (2)芦丁溶液的配制 精密称取芦丁纯品0.5g，用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。 (3)光谱的测定 ?甲醇光谱:取样品液置石英杯中，至200,500nm内进行扫描，重复一次，观察紫外光谱。 ?甲醇钠光谱:取样品液置石英杯中，加入甲醇钠溶液3滴后，立即测定，放置5分钟后再测一次。 ?三氯化铝光谱，在盛有样品液的石英杯中，加入三氯化铝6滴，放置1分钟后进行测定。测定后加入3滴盐酸溶液(盐酸:水,1:1)再进行测定。 ?醋酸钠光谱:取样品液约3ml，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀(杯底剩有约2mg的醋酸钠)，加入醋酸钠后两分钟内测定，5分钟到10分钟后再测定一次。 4 3(芦丁及槲皮素的色谱 支持剂:中速层析滤液(5×20cm) 展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层 样品:自制槲皮素的乙醇溶液 自制芦丁的乙醇溶液 对照品:槲皮素标准品的乙醇溶液 芦丁标准品的乙醇溶液 显色剂:三氯化铝乙醇溶液喷雾 4(糖的纸色谱检识 支持剂:中速层析滤纸(5×20cm) 样品:取水解后的滤液10ml，水浴加热，且在搅拌下加适量碳 酸钡细粉至PH中性，过滤，取滤液并浓缩至2mI左右， 放冷后，供纸色谱点样用。 对照品:1,葡萄糖标准品醇溶液及1,鼠李糖标准品醇溶液 展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层 显色剂:喷以邻苯二甲酸苯胺溶液，105?烘烤5分钟至斑点显色清晰。 [实验说明及注意事项] 1(用石灰水调节芦丁提取溶液的PH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。 2(用HCl调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低(PH2以下)会使芦丁形成钅羊 盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。 3 (注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。 [思考题] 5 1(苷类结构检识的一般程序, 2(苷类水解有几种催化方法, 3(怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O位上, 4(怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖, 5(UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 6 7