null三、血红蛋白测定三、血红蛋白测定(一)血红蛋白的结构(一)血红蛋白的结构血红蛋白结构: 由珠蛋白和亚铁血红素结合组成。null空间结构:每个血红蛋白有4条珠蛋白肽链,
每条肽链包裹1个亚铁血红素,形成具有
四级空间结构的四聚体。 null【分类】(每个珠蛋白分子含两条α 链和两条非α 链)
正常人:HbA ( α2β2) 占90% 成人主要血红蛋白;
HbA2( α2δ2 ) 占2%-3% 成人次要血红蛋白
HbF ( α2γ2 ) 占2%以下 胎儿主要血红蛋白
null生理情况下,99%Hb的铁呈Fe2+状态,称为还原血红蛋白,亚铁状态的Hb与氧结合称氧合血红蛋白(HbO2).
1%Hb的铁呈Fe3+状态,称为高铁血红蛋白(Hi)。
Hb的合成受激素的调节:Epo和雄激素。null注意事项:1. 如α-链或β-链合成障碍,使三种正常血红蛋白比例异常,即各型地中海贫血;如多肽链发生氨基酸置换、丢失、加长,称为血红蛋白病 。
2.病理情况下可出现硫化血红蛋白(SHb)。
(二)血红蛋白衍生物及其吸收光谱 (二)血红蛋白衍生物及其吸收光谱 1.氧合血红蛋白(oxyhemoglobin, HbO2):Hb与O2结合时形成。
2.还原血红蛋白(reduced hemoglobin, Hbred):未与O2结合时的Hb。
3.高铁血红蛋白(hemiglo -bin, Hi)或正铁血红蛋白(methemoglobin, Mhb): Fe 2+被氧化成Fe 3+。null4.碳氧血红蛋白(HbCO)、硫化血红蛋白(SHb):与O2结合的配位键被CO、S等占据。
5.氰化高铁血红蛋白(HiCN):Hi与CN-结合而成。波峰540nm,波谷504nm。正常情况下,血液中血红蛋白主要是HbO2和Hbred,以及少量HbCO和Hi。(三)血红蛋白测定方法(三)血红蛋白测定方法手工法:HiCN法SDS-Hb法AHD575法HiN3法血液
仪法1、氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法1、氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法1)原理:在Hb转化液中,除SHb外,Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白,再与CN-结合,生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白(HiCN),吸收峰为λ540nm,毫摩尔消光系数为44 L·mmol-1 ·cm -1 。因此根据标本的吸光度,即可求得血红蛋白总量(不含SHb)。null2)器材:
分光光度计、移液管、微量吸管、试管等。
3)试剂:血红蛋白转化液(文齐液)成分如下
①高铁氰化钾:使Hb转化成Hi
②氰化钾:使Hi形成HiCN
③无水磷酸二氢钾:防止混浊,调节pH值
④TritonX100:非离子型表面活性剂,加速溶血,缩短转化时间,防止因血浆蛋白改变引起的混浊。
null4)操作:
a. 取指血20ul,加到5ml血红蛋白转化液中,混匀,静置5分钟。
b. 用分光光度计比色。波长540nm,以空白转化液调零,测定吸光度“A”。null5)计算
①
状态下的计算
Hb(g/L)=A× ×251=A ×367.7
其中,A为测得的吸光度,64458为Hb的分子量,
251为测定时血液稀释倍数,44为HiCN的毫摩尔吸光系数,×1000为换算成摩尔吸光系数。6445844×1000null②非标准状态下的计算:求换算常数K
∑标准液标定Hb液浓度 (标准值)
K= -----------------------------------------------
∑本室测定标准液的“A” (测定值)
标本Hb g/L = 标本测定值A×K
null举例:用不同浓度的Hb的标准品:50,100,150,200g/L测得的吸光度分别为0.13, 0.27, 0.41和0.54 。则K值为
K= = =371.75
若测定管吸光度为0.32,则测定管Hb浓度为
Hb(g/L)=0.32×371.75=118.96∑Hb∑A50+100+150+2000.13+0.27+0.41+0.54null6)结果报告
Hb g/L
7)参考值
成年男性:120-160 g/L
成年女性:110-150 g/L
新生儿: 170-200 g/L
null贫血分级:
轻度:男性<120g/L,女性<110g/L
中度: <90g/L
重点: <60g/L
极重度:<30g/Lnull8)质量保证
废弃物:KCN为剧毒药品,要小心对待,实验完后要用次氯酸钠溶液处理后才能弃倒。
b. 器材及试剂:血红蛋白转化液不能贮存在塑料瓶中,否则CN-下降使结果偏低。
c. 标本:下列因素可引起Hb假性增高:脂血症、血液浓缩、白细胞>30×109/L,重症黄疸,严重的血管内溶血等。2、方法学评价2、方法学评价1)HiCN法:由国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐,并经WHO确认为血红蛋白测定的参考方法。
优点:①操作简单,结果稳定可靠,试剂容易保存
②能测定除SHb以外的所有血红蛋白,并易 于建立质控。
null缺点:①不能测定SHb。
②对HbCO转化太慢,需要100分钟。
③高丙种球蛋白血症,变性Hb血症,高白细胞的血可出现混浊,按15g/L(pH7.2~7.5)甚至50g/L(pH6.7~6.9)加入氯化钠可防止,高浓度有核RBC引起的混浊不能防止。
④KCN为剧毒,需妥善保存。2)SDS-Hb(十二烷基硫酸钠)法2)SDS-Hb(十二烷基硫酸钠)法优点:试剂无毒,结果准确,重复性好
缺点:①SDS纯度难保证;
②依赖HiCN法,间接得到结果;
③试剂可破坏WBC,不能与WBC同时共用标本进行血细胞计数的自动分析。3)叠氮高铁血红蛋白法(HiN3)3)叠氮高铁血红蛋白法(HiN3)优点:准确度、精密度较高
缺点:试剂仍有毒性,HbCO转化慢
本法与HiCN法相似4)碱羟血红蛋白法(AHD575)4)碱羟血红蛋白法(AHD575)优点:试剂简易,不含毒性,呈色稳定,准确性与精确性较高。
缺点:波峰位于575nm处,溶液中碱性较高,不适用于自动检测,HbF不能转化。5)CTAB法5)CTAB法优点:溶血性强且不破坏白细胞,适于血液分析仪检测。
缺点:精密度、准确度略低。沙利法为传统血红蛋白测定法,已淘汰。6)血液分析仪法6)血液分析仪法优点:简便、快速、多项。
缺点:①仪器型号不同,使用的溶血剂不同,形成的Hb衍生物不同。
②某些溶血剂形成的Hb衍生物稳定性较差,因此要严格控制溶血剂的量及作用时间。
null③对具有抗溶血剂作用的疾病(肝病、低色素性贫血),溶血不完全而影响结果。
④有些溶血剂内虽加入了KCN,但其衍生物并非HiCN,而是氰化血红蛋白,仪器需经过HiCN标准液校正后,才能进行Hb测定。
(四)Hb与RBC测定的临床意义(四)Hb与RBC测定的临床意义参考值 RBC Hb
男性 (4.0~5.5)×1012/L 120~160g/L
女性 (3.5~5.0)×1012/L 110~150g/L
新生儿 (6.0~7.0)×1012/L 170~200g/L
>70岁男性 94.2~122.2g/L
>70岁女性 86.5~111.8g/L(1)生理变化(1)生理变化1)年龄与性别
①新生儿
②6个月~2岁婴儿 ,生长发育迅速,血容量 造血原料不足,引起生理性贫血。
③老年人 :对营养摄取、利用和造血功能减退,RBC、Hb比中青年人低。
④男性>女性:雄激素null2)精神因素:情绪波动,使肾上腺素增多,RBC、Hb
3)气压:气压低(高山居民),红细胞代偿性
4)长期多次献血者,红细胞代偿
5)妊娠期 :妊娠期血容量明显 ,引起血液稀释,Hb常在100g/L以下,生理性贫血。(2)病理变化(2)病理变化1)RBC和Hb增多
指单位容积血液中红细胞数值及血红蛋白含量高于正常值高限。
男性 Hb >170g/L 女性 Hb >160g/L
RBC >6.0×1012/L RBC >5.5×1012/Lnull①相对性增多:由于大量失水、血浆量下降而使血液浓缩所致,如呕吐、严重腹泻、大面积烧伤等。
②绝对性增多:见于慢性心肺疾病,真性红细胞增多症。null2)红细胞和Hb减少:贫血
①骨髓造血功能低下:如再障、白血病、恶性肿瘤
②造血原料缺乏:如缺铁、叶酸、VB12等;
③红细胞破坏增加:如各种溶血性贫血;
④红细胞丢失过多:如急、慢性失血;
⑤促红细胞生成素减低症(肾性贫血)Hb测定与红细胞计数的临床意义相似,但对贫血
程度判断的准确性优于红细胞计数。
Hb含量与RBC数量的关系 Hb含量与RBC数量的关系 红细胞与血红蛋白的增减不一定成比例,如大细胞
性贫血患者的RBC往往较Hb减少显著;而小细胞性贫血患者则相反。
正色素性贫血:RBC、Hb成正比减少
低色素性贫血:RBC < Hb
高色素性贫血:RBC >Hbnull四、红细胞比容测定( PCV或HCT )
比容又称压积,是指抗凝血, 在规定的条件下离心
沉淀后,压紧的红细胞所占全血体积的比值。
比积大小与RBC数量及大小有关(一)测定方法:
常用的有手工法和血液分析仪两类,
手工法用PCV表示(packed cell volume)
血液分析仪法用HCT表示下面介绍手工法常用的离心法的两种方法null1、温氏法
[原理]
将一定量抗凝血液注入温氏管,
经一定速度和时间离心沉淀后,
读取红细胞占全血的比值(L/L或%)[器材]
(1)温氏管:管上刻有2种刻度,容积为1ml
①自下至上0~100mm刻度----测PCV
②对侧有自上而下的 0 ~ 100mm刻度----
温氏法测红细胞沉降率。红细胞比容测定ⅼ温氏法null(2)离心机:
用水平式离心机,离心机相对离心力(RCF)
应达2264g,
RCF(g) =1.118×10-5 ×有效离心半径(cm)×(每分钟转速)2
有效离力半径:
指从离心机的轴心至红细胞层中点的距(cm)。①有效离心半径在16cm时,相对离心力要达到
2264g,其转速应为3500转/分。②有效离心半径是22.5cm时,转速应用3000转/分。红细胞比容测定ⅼ温氏法null[试剂]: 干燥抗凝管,下列试剂任选一种:
(1) 双草酸盐抗凝管:
草酸钾0.8g,+草酸铵1.2 g,加 蒸馏水至100ml→
取2ml至小试管→800C以下烘干→可抗凝2ml血(2)EDTA-K23mg→可抗凝血2ml(3 )肝素0.2 mg→可抗凝2ml血红细胞比容测定ⅼ温氏法
null[操作]
①干燥EDTA-K2抗凝管或双草酸盐抗凝管+静脉血2ml,
立即混匀 →②将混匀血液用细长的吸管插入温氏试管管底,
注入血至“100”刻度→
3000转/ 分离心30min →读数→③再离心10min →至红细胞柱不下降止 →
读取红细胞柱毫米数,除以100
即为每升血液红细胞体积的升数(升/升),
结果以后者为准。
或直接读数为PCV的 %红细胞比容测定ⅼ温氏法null离心后血液分五层]:
血浆层 淡黄色
血小板层 白色乳縻层
白细胞和有核红细胞层 灰红色
还原红细胞层 暗红色
含氧层红细胞 鲜红色
[结果报告]
PCV: 0.△△L/L ;
或%(直接读mm数加%)红细胞比容测定ⅼ温氏法null[注意事项]
① 器材须清洁干燥,防止溶血。② 注入血液时,温氏管内不能有气泡 ③ 抗凝剂要用不改变RBC体积的抗凝剂,如肝素̀
双草酸盐抗凝或EDTA,以免造成红细胞膨胀或皱缩
双草酸盐抗凝应在3h内做完。④ 若用斜角离心机,细胞沉淀为斜面,此时应读取
斜面中间刻度数。⑤ 若有溶血现象应加注明,特别是溶血性贫血病人。⑥ 静脉抽血时,刺入血管后,应立即解开压脉带,
防止血液浓缩红细胞比容测定ⅼ温氏法null⑦ 影响离心力的因素:
离心机有效半径不足 转速不足→
病人红细胞增多
离心机负荷过大 使相对离心力↓ 此时应延长离心时间
或提高离心速度 红细胞比容测定ⅼ温氏法注意事项null2、微量离心法:
[原理]
将一定量血液注入特制的肝素化毛细玻管中,
定速和定时离心沉淀后,→读取红细胞及全长度,
计算其比值即红细胞比容(L/L或%)[器材]
①经肝素处理的毛细玻管;
②高速离心机
③专用读数尺;
④ 采血针、75%乙醇、棉球红细胞比容测定null[操作]
①毛细血管采血→
用虹吸法充入经肝素处理的毛细玻
管的2/3(50mm)处) →②封口:向未吸血毛细玻 管端插入专用封口座封口
→③离心:
封端向外,放入专用水平式毛细管比积离心机,
→以12000r /min高速离心5 min →④读数:
取出离心后的毛细玻管→专用读数板凹槽中
→移动滑尺刻度至还原红细胞层→读数
或用刻度尺分别测量红细胞层和全层长度,
计算其比值红细胞比容测定ⅼ微量离心法null[注意事项]
①毛细血管采血针刺要深,取第二滴血检验
②封口要平,并封实,应深入毛细玻 管内2mm
③RCF以10000∼15000g为宜,
当Hct>0.5时应再离心
④进行双份标本测定,其结果之差应<0.01红细胞比容测定ⅼ微量离心法null[方法学平价] 测定方法较多
(1)温氏法应用较久和普遍,其缺点是:
①沉淀不完全,
不能将RBC之间的血浆完全排出→
结果偏高,温氏离心法以PCV表示
②标本用量较多,费时
已逐渐被微量法所取代红细胞比容测定null(2)微量离心法:
①离心力大(RCF≥10000g),
RBC之间殘留的血浆少, ②结果较温氏法低(平均低0.02), ③用血量小,简便,快速,被WHO推荐为首选方法(3)血液分析仪法以Hct表示,
提供Hct数据,是通过RBC计数和RBC体积测定
而间接计算出来的,避免了殘留血浆引起的误差
红细胞比容测定方法学平价null[参考值]:
男性 0.40~0.50 40 ~50%
女性 0.37~0.48 37~48%
1~ 3岁 0.35~0.47 35~47%
新生儿 0.47~0.67 47~67% [临床意义]:
(1)、PCV增高:
A) 生理性见于高原生活、剧烈运动、新生儿等。红细胞比容测定nullB) 病理性增高
①见于各种原因所致的血液浓缩:
常作为脱水,烧伤病人的补液依据。
比积是掌握血液稀释程度的可靠指标。 ②继发性红细胞增多症:肺心病、先天性心 脏病③ 真性红细胞增症,可达80%。 (2)、红细胞比积降低:见于各种贫血和血液稀释。红细胞比容测定的临床意义null(3)、PCV是影响全血粘度的决定性因素之一。
PCV↑ 全血粘度↑ 高粘滞综合证
血流量↓组织缺氧
血栓形成,
血管阻塞,代谢紊乱,功能失调。(4)、PCV与其他血液流变学指标联合应用对血栓性疾病
的预测具有重要意义。(5)、PCV是计算红细胞三种平均值(MCV、MCH、
MCHC)的基础数据之一,用于贫血的形态分类。 红细胞比容测定的临床意义 五、 红细胞平均指数
红细胞平均指数包括:MCV 、MCH 、MCHC三种平均值
[要求]:
1、用同一份标本(采血部位,采血时间一致)
按Hct要求静脉采血2ml,用EDTA-Na2抗凝。 2、RBC、Hb应测2~3次,取平均值 3、Hct按标准离心。[注意]:
1、平均值的可靠性取决于原始数据的准确性。2、三种平均值不等于红细胞形态无改变,必须
结合血片形态观察,综合分析。 null[计算]:
1、平均红细胞容积(MCV):
指每个红细胞的平均体积,以飞升(fl)
为单位。 1L=10 15fl(um3)
HCT
MCV=-----------×10 15fl
RBC
null2、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)
指每个RBC内所含Hb平均量,以皮克
(pg)为单位或微微克uug表示。
1g=1012 pg(uug).
Hb(g/L)
MCH=-----------------×1012 pg
RBCnull3、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)
即压积红细胞的血红蛋白浓度,以g/L
表示。
Hb(g/L)
MCHC=------------------
HCT血液分析仪通过仪器计算得出三种平均值null [临床意义]:三种平均值常用作贫血的形态学分类。
贫血形态学分类
贫血分类 MCV(fl) MCH(pg) MCHC(g/L) 病 因
正 常 80—100 27—34 320—360
正细胞性 80--100 27—34 320--360 急性失血
白血病
溶血、再障
大细胞性 >100 >34 320--360 缺B12、叶酸
单纯小细 <80 <27 320--360 感染、中毒
胞性 急、慢性炎
症、尿毒症
小细胞低 <80 <27 <320 缺铁贫、
色素性 B6缺乏
慢性失血null六、红细胞体积分布宽度P25
(red blood cell volume distribution, RDW)
RDW:反映周围血红细胞体积差异的参数,
通过变异系数(CV) 定量地表示红细胞体积
分布的离散程度。
为血液分析仪根据红细胞体积直方图导出来的
一个新参数.[方法学评价]:
对红细胞体积大小的评价,
RDW优于血片对红细胞形态的观察,
更准确、更客观地反映血红细胞体积差异的程度null[临床意义]:
1、用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察:
缺铁贫(IDA):
①RDW值增大,早期其他参数如MCV 、MCH可正常。
②铁剂治疗有效时RDW值一过性进一步增大,
随后 降至正常。
③灵敏度达95%,但特异性不强,可作为筛选指标[参考值]:
成人≤15% (11.6%∼14.6%)
新生儿 男≤15.9% 女≤16.2%
null2、对小细胞低色素性贫血的鉴别诊断:
缺铁贫(IDA)--→ RDW值增大。
轻型地中海贫血-- → RDW值正常null3、用于贫血的分类(Bassman MCV/RDW分类法)
MCV RDW 分类 常见病
减低 正常 小细胞均一性 轻型地中海贫血
减低 增高 小细胞不均一性 IDA
正常 正细胞均一性 再障、白血病
正常 失血贫、慢性疾病
增高 正细胞不均一性 早期IDA
营养性贫血
正常 大细胞均一性 部分再障
增高 骨髓增生异常
增高 大细胞不均一性 巨幼贫 null七、网织红细胞计数
[网织红细胞] :
①是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之
间的过渡型细胞,属于未完全成熟的红细胞②无核,由于其胞浆中尚存在有嗜碱性物质(RNA)
,因而用煌焦油蓝染液进行活体染色后,
胞浆中可见有蓝绿色的网状结构,故名网织红细胞。③其能完成最后20%血红蛋白的合成,
即转为成 熟红细胞。
计数时任何没有核的有两个或更多的相当于核
糖粒RNA蓝染物质颗粒的红细胞均计为网织红。null[形态特点]
比成熟红细胞稍大,直径8.0~9.5cm。细胞内含有蓝色
颗粒或线条状网织结构,颗粒愈少愈成熟,
多分布于边缘。
[分型]: O型
花冠型 Ⅰ型
丝球形 Ⅱ型
网 型 Ⅲ型
破网型 Ⅳ型
点粒型 骨 髓 周 围 血null O型
花冠型 Ⅰ型
丝球形骨 髓null Ⅱ型
网 型 Ⅲ型
破网型 Ⅳ型
点粒型周 围 血null[器材]
1、Miller窥盘:
直19mm,厚1mm,圆形玻片
,内含大小两个正方格,
二者面积比为9:1。2﹑缩微用具 Miller窥盘
3、显微镜
4、试管、玻片红Ret 仪器法:网织红细胞计数仪、血液分析仪法
计数方法有:
显微镜法、
下面介绍显微镜法
null[试剂] 下列试剂任选一种
1、新亚甲蓝溶液 :
新亚甲蓝0.5g 、草酸钾1.4g 、 氯化钠0.8g
蒸溜水加至100ml→过滤后贮存于棕色瓶中
此液为WHO所推荐,对Ret染色强,且稳定。 2、10g/L灿烂甲酚蓝(煌焦油蓝)酒精溶液染液:
1g煌焦油蓝+100ml 95%乙醇→碾磨溶解→
过滤后贮存于棕色瓶中3、煌焦油蓝溶液 :
1g煌焦油蓝 + 枸橼酸钠0.4g + 氯化钠0.8g+蒸溜水
加至100ml→过滤后贮存于棕色瓶中网织红细胞计数ⅼ显微镜法null[方法] 显微镜法又有试管法和玻片法2种:
1、试管法操作
小试管内加染液2D+血2D混匀
37度水浴15min,
取出混匀, 制成薄血膜片。
待干
油镜计数1000个红细胞中的网织红细胞数。
1000细胞=(Rbc+Ret)网织红细胞计数ⅼ显微镜法null网织红细胞计数ⅼ显微镜法2、玻片法操作
①于玻片一端加10g/L煌焦油蓝酒精液1~2D,
干燥(反复查-3次)备用
②取等量血于已干燥染料膜上→
用推片角搅动混匀后染 3~5分钟→
推成薄血膜→
油镜计数方法同上
(计数1000个红细胞中的网织红细胞数)。 null[计算]
①所计网织红细胞除以1000即为网织红细胞分数数。
所计数的网织红细胞
网织红细胞分数数=
1000网织红细胞计数ⅼ显微镜法②网织红细胞除以10即为百分率数。
所计数的网织红细胞
网织红细胞百分率= (%)
10③网织红细胞绝对数(×109/L)=RBC/L× 网织红细胞分数数null3、油镜计数网织红细胞可用
Miller窥盘计数:
(1)、Miller窥盘:
直径19mm,厚1mm,
内含大小两个正方格,
二者面积比为9:1。
放于显微镜目镜内
大方格内计数网织红细胞
小方格内计数红细胞Ret红null(2)、操作:
在目镜中装入Miller窥盘→ 选择 红细胞分布均匀处: →①转油镜在Miller窥盘的小方格中(A),
计数红细胞数, ②并计数大方格(B)内网织红细胞数。(3) 计算
大方格(B格)内网织红细胞数
Ret% = ----------------------------------------×100%
小方格(A格)内红细胞数×9(4) 红细胞计数范围可按质控要求计数。网织红细胞计数ⅼ显微镜法null 控制Retic计数CV=10%需要镜检的RBC数
Ret(%) Miller窥盘小方格内镜 相当镜检RBC数
RBC数
1~2 1000 9000 3~5 500 4500
6~10 200 1800
11~25 100 900
控制Retic计数CV≤15%需要镜检的RBC数
Ret(%) Miller窥盘小方格内镜 相当镜检RBC数
RBC数
1~2 444 4000 3~5 222 2000
>6 110 1000null例:①计数1个视野小方格中的红细胞总数是120个,
同时计数的大方格中的网织红细胞总数是16个:
其Retic 的百分率为:
16
Retie%=-------------×100 %= 1.5%
120×9 ②当小方格内计数的红细胞>111个时,即相当于观察
了1000个红细胞,在此过程中观察到的网织红细胞
数的总数除以10即为Retic数占红细胞中的百分率。
例:小方格内计数的红细胞达到111个时,已计数到12个
Ret
12
Retie%=-------------×100 %= 1.2%
10null(4) 注意事项
① Miller窥盘法是用1/9的面积推断整个大方格内
RBC 数,故细胞分布要均匀, ②对压上线、右线、右下角RBC和Retic不计数。 ③增加计数量,计数相当4000个红细胞内的Retic数,
可使精密度提高一倍。 网织红细胞计数ⅼ显微镜法null[Ret的其他参数及计算]
(1)血液分析仪法的参数:
①网织红细胞平均体积(MCVr)
②网织红细胞血红蛋白分布宽度(HDWr)
③网织红细胞血红蛋白浓度(HCR)
④网织红细胞平均血红蛋白浓度(MCHCr)
⑤ LFR(低荧光率)、
MFR(中荧光率)、
HFR(高荧光率)
⑥网织红细胞成熟指数 (R M I)
R M I=(M F R + H F R)/ L F R ×100 %网织红细胞计数ⅼnull (2)网织红细胞生成指数 (R P I):
代表网织红的生成相当于正常人的多少倍
病人被测Hct 1
RPI= Ret% ×------------- ×
0.45(正常Hct) Ret成熟天数
正常人Ret为1%, Hct为0.45,则RPI为1
严重贫血 Ret为15%, Hct为0.25, Ret成熟时间为2天
Hct 升/升 0.45 0.35 0.25 0.15
成熟时间(天) 1 1.5 2 2.5网织红细胞计数ⅼ其他参数null[质量控制]
1、显微镜法:
网织红细胞计数的误差大,影响因素多:
①形态识别的差异; ②涂片质量的好坏;
③计数细胞的多少; ④计数的方法
目前首选Miller窥盘法计数网织红细胞,
证明可降低标准误,
95%可信限为:Ret2 Sp(标准误)
Ret(1 – Ret)
95%可信限为:Ret2 N
Ret网织红细胞分数数; N为所数红细胞数null例:计数1000个红细胞,网织红细胞为0.04,
则Sp= Ret(1– Ret) = 0.04(1-0.04)
N 1000
= 0.006
95%可信限 = Ret 2 Sp = 0.04 2 ×0.006
= 0.04 0.0122、仪器法:可计数10000 ~5000个红细胞,误差缩小,
但形态识别能力差,
如出现Howell-Jolly小体、有核红、巨血小板,
则可见假阳性网织红细胞计数的质量控制null[方法学评价]
(1)显微镜计数法:
①为主要方法,
a)但效率低,精密度低,重复性差,CV达20%以上。b)且受红细胞浓度影响,红细胞减少时Ret%偏高。c)临床应用价值逊于绝对值计数法。d)使用Miller窥盘,可使精密度控制在CV≤15%,
并缩 短工作时间。
但前提是涂片中红细胞必须均匀分布,
否则结果不准。网织红细胞计数ⅼe)能直接观察形态 ,试管法为参考方法null ②染色剂:
a、新亚甲蓝染液为WHO推荐,但棕色瓶中储存只能稳
定3周。 b、灿烂甲酚蓝染液易产生沉淀,成本较高。 c、中性红染液价廉、易溶解、可稳定一年,
突出优点是不受变性珠蛋白小体的干扰。③实验温度:
无论何种染色均应在37℃下进行,
否则检出率明显减低。网织红细胞计数ⅼ方法学评价null(2)、流式细胞计数仪法:
①效率高(60个标本/h);精密度高CV≤5%,
重复性好。②可同时报告相对值、绝对值、荧光强度,
具很高的应用价值。③但价格昂贵,尚未普及。网织红细胞计数ⅼ方法学评价(3)血液分析仪法:
最新型的血液分析仪,采用了流式细胞技术,
有网织红细胞计数功能,且具多参数null[参考值]
(1)显微镜计数法:
相对值:
国外成人、儿童:0.005~ 0.015(0.5% ~ 1.5%)
新生儿:0.02 ~ 0.06(2% ~ 6%)
国内成人:0.8 %~ 2.0% 平均1.64%
绝对值:(25~75)×109 /L 网织红细胞计数ⅼ参考值null(2)流式细胞计数仪法:
20~40岁 相对值:0.7±0.5 (%)
绝对值:43.6±19.0(×109/L) 荧光强度:反映Retic中RNA含量,
荧光率越高含RNA越多,示Retic越幼稚。分成三度:LFR低荧光率(低荧光强度)
MFR中荧光率(中荧光强度)
HFR高荧光率(高荧光强度)
周围血中所占%比为: LFR > MFR > HFR 网织红细胞计数ⅼ参考值null网织红细胞计数ⅼ参考值(3)血液分析仪法:
Ret LFR(%) MFR(%) HFR(%) MCVr(fl) RDWr(%) HDWr(pg)
X 1 86.1 11.3 2.6 111.8 17.75 33.4
S 0.41 4.77 4.14 1.73 5.3 2.35 5.2
成熟指数(RPI): 1 null[临床意义]
(一)评价骨髓造血功能:
1、Retic增高、MFR 、 HFR网织红比率增高
表示骨髓红细胞生成旺盛:
(1)最常见于溶血性贫血(可高达20% ~ 50%)
绝对数>100 ×109 /L 网织红细胞计数ⅼ(2)其次为急性失血性贫血5 ~ 7天达高峰,
2周后恢复。 (3)营养性巨幼贫和缺铁贫,
仅轻度增加/正常/减少。 (4)Ret持续上升,常提示慢性失血,如消化道溃疡null 2、Retic减少、MFR 、 HFR网织红比率减少,
LFR比率 相对增高,表示骨髓红细胞生成减弱:(1)主要见于再障,临床上将贫血病人Retic绝对值
<15×109/L作为急性再障诊断指标。 (2)化学治疗,放疗所致骨髓抑制。网织红细胞计数ⅼ临床意义null(二)治疗效果观察:
1、增生性贫血和营养性巨幼贫:
经相应冶疗后1-2日网织红即开始增加,
1周左右达最高峰。
1周后红细胞及血红蛋白上升。2、再障治疗有效时,
Retic渐渐回升可轻微增高。
无效时, Retic不增高网织红细胞计数ⅼ临床意义null3、促红细胞生成素治疗有效时,网织红上升,
荧光强度增高。 4、Retic成熟指数(RPI):
(1)可用于观察骨髓移植术后造血功能的重建情况。
优于中性粒细胞绝对值。
(2)RPI增高见于溶贫 、ITP 、急性白血病、
红白血病、真性红细胞增多症、再障、
RPI降低见于骨髓衰竭或无效造血网织红细胞计数ⅼ临床意义null5、荧光强度MFR + HFR值
称未成熟的网织红细胞比率(I R F),
可作为骨髓移植术后
,造血功能恢复早期指标。
比白细胞早1.5天,
比网织红计数早3天。 6、监测化学治疗和放射治疗对骨髓的抑制情况:
幼稚Retic早期变化是反映骨髓受抑制及功能恢复的
早期指标。
幼稚Retic↓反映骨髓受抑制。 网织红细胞计数ⅼ临床意义null 八 嗜碱性点彩红细胞计数
[点彩红细胞]
①是不完全成熟红细胞浆中含有残存的变性沉
淀的RNA颗粒。②经碱性美蓝染色后,可见染成深蓝色的颗粒。③在瑞氏染色中可见谈红色胞浆中含有粗细不等
的蓝黑色颗粒。null[试剂】
1、碱性美蓝液:
美蓝0.5g+碳酸氢钠3g+100ml蒸馏水
→过滤→贮存于棕色瓶中,
室温下保存2∼3周
2、甲醇
嗜碱性点彩红细胞计数 null[方法]
按常规方法制血涂片→干→甲醇固定3min →
用碱性美蓝染色1 ∼ 2min , →水冲洗→干后油镜
检查→计数方法同网织红细胞
或 : ①计数50个视野内点彩红细胞数
②计数5个视野内红细胞数 50个视野内点彩红细胞数
点彩红细胞%=—————————————×100%
5个视野内红细胞总数×10
注意:必须选择红细胞分布均匀的区域计数
[参考值] ≤0.0003(0.03%) 嗜碱性点彩红细胞计数null[临床意义]
1、用于慢性重金属中毒的辅助诊断,如铅、汞、
铋、 银等。2、溶贫、巨幼贫、白血病、恶性肿瘤、硝基苯、苯
胺中毒,点彩红增高。 [与Retic的鉴别]
网织红 点彩红
RNA性质 正常 变性
染色方法 活体染色 常规染色
形态特点 网状颗粒, 粗细不等颗粒
临床意义 贫血诊断、治疗 重金属中毒嗜碱性点彩红细胞计数null谢谢