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甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用【论文】

2017-11-12 3页 doc 13KB 14阅读

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甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用【论文】甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用【论文】 甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用 甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用 作者: 张建军 李洪源 王吉锡 李鑫 朴英爱 陈振华 谢志平 杨庆伟 【摘要】 目的 研究甘草抗病毒活性成分体外抗呼吸道合胞病毒的作用。方法 采用中性红实验和观察细胞病变法,以利巴韦林为阳性‎‎药,测定GX对RSV的抑制作用。结果 GX的半数中毒浓度(TC50)为460.00?μgml,半数有效抑制浓度为2 3.53?μgml,治疗指数为19.55;GX在RSV感染Hela细胞 2, 4,6,8,10?...
甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用【论文】
甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用【】 甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用 甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用 作者: 张建军 李洪源 王吉锡 李鑫 朴英爱 陈振华 谢志平 杨庆伟 【摘要】 目的 研究甘草抗病毒活性成分体外抗呼吸道合胞病毒的作用。方法 采用中性红实验和观察细胞病变法,以利巴韦林为阳性‎‎药,测定GX对RSV的抑制作用。结果 GX的半数中毒浓度(TC50)为460.00?μgml,半数有效抑制浓度为2 3.53?μgml,治疗指数为19.55;GX在RSV感染Hela细胞 2, 4,6,8,10?h后给药, 对RSV复制均有明显的抑制作用;且‎‎GX对RSV有中和作用。结论 GX在体外对RSV复制有明显的抑制作用。 【关键词】 甘草;呼吸道合胞病毒;抗病毒作用 呼吸道合胞病毒(RSV)是一个世界范围内婴幼儿最常见的呼吸道感染的病原体。目前,对RSV的防治仍无有效的疫苗和药物〔1〕。近年来,国内外有关抗病毒中药的研究日益增多,从中筛选其有效成分已成为当前抗病毒新药开发的一个热点〔2〕。本课题组在2016年报道甘草水提液具有明显的抗RSV的作用;在201X年发现甘草有效部位GC3 1 4具有抗RSV的作用基础上〔3〕,进一步分离到抗病毒活性成分(GX),并在细胞水平上检测其抗RSV的作用。现将结果如下。 1 对象与方法 1 1 材料 甘草。利巴韦林注射液。人宫颈癌传代细胞,。呼吸道合胞病毒。RSV在Hela细胞中的组织半数感染量为1×10- 6.60.2?ml。本次实验采用100TCID500.2?ml的感染量。硅胶制备板。甲醇、三氯甲烷、无水乙醇等,均为纯。中性红,用磷酸盐缓冲液稀释。脱色液: 由无水乙醇、枸橼酸钠和盐酸组成。 1 2 方法 1 2 1 甘草抗病毒活性成分(GX)的制备 甘草经水煎煮浸提、醇沉、大孔吸附 树脂柱层析得到的GC3 1 4,再经由氯仿和甲醇组成的展开剂,在硅胶板上经薄层层析得GX。 1 2 2 药物毒性实验 用细胞维持液将GX和利巴韦林释为7个浓度组,分别加入到Hela细胞已长成单层的96孔培养板上。同时设正常细‎‎胞对照组。置35?、5% CO2培养箱培养3?d后,弃去维持液,每孔添加0.2?ml中性红染液,放回培养箱培养2?h。取出后用磷酸盐缓冲液洗2次,添加0.2?ml脱色液。室温暗处放置30?min后,酶标仪450?nm波长下测吸光度值〔4〕,测定细胞存活率,求药物半数中毒浓度。细胞存活率=药物组平均A值细胞对照组平均A值×100%。 1 2 3 药物抗RSV实验 参照文献〔5〕。实验分3组进行。药物的抑制作用: 在96孔板上,接种100TCID500.2?ml RSV液,0.2?ml孔。吸附2?h后,分别加入不同浓度的GX和利巴韦林。置培养箱中培养。同时‎‎设正常细胞对照组和病毒对‎‎照组,待病毒对照组细胞病变为4时,中性红实验同上,测定病毒抑制率,求药物的半数有效浓度和治疗指数。病毒抑制率=,实验组平均A值-病毒对照组平均A值,,正常细胞对照组平均A值-病毒对照组平均A值,×100%。CPE记录规则: 0为细胞无CPE;1为0,25% CPE;2为25%,50% CPE;3为50%,75% CPE;4为75%,100% CPE。TI=TC50EC50。不同时间给药对RSV抑制作用: 向96孔板中,加入100TCID500.2?ml RSV液,0.2?ml孔,分别作用 2, 4,6,8,10,12?h后吸弃病毒液,再分别加入GX(浓度为120.00?μgml)和利巴韦林(浓度为80.00?μgml),培养方法同上。待病毒对照组CPE为4时,记录CPE结果。药物的中和作用: 200TCID500.2?ml RSV液与含不同浓度药物的维持液等体积混合,35?作用2?h后,加到96孔板中,0.2?ml孔。吸附2?h,弃上清,加细胞维持液,置培养‎‎箱中培养。待病毒对照组CPE为4时,记录CPE结果。
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