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血红蛋白PCV平均值网织红

2012-09-27 50页 ppt 1MB 104阅读

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血红蛋白PCV平均值网织红null三、血红蛋白测定三、血红蛋白测定(一)血红蛋白的结构(一)血红蛋白的结构血红蛋白结构: 由珠蛋白和亚铁血红素结合组成。null空间结构:每个血红蛋白有4条珠蛋白肽链, 每条肽链包裹1个亚铁血红素,形成具有 四级空间结构的四聚体。 null【分类】(每个珠蛋白分子含两条α 链和两条非α 链) 正常人:HbA ( α2β2) 占90% 成人主要血红蛋白; HbA2( α2δ2 ) 占2%-3% 成人次要血红蛋白 HbF ( α2γ2 ) 占2%以下 胎儿主要血红蛋白 null生...
血红蛋白PCV平均值网织红
null三、血红蛋白测定三、血红蛋白测定(一)血红蛋白的结构(一)血红蛋白的结构血红蛋白结构: 由珠蛋白和亚铁血红素结合组成。null空间结构:每个血红蛋白有4条珠蛋白肽链, 每条肽链包裹1个亚铁血红素,形成具有 四级空间结构的四聚体。 null【分类】(每个珠蛋白分子含两条α 链和两条非α 链) 正常人:HbA ( α2β2) 占90% 成人主要血红蛋白; HbA2( α2δ2 ) 占2%-3% 成人次要血红蛋白 HbF ( α2γ2 ) 占2%以下 胎儿主要血红蛋白 null生理情况下,99%Hb的铁呈Fe2+状态,称为还原血红蛋白,亚铁状态的Hb与氧结合称氧合血红蛋白(HbO2). 1%Hb的铁呈Fe3+状态,称为高铁血红蛋白(Hi)。 Hb的合成受激素的调节:Epo和雄激素。null注意事项:1. 如α-链或β-链合成障碍,使三种正常血红蛋白比例异常,即各型地中海贫血;如多肽链发生氨基酸置换、丢失、加长,称为血红蛋白病 。 2.病理情况下可出现硫化血红蛋白(SHb)。 (二)血红蛋白衍生物及其吸收光谱 (二)血红蛋白衍生物及其吸收光谱 1.氧合血红蛋白(oxyhemoglobin, HbO2):Hb与O2结合时形成。 2.还原血红蛋白(reduced hemoglobin, Hbred):未与O2结合时的Hb。 3.高铁血红蛋白(hemiglo -bin, Hi)或正铁血红蛋白(methemoglobin, Mhb): Fe 2+被氧化成Fe 3+。null4.碳氧血红蛋白(HbCO)、硫化血红蛋白(SHb):与O2结合的配位键被CO、S等占据。 5.氰化高铁血红蛋白(HiCN):Hi与CN-结合而成。波峰540nm,波谷504nm。正常情况下,血液中血红蛋白主要是HbO2和Hbred,以及少量HbCO和Hi。(三)血红蛋白测定方法(三)血红蛋白测定方法手工法:HiCN法SDS-Hb法AHD575法HiN3法血液仪法1、氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法1、氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法1)原理:在Hb转化液中,除SHb外,Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白,再与CN-结合,生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白(HiCN),吸收峰为λ540nm,毫摩尔消光系数为44 L·mmol-1 ·cm -1 。因此根据标本的吸光度,即可求得血红蛋白总量(不含SHb)。null2)器材: 分光光度计、移液管、微量吸管、试管等。 3)试剂:血红蛋白转化液(文齐液)成分如下 ①高铁氰化钾:使Hb转化成Hi ②氰化钾:使Hi形成HiCN ③无水磷酸二氢钾:防止混浊,调节pH值 ④TritonX100:非离子型表面活性剂,加速溶血,缩短转化时间,防止因血浆蛋白改变引起的混浊。 null4)操作: a. 取指血20ul,加到5ml血红蛋白转化液中,混匀,静置5分钟。 b. 用分光光度计比色。波长540nm,以空白转化液调零,测定吸光度“A”。null5)计算 ①状态下的计算 Hb(g/L)=A× ×251=A ×367.7 其中,A为测得的吸光度,64458为Hb的分子量, 251为测定时血液稀释倍数,44为HiCN的毫摩尔吸光系数,×1000为换算成摩尔吸光系数。6445844×1000null②非标准状态下的计算:求换算常数K ∑标准液标定Hb液浓度 (标准值) K= ----------------------------------------------- ∑本室测定标准液的“A” (测定值) 标本Hb g/L = 标本测定值A×K null举例:用不同浓度的Hb的标准品:50,100,150,200g/L测得的吸光度分别为0.13, 0.27, 0.41和0.54 。则K值为 K= = =371.75 若测定管吸光度为0.32,则测定管Hb浓度为 Hb(g/L)=0.32×371.75=118.96∑Hb∑A50+100+150+2000.13+0.27+0.41+0.54null6)结果报告 Hb g/L 7)参考值 成年男性:120-160 g/L 成年女性:110-150 g/L 新生儿: 170-200 g/L null贫血分级: 轻度:男性<120g/L,女性<110g/L 中度: <90g/L 重点: <60g/L 极重度:<30g/Lnull8)质量保证 废弃物:KCN为剧毒药品,要小心对待,实验完后要用次氯酸钠溶液处理后才能弃倒。 b. 器材及试剂:血红蛋白转化液不能贮存在塑料瓶中,否则CN-下降使结果偏低。 c. 标本:下列因素可引起Hb假性增高:脂血症、血液浓缩、白细胞>30×109/L,重症黄疸,严重的血管内溶血等。2、方法学评价2、方法学评价1)HiCN法:由国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐,并经WHO确认为血红蛋白测定的参考方法。 优点:①操作简单,结果稳定可靠,试剂容易保存 ②能测定除SHb以外的所有血红蛋白,并易 于建立质控。 null缺点:①不能测定SHb。 ②对HbCO转化太慢,需要100分钟。 ③高丙种球蛋白血症,变性Hb血症,高白细胞的血可出现混浊,按15g/L(pH7.2~7.5)甚至50g/L(pH6.7~6.9)加入氯化钠可防止,高浓度有核RBC引起的混浊不能防止。 ④KCN为剧毒,需妥善保存。2)SDS-Hb(十二烷基硫酸钠)法2)SDS-Hb(十二烷基硫酸钠)法优点:试剂无毒,结果准确,重复性好 缺点:①SDS纯度难保证; ②依赖HiCN法,间接得到结果; ③试剂可破坏WBC,不能与WBC同时共用标本进行血细胞计数的自动分析。3)叠氮高铁血红蛋白法(HiN3)3)叠氮高铁血红蛋白法(HiN3)优点:准确度、精密度较高 缺点:试剂仍有毒性,HbCO转化慢 本法与HiCN法相似4)碱羟血红蛋白法(AHD575)4)碱羟血红蛋白法(AHD575)优点:试剂简易,不含毒性,呈色稳定,准确性与精确性较高。 缺点:波峰位于575nm处,溶液中碱性较高,不适用于自动检测,HbF不能转化。5)CTAB法5)CTAB法优点:溶血性强且不破坏白细胞,适于血液分析仪检测。 缺点:精密度、准确度略低。沙利法为传统血红蛋白测定法,已淘汰。6)血液分析仪法6)血液分析仪法优点:简便、快速、多项。 缺点:①仪器型号不同,使用的溶血剂不同,形成的Hb衍生物不同。 ②某些溶血剂形成的Hb衍生物稳定性较差,因此要严格控制溶血剂的量及作用时间。 null③对具有抗溶血剂作用的疾病(肝病、低色素性贫血),溶血不完全而影响结果。 ④有些溶血剂内虽加入了KCN,但其衍生物并非HiCN,而是氰化血红蛋白,仪器需经过HiCN标准液校正后,才能进行Hb测定。 (四)Hb与RBC测定的临床意义(四)Hb与RBC测定的临床意义参考值 RBC Hb 男性 (4.0~5.5)×1012/L 120~160g/L 女性 (3.5~5.0)×1012/L 110~150g/L 新生儿 (6.0~7.0)×1012/L 170~200g/L >70岁男性 94.2~122.2g/L >70岁女性 86.5~111.8g/L(1)生理变化(1)生理变化1)年龄与性别 ①新生儿 ②6个月~2岁婴儿 ,生长发育迅速,血容量 造血原料不足,引起生理性贫血。 ③老年人 :对营养摄取、利用和造血功能减退,RBC、Hb比中青年人低。 ④男性>女性:雄激素null2)精神因素:情绪波动,使肾上腺素增多,RBC、Hb 3)气压:气压低(高山居民),红细胞代偿性 4)长期多次献血者,红细胞代偿 5)妊娠期 :妊娠期血容量明显 ,引起血液稀释,Hb常在100g/L以下,生理性贫血。(2)病理变化(2)病理变化1)RBC和Hb增多 指单位容积血液中红细胞数值及血红蛋白含量高于正常值高限。 男性 Hb >170g/L 女性 Hb >160g/L RBC >6.0×1012/L RBC >5.5×1012/Lnull①相对性增多:由于大量失水、血浆量下降而使血液浓缩所致,如呕吐、严重腹泻、大面积烧伤等。 ②绝对性增多:见于慢性心肺疾病,真性红细胞增多症。null2)红细胞和Hb减少:贫血 ①骨髓造血功能低下:如再障、白血病、恶性肿瘤 ②造血原料缺乏:如缺铁、叶酸、VB12等; ③红细胞破坏增加:如各种溶血性贫血; ④红细胞丢失过多:如急、慢性失血; ⑤促红细胞生成素减低症(肾性贫血)Hb测定与红细胞计数的临床意义相似,但对贫血 程度判断的准确性优于红细胞计数。 Hb含量与RBC数量的关系 Hb含量与RBC数量的关系 红细胞与血红蛋白的增减不一定成比例,如大细胞 性贫血患者的RBC往往较Hb减少显著;而小细胞性贫血患者则相反。 正色素性贫血:RBC、Hb成正比减少 低色素性贫血:RBC < Hb 高色素性贫血:RBC >Hbnull四、红细胞比容测定( PCV或HCT ) 比容又称压积,是指抗凝血, 在规定的条件下离心 沉淀后,压紧的红细胞所占全血体积的比值。 比积大小与RBC数量及大小有关(一)测定方法: 常用的有手工法和血液分析仪两类, 手工法用PCV表示(packed cell volume) 血液分析仪法用HCT表示下面介绍手工法常用的离心法的两种方法null1、温氏法 [原理] 将一定量抗凝血液注入温氏管, 经一定速度和时间离心沉淀后, 读取红细胞占全血的比值(L/L或%)[器材] (1)温氏管:管上刻有2种刻度,容积为1ml ①自下至上0~100mm刻度----测PCV ②对侧有自上而下的 0 ~ 100mm刻度---- 温氏法测红细胞沉降率。红细胞比容测定ⅼ温氏法null(2)离心机: 用水平式离心机,离心机相对离心力(RCF) 应达2264g, RCF(g) =1.118×10-5 ×有效离心半径(cm)×(每分钟转速)2 有效离力半径: 指从离心机的轴心至红细胞层中点的距(cm)。①有效离心半径在16cm时,相对离心力要达到 2264g,其转速应为3500转/分。②有效离心半径是22.5cm时,转速应用3000转/分。红细胞比容测定ⅼ温氏法null[试剂]: 干燥抗凝管,下列试剂任选一种: (1) 双草酸盐抗凝管: 草酸钾0.8g,+草酸铵1.2 g,加 蒸馏水至100ml→ 取2ml至小试管→800C以下烘干→可抗凝2ml血(2)EDTA-K23mg→可抗凝血2ml(3 )肝素0.2 mg→可抗凝2ml血红细胞比容测定ⅼ温氏法 null[操作] ①干燥EDTA-K2抗凝管或双草酸盐抗凝管+静脉血2ml, 立即混匀 →②将混匀血液用细长的吸管插入温氏试管管底, 注入血至“100”刻度→ 3000转/ 分离心30min →读数→③再离心10min →至红细胞柱不下降止 → 读取红细胞柱毫米数,除以100 即为每升血液红细胞体积的升数(升/升), 结果以后者为准。 或直接读数为PCV的 %红细胞比容测定ⅼ温氏法null离心后血液分五层]: 血浆层 淡黄色 血小板层 白色乳縻层 白细胞和有核红细胞层 灰红色 还原红细胞层 暗红色 含氧层红细胞 鲜红色 [结果报告] PCV: 0.△△L/L ; 或%(直接读mm数加%)红细胞比容测定ⅼ温氏法null[注意事项] ① 器材须清洁干燥,防止溶血。② 注入血液时,温氏管内不能有气泡 ③ 抗凝剂要用不改变RBC体积的抗凝剂,如肝素̀ 双草酸盐抗凝或EDTA,以免造成红细胞膨胀或皱缩 双草酸盐抗凝应在3h内做完。④ 若用斜角离心机,细胞沉淀为斜面,此时应读取 斜面中间刻度数。⑤ 若有溶血现象应加注明,特别是溶血性贫血病人。⑥ 静脉抽血时,刺入血管后,应立即解开压脉带, 防止血液浓缩红细胞比容测定ⅼ温氏法null⑦ 影响离心力的因素: 离心机有效半径不足 转速不足→ 病人红细胞增多 离心机负荷过大 使相对离心力↓ 此时应延长离心时间 或提高离心速度 红细胞比容测定ⅼ温氏法注意事项null2、微量离心法: [原理] 将一定量血液注入特制的肝素化毛细玻管中, 定速和定时离心沉淀后,→读取红细胞及全长度, 计算其比值即红细胞比容(L/L或%)[器材] ①经肝素处理的毛细玻管; ②高速离心机 ③专用读数尺; ④ 采血针、75%乙醇、棉球红细胞比容测定null[操作] ①毛细血管采血→ 用虹吸法充入经肝素处理的毛细玻 管的2/3(50mm)处) →②封口:向未吸血毛细玻 管端插入专用封口座封口 →③离心: 封端向外,放入专用水平式毛细管比积离心机, →以12000r /min高速离心5 min →④读数: 取出离心后的毛细玻管→专用读数板凹槽中 →移动滑尺刻度至还原红细胞层→读数 或用刻度尺分别测量红细胞层和全层长度, 计算其比值红细胞比容测定ⅼ微量离心法null[注意事项] ①毛细血管采血针刺要深,取第二滴血检验 ②封口要平,并封实,应深入毛细玻 管内2mm ③RCF以10000∼15000g为宜, 当Hct>0.5时应再离心 ④进行双份标本测定,其结果之差应<0.01红细胞比容测定ⅼ微量离心法null[方法学平价] 测定方法较多 (1)温氏法应用较久和普遍,其缺点是: ①沉淀不完全, 不能将RBC之间的血浆完全排出→ 结果偏高,温氏离心法以PCV表示 ②标本用量较多,费时 已逐渐被微量法所取代红细胞比容测定null(2)微量离心法: ①离心力大(RCF≥10000g), RBC之间殘留的血浆少, ②结果较温氏法低(平均低0.02), ③用血量小,简便,快速,被WHO推荐为首选方法(3)血液分析仪法以Hct表示, 提供Hct数据,是通过RBC计数和RBC体积测定 而间接计算出来的,避免了殘留血浆引起的误差 红细胞比容测定方法学平价null[参考值]: 男性 0.40~0.50 40 ~50% 女性 0.37~0.48 37~48% 1~ 3岁 0.35~0.47 35~47% 新生儿 0.47~0.67 47~67% [临床意义]: (1)、PCV增高: A) 生理性见于高原生活、剧烈运动、新生儿等。红细胞比容测定nullB) 病理性增高 ①见于各种原因所致的血液浓缩: 常作为脱水,烧伤病人的补液依据。 比积是掌握血液稀释程度的可靠指标。 ②继发性红细胞增多症:肺心病、先天性心 脏病③ 真性红细胞增症,可达80%。 (2)、红细胞比积降低:见于各种贫血和血液稀释。红细胞比容测定的临床意义null(3)、PCV是影响全血粘度的决定性因素之一。 PCV↑ 全血粘度↑ 高粘滞综合证 血流量↓组织缺氧 血栓形成, 血管阻塞,代谢紊乱,功能失调。(4)、PCV与其他血液流变学指标联合应用对血栓性疾病 的预测具有重要意义。(5)、PCV是计算红细胞三种平均值(MCV、MCH、 MCHC)的基础数据之一,用于贫血的形态分类。 红细胞比容测定的临床意义 五、 红细胞平均指数 红细胞平均指数包括:MCV 、MCH 、MCHC三种平均值 [要求]: 1、用同一份标本(采血部位,采血时间一致) 按Hct要求静脉采血2ml,用EDTA-Na2抗凝。 2、RBC、Hb应测2~3次,取平均值 3、Hct按标准离心。[注意]: 1、平均值的可靠性取决于原始数据的准确性。2、三种平均值不等于红细胞形态无改变,必须 结合血片形态观察,综合分析。 null[计算]: 1、平均红细胞容积(MCV): 指每个红细胞的平均体积,以飞升(fl) 为单位。 1L=10 15fl(um3) HCT MCV=-----------×10 15fl RBC null2、平均红细胞血红蛋白含量(MCH) 指每个RBC内所含Hb平均量,以皮克 (pg)为单位或微微克uug表示。 1g=1012 pg(uug). Hb(g/L) MCH=-----------------×1012 pg RBCnull3、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC) 即压积红细胞的血红蛋白浓度,以g/L 表示。 Hb(g/L) MCHC=------------------ HCT血液分析仪通过仪器计算得出三种平均值null [临床意义]:三种平均值常用作贫血的形态学分类。 贫血形态学分类 贫血分类 MCV(fl) MCH(pg) MCHC(g/L) 病 因 正 常 80—100 27—34 320—360 正细胞性 80--100 27—34 320--360 急性失血 白血病 溶血、再障 大细胞性 >100 >34 320--360 缺B12、叶酸 单纯小细 <80 <27 320--360 感染、中毒 胞性 急、慢性炎 症、尿毒症  小细胞低 <80 <27 <320 缺铁贫、 色素性 B6缺乏 慢性失血null六、红细胞体积分布宽度P25 (red blood cell volume distribution, RDW) RDW:反映周围血红细胞体积差异的参数, 通过变异系数(CV) 定量地表示红细胞体积 分布的离散程度。 为血液分析仪根据红细胞体积直方图导出来的 一个新参数.[方法学评价]: 对红细胞体积大小的评价, RDW优于血片对红细胞形态的观察, 更准确、更客观地反映血红细胞体积差异的程度null[临床意义]: 1、用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察: 缺铁贫(IDA): ①RDW值增大,早期其他参数如MCV 、MCH可正常。 ②铁剂治疗有效时RDW值一过性进一步增大, 随后 降至正常。 ③灵敏度达95%,但特异性不强,可作为筛选指标[参考值]: 成人≤15% (11.6%∼14.6%) 新生儿 男≤15.9% 女≤16.2% null2、对小细胞低色素性贫血的鉴别诊断: 缺铁贫(IDA)--→ RDW值增大。 轻型地中海贫血-- → RDW值正常null3、用于贫血的分类(Bassman MCV/RDW分类法) MCV RDW 分类 常见病 减低 正常 小细胞均一性 轻型地中海贫血 减低 增高 小细胞不均一性 IDA 正常 正细胞均一性 再障、白血病 正常 失血贫、慢性疾病  增高 正细胞不均一性 早期IDA 营养性贫血   正常 大细胞均一性 部分再障 增高 骨髓增生异常   增高 大细胞不均一性 巨幼贫 null七、网织红细胞计数 [网织红细胞] : ①是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之 间的过渡型细胞,属于未完全成熟的红细胞②无核,由于其胞浆中尚存在有嗜碱性物质(RNA) ,因而用煌焦油蓝染液进行活体染色后, 胞浆中可见有蓝绿色的网状结构,故名网织红细胞。③其能完成最后20%血红蛋白的合成, 即转为成 熟红细胞。 计数时任何没有核的有两个或更多的相当于核 糖粒RNA蓝染物质颗粒的红细胞均计为网织红。null[形态特点] 比成熟红细胞稍大,直径8.0~9.5cm。细胞内含有蓝色 颗粒或线条状网织结构,颗粒愈少愈成熟, 多分布于边缘。 [分型]: O型 花冠型 Ⅰ型 丝球形 Ⅱ型 网 型 Ⅲ型 破网型 Ⅳ型 点粒型 骨 髓 周 围 血null O型 花冠型 Ⅰ型 丝球形骨 髓null Ⅱ型 网 型 Ⅲ型 破网型 Ⅳ型 点粒型周 围 血null[器材] 1、Miller窥盘: 直19mm,厚1mm,圆形玻片 ,内含大小两个正方格, 二者面积比为9:1。2﹑缩微用具 Miller窥盘 3、显微镜 4、试管、玻片红Ret 仪器法:网织红细胞计数仪、血液分析仪法 计数方法有: 显微镜法、 下面介绍显微镜法 null[试剂] 下列试剂任选一种 1、新亚甲蓝溶液 : 新亚甲蓝0.5g 、草酸钾1.4g 、 氯化钠0.8g 蒸溜水加至100ml→过滤后贮存于棕色瓶中 此液为WHO所推荐,对Ret染色强,且稳定。 2、10g/L灿烂甲酚蓝(煌焦油蓝)酒精溶液染液: 1g煌焦油蓝+100ml 95%乙醇→碾磨溶解→ 过滤后贮存于棕色瓶中3、煌焦油蓝溶液 : 1g煌焦油蓝 + 枸橼酸钠0.4g + 氯化钠0.8g+蒸溜水 加至100ml→过滤后贮存于棕色瓶中网织红细胞计数ⅼ显微镜法null[方法] 显微镜法又有试管法和玻片法2种: 1、试管法操作 小试管内加染液2D+血2D混匀 37度水浴15min, 取出混匀, 制成薄血膜片。 待干 油镜计数1000个红细胞中的网织红细胞数。 1000细胞=(Rbc+Ret)网织红细胞计数ⅼ显微镜法null网织红细胞计数ⅼ显微镜法2、玻片法操作 ①于玻片一端加10g/L煌焦油蓝酒精液1~2D, 干燥(反复查-3次)备用 ②取等量血于已干燥染料膜上→ 用推片角搅动混匀后染 3~5分钟→ 推成薄血膜→ 油镜计数方法同上 (计数1000个红细胞中的网织红细胞数)。 null[计算] ①所计网织红细胞除以1000即为网织红细胞分数数。 所计数的网织红细胞 网织红细胞分数数= 1000网织红细胞计数ⅼ显微镜法②网织红细胞除以10即为百分率数。 所计数的网织红细胞 网织红细胞百分率= (%) 10③网织红细胞绝对数(×109/L)=RBC/L× 网织红细胞分数数null3、油镜计数网织红细胞可用 Miller窥盘计数: (1)、Miller窥盘: 直径19mm,厚1mm, 内含大小两个正方格, 二者面积比为9:1。 放于显微镜目镜内 大方格内计数网织红细胞 小方格内计数红细胞Ret红null(2)、操作: 在目镜中装入Miller窥盘→ 选择 红细胞分布均匀处: →①转油镜在Miller窥盘的小方格中(A), 计数红细胞数, ②并计数大方格(B)内网织红细胞数。(3) 计算 大方格(B格)内网织红细胞数 Ret% = ----------------------------------------×100% 小方格(A格)内红细胞数×9(4) 红细胞计数范围可按质控要求计数。网织红细胞计数ⅼ显微镜法null 控制Retic计数CV=10%需要镜检的RBC数 Ret(%) Miller窥盘小方格内镜 相当镜检RBC数 RBC数 1~2 1000 9000 3~5 500 4500 6~10 200 1800 11~25 100 900 控制Retic计数CV≤15%需要镜检的RBC数 Ret(%) Miller窥盘小方格内镜 相当镜检RBC数 RBC数 1~2 444 4000 3~5 222 2000 >6 110 1000null例:①计数1个视野小方格中的红细胞总数是120个, 同时计数的大方格中的网织红细胞总数是16个: 其Retic 的百分率为: 16 Retie%=-------------×100 %= 1.5% 120×9 ②当小方格内计数的红细胞>111个时,即相当于观察 了1000个红细胞,在此过程中观察到的网织红细胞 数的总数除以10即为Retic数占红细胞中的百分率。 例:小方格内计数的红细胞达到111个时,已计数到12个 Ret 12 Retie%=-------------×100 %= 1.2% 10null(4) 注意事项 ① Miller窥盘法是用1/9的面积推断整个大方格内 RBC 数,故细胞分布要均匀, ②对压上线、右线、右下角RBC和Retic不计数。 ③增加计数量,计数相当4000个红细胞内的Retic数, 可使精密度提高一倍。 网织红细胞计数ⅼ显微镜法null[Ret的其他参数及计算] (1)血液分析仪法的参数: ①网织红细胞平均体积(MCVr) ②网织红细胞血红蛋白分布宽度(HDWr) ③网织红细胞血红蛋白浓度(HCR) ④网织红细胞平均血红蛋白浓度(MCHCr) ⑤ LFR(低荧光率)、 MFR(中荧光率)、 HFR(高荧光率) ⑥网织红细胞成熟指数 (R M I) R M I=(M F R + H F R)/ L F R ×100 %网织红细胞计数ⅼnull  (2)网织红细胞生成指数 (R P I): 代表网织红的生成相当于正常人的多少倍 病人被测Hct 1 RPI= Ret% ×------------- × 0.45(正常Hct) Ret成熟天数 正常人Ret为1%, Hct为0.45,则RPI为1 严重贫血 Ret为15%, Hct为0.25, Ret成熟时间为2天 Hct 升/升 0.45 0.35 0.25 0.15 成熟时间(天) 1 1.5 2 2.5网织红细胞计数ⅼ其他参数null[质量控制] 1、显微镜法: 网织红细胞计数的误差大,影响因素多: ①形态识别的差异; ②涂片质量的好坏; ③计数细胞的多少; ④计数的方法 目前首选Miller窥盘法计数网织红细胞, 证明可降低标准误, 95%可信限为:Ret2 Sp(标准误) Ret(1 – Ret) 95%可信限为:Ret2  N Ret网织红细胞分数数; N为所数红细胞数null例:计数1000个红细胞,网织红细胞为0.04, 则Sp= Ret(1– Ret) = 0.04(1-0.04) N 1000 = 0.006 95%可信限 = Ret  2 Sp = 0.04  2 ×0.006 = 0.04  0.0122、仪器法:可计数10000 ~5000个红细胞,误差缩小, 但形态识别能力差, 如出现Howell-Jolly小体、有核红、巨血小板, 则可见假阳性网织红细胞计数的质量控制null[方法学评价] (1)显微镜计数法: ①为主要方法, a)但效率低,精密度低,重复性差,CV达20%以上。b)且受红细胞浓度影响,红细胞减少时Ret%偏高。c)临床应用价值逊于绝对值计数法。d)使用Miller窥盘,可使精密度控制在CV≤15%, 并缩 短工作时间。 但前提是涂片中红细胞必须均匀分布, 否则结果不准。网织红细胞计数ⅼe)能直接观察形态 ,试管法为参考方法null ②染色剂: a、新亚甲蓝染液为WHO推荐,但棕色瓶中储存只能稳 定3周。  b、灿烂甲酚蓝染液易产生沉淀,成本较高。  c、中性红染液价廉、易溶解、可稳定一年, 突出优点是不受变性珠蛋白小体的干扰。③实验温度: 无论何种染色均应在37℃下进行, 否则检出率明显减低。网织红细胞计数ⅼ方法学评价null(2)、流式细胞计数仪法: ①效率高(60个标本/h);精密度高CV≤5%, 重复性好。②可同时报告相对值、绝对值、荧光强度, 具很高的应用价值。③但价格昂贵,尚未普及。网织红细胞计数ⅼ方法学评价(3)血液分析仪法: 最新型的血液分析仪,采用了流式细胞技术, 有网织红细胞计数功能,且具多参数null[参考值] (1)显微镜计数法: 相对值: 国外成人、儿童:0.005~ 0.015(0.5% ~ 1.5%) 新生儿:0.02 ~ 0.06(2% ~ 6%) 国内成人:0.8 %~ 2.0% 平均1.64% 绝对值:(25~75)×109 /L  网织红细胞计数ⅼ参考值null(2)流式细胞计数仪法: 20~40岁 相对值:0.7±0.5 (%) 绝对值:43.6±19.0(×109/L) 荧光强度:反映Retic中RNA含量, 荧光率越高含RNA越多,示Retic越幼稚。分成三度:LFR低荧光率(低荧光强度) MFR中荧光率(中荧光强度) HFR高荧光率(高荧光强度) 周围血中所占%比为: LFR > MFR > HFR 网织红细胞计数ⅼ参考值null网织红细胞计数ⅼ参考值(3)血液分析仪法: Ret LFR(%) MFR(%) HFR(%) MCVr(fl) RDWr(%) HDWr(pg) X 1 86.1 11.3 2.6 111.8 17.75 33.4 S 0.41 4.77 4.14 1.73 5.3 2.35 5.2 成熟指数(RPI): 1 null[临床意义] (一)评价骨髓造血功能: 1、Retic增高、MFR 、 HFR网织红比率增高 表示骨髓红细胞生成旺盛: (1)最常见于溶血性贫血(可高达20% ~ 50%) 绝对数>100 ×109 /L 网织红细胞计数ⅼ(2)其次为急性失血性贫血5 ~ 7天达高峰, 2周后恢复。 (3)营养性巨幼贫和缺铁贫, 仅轻度增加/正常/减少。 (4)Ret持续上升,常提示慢性失血,如消化道溃疡null 2、Retic减少、MFR 、 HFR网织红比率减少, LFR比率 相对增高,表示骨髓红细胞生成减弱:(1)主要见于再障,临床上将贫血病人Retic绝对值 <15×109/L作为急性再障诊断指标。 (2)化学治疗,放疗所致骨髓抑制。网织红细胞计数ⅼ临床意义null(二)治疗效果观察: 1、增生性贫血和营养性巨幼贫: 经相应冶疗后1-2日网织红即开始增加, 1周左右达最高峰。 1周后红细胞及血红蛋白上升。2、再障治疗有效时, Retic渐渐回升可轻微增高。 无效时, Retic不增高网织红细胞计数ⅼ临床意义null3、促红细胞生成素治疗有效时,网织红上升, 荧光强度增高。 4、Retic成熟指数(RPI): (1)可用于观察骨髓移植术后造血功能的重建情况。 优于中性粒细胞绝对值。 (2)RPI增高见于溶贫 、ITP 、急性白血病、 红白血病、真性红细胞增多症、再障、 RPI降低见于骨髓衰竭或无效造血网织红细胞计数ⅼ临床意义null5、荧光强度MFR + HFR值 称未成熟的网织红细胞比率(I R F), 可作为骨髓移植术后 ,造血功能恢复早期指标。 比白细胞早1.5天, 比网织红计数早3天。 6、监测化学治疗和放射治疗对骨髓的抑制情况: 幼稚Retic早期变化是反映骨髓受抑制及功能恢复的 早期指标。 幼稚Retic↓反映骨髓受抑制。 网织红细胞计数ⅼ临床意义null 八 嗜碱性点彩红细胞计数 [点彩红细胞] ①是不完全成熟红细胞浆中含有残存的变性沉 淀的RNA颗粒。②经碱性美蓝染色后,可见染成深蓝色的颗粒。③在瑞氏染色中可见谈红色胞浆中含有粗细不等 的蓝黑色颗粒。null[试剂】 1、碱性美蓝液: 美蓝0.5g+碳酸氢钠3g+100ml蒸馏水 →过滤→贮存于棕色瓶中, 室温下保存2∼3周 2、甲醇 嗜碱性点彩红细胞计数 null[方法] 按常规方法制血涂片→干→甲醇固定3min → 用碱性美蓝染色1 ∼ 2min , →水冲洗→干后油镜 检查→计数方法同网织红细胞 或 : ①计数50个视野内点彩红细胞数 ②计数5个视野内红细胞数 50个视野内点彩红细胞数 点彩红细胞%=—————————————×100% 5个视野内红细胞总数×10 注意:必须选择红细胞分布均匀的区域计数 [参考值] ≤0.0003(0.03%) 嗜碱性点彩红细胞计数null[临床意义] 1、用于慢性重金属中毒的辅助诊断,如铅、汞、 铋、 银等。2、溶贫、巨幼贫、白血病、恶性肿瘤、硝基苯、苯 胺中毒,点彩红增高。    [与Retic的鉴别] 网织红 点彩红 RNA性质 正常 变性 染色方法 活体染色 常规染色 形态特点 网状颗粒, 粗细不等颗粒 临床意义 贫血诊断、治疗 重金属中毒嗜碱性点彩红细胞计数null谢谢
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