血小板血型系统及检测技术

null五、交叉配血 (Matchcross Blood)五、交叉配血 (Matchcross Blood)交叉配血(Matchcross Blood)交叉配血(Matchcross Blood)一、交叉配血的概念 交叉配血实验也称配合性实验，实际上是检查不配合性。检查患者和献血员之间是否有对应的抗原、抗体存在。 1.主侧交叉配血 供血者的红细胞与受血者的血清反应 2.次侧交叉配血 受血者的红细胞与供血者的血清反应 3.自身对照 受血者红细胞与自身血清反应，排除自身抗体，DAT+，假凝集等干扰 null交叉配血(Matchcross Blood)交叉配血(Matchcross Blood)二，交叉配血的方法 1. 只能检出不配合的完全抗体 盐水介质法 2.可检出不配合的不完全抗体 抗人球蛋白法 蛋白酶法 低离子介质法等 3.改良的交叉配血方法 交叉配血(Matchcross Blood)交叉配血(Matchcross Blood)聚凝胺（Polybrene)配血法 利用高价阳离子的多聚季氨盐溶解后产生的大量正电荷可中和红细胞表面的负电荷缩小其之间的距离 微柱凝胶配血法（卡式配血法） 几种交叉配血试验的方法学评价几种交叉配血试验的方法学评价配血方法 缺点 优点 盐水配血试验 简单、快速 检不出IgG 酶介质试验 简便、经济 准确性、稳定性差 抗球蛋白试验 准确、可靠 复杂、费时、贵 凝聚胺试验 快速、准确 需特殊试剂 微柱凝胶试验 灵敏 成本高 交叉配血(Matchcross Blood)交叉配血(Matchcross Blood)三，交叉配血不合的原因 （一）主侧不合：Rs+Dc 1.不规则抗体 有同种抗体或自身抗体 2.冷凝集 3.假凝集 4.A2抗A1(1%-8%A2,22%A2B个体有抗-A1) 5.Dc的DAT+ 交叉配血(Matchcross Blood)交叉配血(Matchcross Blood)（二）次侧不合：Pc+Ds 1.Pc做DAT：阳性见于自身抗体，输血反应 2.Ds中有不规则抗体 3.忽略ABO亚型误定血型 4.冷凝集素吸附于Pc 5.异型输血null四，交叉配血的注意事项 1.离心时间与速度 2.水温箱的温度37℃ 3.水质，离子影响 4.用新鲜的标本 5.做抗人球实验时最好用血清 6.注意输血史，妊娠史 7.注意溶血的结果，被检血清中含有溶血性抗体，红细胞抗原+ Sound Of ColorsSound Of Colors我们何其幸运 无法确知 自己生活在什么样的世界 we’re extremely fortunate not to know precisely the kind of world we live in. —辛波丝卡 《we’re extremely fortunate 我们何其幸运》 血小板血型系统及检测技术血小板血型系统及检测技术一 、血小板血型抗原一 、血小板血型抗原定义: 指用同种免疫抗体检测出 的血小板表面抗原 分类： 血小板相关抗原 血小板特异性抗原（一）血小板相关抗原 （platelet-associated antigen）（一）血小板相关抗原 （platelet-associated antigen）血小板表面存在的与其他细胞或组织共有的抗原 包括：红细胞的血型系统（ABO等） 人类白细胞抗原（HLA）血小板HLA系统血型抗原血小板HLA系统血型抗原 　Chromosome 6 DPDQDRBCAClass IIClass I存在HLA-A和B位点的抗原HLA-C位点的抗原 未发现HLA-DP、DQ和DR等位点抗原P67（二）血小板特异性抗原（二）血小板特异性抗原 人类血小板抗原 （human platelet antigen，HPA） 血小板特有的,其他组织细胞没有 表现血小板独特的遗传多态性 均存在于血小板膜糖蛋白（GP）上 被国际输血协会组织确认的血小板特异性抗原已有6个系统，12个抗原，正式命名为HPA-1~HPA-5和HPA-15。命名规定如下：命名规定如下：在系统前冠以HPA，即人类血小板抗原（human platelet antigen）英文缩写 按发现顺序用数字编号 只有在共显性双等位基因全被检测出来后，才能被称为系统，对偶抗原按其在人群中频率由高到低，用字母命名，高的为a，低的为b 尚未发现对偶抗原的，给予暂时命名，在等位基因数字后加后缀w表示P98null二、血小板抗体二、血小板抗体 产生机理：机体对血小板表面或相关抗原免疫 临床分类：血循环中的游离抗体 结合于血小板上的抗体(PAIgG) 血型学分类： 血小板同种抗体：抗体不是针对自身抗原，而是与同种异基因的红细胞发生反应 自身抗体：受血者体内产生的抗体，针对自己本身的红细胞抗原。 见于：血小板输注治疗无效；同种免疫血小板 减少症；自身免疫血小板减少症；药物、病毒、细菌引起的血小板减少症null血小板表面存在众多复杂抗原，因此反复大量输注血小板的患者约50%以上产生血小板同种抗体 据报道HLA抗体占多数，约80%左右 HPA抗体单独存在频率较低（2%-3%） HPA抗体与HLA抗体共存（18%左右） 必须首先识别并去除血清中存在的HLA抗体，才能分析血小板抗体的特异性null鉴别有无HLA抗体存在的方法 淋巴细胞毒试验:抗原抗体反应在补体参与下破坏LC，活OR死细胞染色鉴别 混合淋巴细胞培养：两个无关LC体外培养，MHC不同，刺激增殖。计数转化后的母细胞或者被摄取的DNA量判定 除去血小板表面HLA抗原方法 　　　 0℃氯喹或酸溶液处理血小板P79P83血小板血型的临床意义血小板血型的临床意义血小板输注无效 输血后紫癜 新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜 血小板的自身免疫作用P100 一、血小板输注无效 （platelet transfusion refractoriness，PTR） 一、血小板输注无效 （platelet transfusion refractoriness，PTR）1、PTR定义1、PTR定义指患者在输注合适剂量的血小板后没有产生“适当的反应”，即连续两次输注足量随机供者血小板后，没有达到合适的校正血小板计数增加值（CCI），临床出血表现亦未见改善 2、PTR原因2、PTR原因免疫因素（17.5%）：反复输注血小板或有妊娠史的妇女，血清中产生血小板同种抗体，再次输注，发生免疫反应，血小板被巨噬细胞吞噬 HLA抗体、HPA抗体、ABO抗体、自身抗体、药物抗体、循环免疫复合物等 非免疫因素（67.5%）：发热、败血症、脾肿大、骨髓移植、DIC、静注抗菌素等；血小板质量 非免疫+免疫因素（15%）null二者区别 同种异体免疫 输入的血小板很快破坏，输注后1小时 和24小时均不见计数增高 非免疫因素 输注后1小时血小板计数增高，但24小时计数不增高或受影响 3、PTR的判定指标3、PTR的判定指标 临床:出血趋势不减轻，或出现输血性紫癜，出血加重。 血小板计数较输注前不仅不增高，有时还会下降。 判定血小板输注效果可通过 1.校正血小板计数增加值（ corrected count increment,CCI）: CCI =(输注后血小板计数- 输注前血小板计数) ×体表面积(m2) 输入血小板总数（×1011） PTR判定: 1小时CCI ﹤7.5×109／L 20-24小时CCI ﹤4.5× 109／L 2，血小板回收率（ percentage platelet recovery ,PPR）: PPR =(输注后血小板数－输注前血小板数)×血容量(L) 输入血小板总数×2/3 PTR判定标准：1hPPR﹤30% 20-24hPPR ﹤ 20%null一个体表面积为1.5的患者接受了4×1011的血小板后，其24h血小板上升了25×109/L 。计算CCI 一个体重80Kg的患者，输注了4×1011的血小板后，其24小时血小板上升了25×109/L血容量按照75ml/kg计算。计算PPR。 5、PTR的处理流程 5、PTR的处理流程首先考虑血小板质量问题，可输注ABO 同型的非库存血小板，以排除ABO系统的抗体或血小板质量方面的影响因素 若有发热、感染、DIC 等导致血小板消耗增加的因素存在，积极治疗原发病，并增加输注剂量 若有同种抗体存在，则挑选HLA、HPA 相合的供者血小板，或使用激素、免疫抑制剂或静脉注射免疫球蛋白。 若病人持续输注血小板效果不佳而又找不到明确的原因，则应考虑药物性抗体的存在，停用或换用相关药物二、输血后紫癜 （posttransfusion purpura, PTP）二、输血后紫癜 （posttransfusion purpura, PTP）定义：指输注全血或血小板后引起的急性、暂时性的同种免疫性血小板减少综合征. 临床表现： 在输血后1周左右突然发生 瘀点、瘀斑和黏膜出血，严重者有内脏和颅内出血 大多数的患者是女性，有输血或妊娠史P102 PTP预防和治疗措施 PTP预防和治疗措施 血小板抗体筛选 血小板交叉配血试验，选择配合型的血小板供体输注 大量静脉注射免疫球蛋白新生儿同种免疫血小板减少性紫癜 （neonatal alloimmune thrombocytopenia,NAITP）新生儿同种免疫血小板减少性紫癜 （neonatal alloimmune thrombocytopenia,NAITP）null病因：胎儿和母亲的血小板血型不合，使母亲产生同种抗体，通过胎盘进入胎儿体内，与胎儿血小板反应而导致胎儿和新生儿的血小板减少 症状：内脏和中枢神经系统出血，脑水肿，婴儿出生时(12~24小时)有严重、广泛的瘀点和瘀斑。最严重的并发症是颅内出血。或出生 时正常,于二、三天后出现血小板减少症 诊断：母体血小板抗体检测，抗原检定 患儿血小板抗体(表面、游离)检测 预后：死亡率13%P104null治疗措施 给患儿输入与母体血清中同种抗体无反应性的血小板 对患儿进行换血治疗，纠正患儿的血小板减少。 对新生儿的治疗一般选用静脉内注射免疫球蛋白 预防 对血浆中含有高效价血小板同种抗体的孕妇做血浆置换治疗，降低孕妇血浆中同种抗体的含量，以减少对胎儿和新生儿的危害。血小板的自身免疫作用 ——特发性血小板减少性紫癜 （idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）血小板的自身免疫作用 ——特发性血小板减少性紫癜 （idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）定义：免疫系统失调，患者体内存在抗血小板自身抗体，使血小板大量破坏，是一种自身免疫疾病 临床表现：出血症状P105null发病 血小板自身抗体可与自身和同种血小板结合，破坏血小板 血小板自身抗体与巨核细胞结合，影响血小板的生成 血小板自身抗体的分布 血小板相关免疫球蛋白（PAIgG）：与血小板上的相关抗原结合，PAIgG升高的水平与血小板减少的程度有关 游离抗体 ITP的治疗 ITP的治疗血小板输注不仅没有疗效，还有可能因血小板表面各类血小板抗原的同种免疫作用，导致输血后紫癜等输血反应 治疗方法 应用皮质激素等免疫抑制剂 脾切除术 大量血浆置换 大剂量静脉注射免疫球蛋白