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食品中大肠菌群检测的新旧国标方法差异探讨

2012-09-26 2页 pdf 378KB 46阅读

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食品中大肠菌群检测的新旧国标方法差异探讨 广西轻工业 GUANGXI JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY 2011年 6月 第 6期(总第 151期) 食品与生物 近年来,随着食品安全的关注度越来越高,食品微生物学 检测也在短短的两年间更改了多个标准。新的检测方法,与国 际接轨的检测技术正逐渐进入我们的国标行列。其中大肠菌群 的测定无论从原理方法、试剂材料等方面都做了较大的改动, 结果的表示方式也与 03版的标准大相径庭。然而我国由于绝 大部分的卫生标准还沿用旧标准的形式,造成在 08版的标准 发布后不久,卫生部于 2009年发出第 16号文,...
食品中大肠菌群检测的新旧国标方法差异探讨
广西轻工业 GUANGXI JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY 2011年 6月 第 6期(总第 151期) 食品与生物 近年来,随着食品安全的关注度越来越高,食品微生物学 检测也在短短的两年间更改了多个。新的检测方法,与国 际接轨的检测技术正逐渐进入我们的国标行列。其中大肠菌群 的测定无论从原理方法、试剂材料等方面都做了较大的改动, 结果的示方式也与 03版的标准大相径庭。然而我国由于绝 大部分的卫生标准还沿用旧标准的形式,造成在 08版的标准 发布后不久,卫生部于 2009年发出第 16号文,明确了指标以 MPN/100mL(g)为单位的,仍然按照 03 版的标准进行测定。 2010年食品安全国家标准出台后,虽然卫生部没有再发布相 关公告,但食品业界及第三方检测机构均仍然按照旧标准对以 MPN/100mL(g)为指标单位的样品进行检测,如此便造成了在 国内长时间存在着新旧检测标准共存的情况。 本文就试图通过统计数据, GB/T4789.03- 2003的乳 糖胆盐发酵法和 GB 4789.3- 2010的 LST- BGLB发酵法进行 检测的结果差异,并就差异原因进行分析讨论。 1 实验材料 1.1 样品准备 由于微生物污染具有不均一性,考虑到实验主要评述方法 间的差异,为了将由样品而引起的误差减到最低限度,本实验拟 采用均一性较好的粉剂或液体,并且大肠菌群含量适中的样品 进行试验。但在实际工作中,卫生检验的主要对象为即食食品, 因而实验也选取了各种从市场上购买的即食食品作为样品。 根据工作经验,选择散装生牛奶、玉米粉、蔬菜粉、虾粉、植 物饮料和裹粉等 6个样品作为均一性样品,并结合即食食品, 从不同大肠菌群含量比较两个方法之间的结果差异。 1.2 培养基 GB/T4789.03- 2003:乳糖胆盐发酵培养基,伊红美兰琼 脂,乳糖发酵培养基。 GB 4789.03- 2010:月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST),煌 绿胆盐肉汤(BGLB)。 1.3 仪器 超净工作台、生化培养箱、显微镜。 2 实验原理和方法 取上述样品,按两种方法同时接种。 2.1 检验步骤 依据 GB/T4789.3- 2003《食品卫生微生物学检验大肠菌 群测定》[1],检验主要有以下步骤: (1)接种:以无菌操作取均匀后检样 25 mL(g)放于含有 225 mL灭菌生理盐水的灭菌三角烧瓶中,经充分振摇做成 1: 10的均匀稀释样液。根据食品卫生标准要求和对样品污染情 况的判断,选择 3个稀释度,每个稀释度接种 3管,放置 36℃ ±1℃的生化培养箱内培养 24±2 h。 (2)平板分离:将产气的发酵管分别划线在伊红美蓝琼脂 平板上,置 36℃±1℃的生化培养箱内培养 24±2 h。 (3)染色和证实:观察菌落形态,并做革兰染色。革兰染色 阴性的无芽胞杆菌的试管接种乳糖发酵管,置 36℃±1℃的生 化培养箱内培养 24±2 h。 (4)结果报告:凡是乳糖管产气、革兰染色阴性的无芽胞杆 菌,判定该管为大肠菌群阳性。根据大肠菌群阳性的管数,查 MPN检索表,乘以稀释倍数,报告每 100 mL(g)样品中大肠菌 群的MPN值。 2.2 测试步骤 依据 GB 4789.3- 2010《食品安全国家标准微生物学检验 大肠菌群测定》[2],测试主要有以下步骤: (1)接种:以无菌操作取均匀后检样 25 mL(g)放于含有 225 mL灭菌生理盐水的灭菌三角烧瓶中,经充分振摇做成 1: 10的均匀稀释样液。根据食品卫生标准要求和对样品污染情 况的判断,选择 3 个稀释度,每个稀释度接种 3 管 LST,放置 36±1℃的生化培养箱内培养 48±2 h。 (2)证实:将产气的发酵管挑取一环菌液接种 BGLB管,放 置 36±1℃的生化培养箱内培养 48±2 h。 (3)结果报告:根据大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表, 乘以稀释倍数,报告每 1mL(g)样品中大肠菌群的MPN值。 3 结果 乳糖法查表单位为 MPN/100g,LST 法查表单位为 MPN/g,为使两方法具有可比性,将 LST法查表结果×100。 【作者简介】梁智安(1984-),男,助理工程师,研究方向:食品微生物检测技术与食品安全分析。 食品中大肠菌群检测的新旧国标方法差异探讨 梁智安 (广州市食品工业卫生检测所,广东 广州 51 041 0) 【摘 要】 目前我国由于食品卫生标准尚未完全统一,造成国内在较长时间内对食品中大肠菌群检测的方法新旧国标并存 的情况。对不同样品分别用两种方法进行检测,进行差异分析,并就造成差异的原因进行探讨。结果表明两方法结果虽不存在明显 差异,但两结果不完全一致。 【关键词】 大肠菌群;新旧方法;差异探讨 【中图分类号】 R123.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003- 2673(2011)06-21-02 21 表1 实验结果表 4 统计分析 由于MPN值是基于泊松分布的统计学概率分布,其值变 化较大,目前并没有国标或明确的规定如何对其精密度和重复 性进行计算判定。本文就试图通过以下方法,对上述检验结果 进行分析。 (1)采用常用的数学统计学 t配对检验,求证两方法之间 是否存在显著差异。假设两方法的均值的差值 u=0,分析过 程如下: 表2 t配对检验数据处理表 X=52.83,ΣX=634,ΣX2=125580 SX=S/ n姨 = ΣX2 - ΣΣ ΣX 2 /Σ Σn / n n-Σ Σ1Σ Σ姨 = 125580- 52.83 2 /1Σ Σ2 /12 12-Σ Σ1姨 =949.60 t= xΣΣ-μ/SX =0.055 设α=0.05,则 t(11)0.05=2.201 t<t(11)0.05,故 P>0.05,两方法之间不存在显著差异。 (2)有研究[3]采用采用 Log10X的形式,Log10X1- Log10X2 ≤1时,则两者结果相符合。 表3 Log10X 数据分析表 分析结果显示两方法的结果均符合,没有明显差别,不存 在显著差异。 (3)由 ISO6888:3- 2003[4]可知,用 MPN法测定葡萄球菌 时,有 75%的可能性两结果的差异小于它们平均值的 1.25倍。 我们借用此判定规则,对结果进行整理,显示本次实验的 12个 结果均未超出此标准,则两方法对结果的判定没有明显差别。 (4)以 MPN表给出的 95%置信区间范围进行评估,可以 得出两方法检测结果菌落在双方的置信区间范围内(见表 4)。 表4 95%置信区间评估表 5 讨论 大肠菌群并不是某一种菌属的名称,标准对其的定义为 “在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧 革兰氏阴性无芽胞杆菌”,它包括了埃希氏菌属、柠檬酸杆菌 属、克雷伯菌属、肠杆菌属[5],难以用确定的菌体形态、平板特征 或生化特征对其进行描述和分辨,并且大肠菌群细菌由于周围 环境的变化,可以产生生理特性上的变异,因而对其检验均存 在一定的误差。 从数据分析可知,两结果并没有明显差异,但在实验大多 数情况上,二者相差一到两管阳性管,并且可以看出,LST法的 灵敏度更高。对此,可能的原因有: (1)新旧方法最为明显的是培养基的变化,虽然两者都建 立在乳糖发酵的基础上,但由于使用的步骤和抑菌剂不同,造 成两者在结果数据上存在差异。乳糖胆盐培养基中抑菌剂为胆 盐,有研究显示采用不同的胆盐,其抑菌效果差异明显[6]。LST 采用月桂基硫酸钠,能有效抑制非大肠菌群的生长。而且新方 法中 BGLB发酵能避免非乳糖的干扰,而且也避免了许多芽孢 杆菌等杂菌的干扰。 (2)乳糖胆盐法需经过平板分离的步骤,大肠菌在伊红美 蓝培养基中,因分解乳糖产酸,使伊红与美蓝结合而行成黑色 化合物,故菌落呈黑紫色,有时还有金属光泽。因此,检验人员 对大肠菌群菌落特征色泽和形态的熟悉程度,对检出率影响很 大。通常需要多挑可疑菌落,以避免假阴性的结果。可见,乳糖 法对人员要求比较高,而 LST法取消了平板分离步骤,减少了 由于主观性而造成的误差。 参考文献 [1]GB/T4789.3-2003,食品卫生微生物学检验大肠菌群测定[S]. [2]GB 4789.3-2010,食品安全国家标准微生物学检验大肠菌群测定[S]. [3]沈飚,汪云泉,徐君辉.M PN 原理的TEM PO 仪检测食品中大肠菌群 检测数据评定[J].检验检疫学刊,2009(3).39-40. [4]ISO 6888:3-2003 M icrobiology offood and anim alfeeding stuffs — H orizontalm ethod for the enum eration ofcoagulase-positive staphylococci (Staphylococcusaureusand otherspecies)—Part3: D etectionandM PN techniqueforlow num bers[S]. [5]李志明.食品卫生微生物学检验[M ].北京:化学工业出版社,2009. [6]孟昭赫.食品卫生微生物学方法注解微生物学部分[M ].北京:人民卫 生出版社,1990. ��� ������ ��������� ������ � �� � � � � ���� ��������� � ���� � �� � � � � �� � � �� � �� � � � � ��������������������������� �� ���������������������� �� � ���������������������� � ����������������������� ������������������������� � ���������������������� ������������������������� �������������������������� ������������������������� �������������������������� �� !������������������������ "#$����������������������� � ��������� � ��� ��������� � ��� ��������� ������� ������� �������� ����������������� ������������������������������ ������������������������ ������� ������������������������������ ������� ���� ������ ��������� ����������������������������� �� ��������������������������� !"��������������������������� #$����������������������������� %&����������������������������� ��'(����������������������������� )*+������������������������������� � ��������������� � ���������� �������������� �� ������������������������������� � ������������������������ ������������������������� �������������������������������������� � ��� ������ ��������� ������ � �� ����� ��������� ����� � �� � ��������� ������ ������ ������� ������ ������ ���� �� ������� � � ������� ���� ����������������� ��� ������ ������� ���� �� ��� �������� ������� ��� ������ ������ ������� ��� � ����� ���� �� ������� ��� ������� �� � �� ������� ��� �������� !"����� ������ ���� ����� #$����� ��� �� ���� �� ��� ��%&� ��� �������� ���� ��������� '()������ ���� ���� ����� ��� ���� � 22
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