地衣红染色- 包涵体- 乙肝抗原
目的:病毒体积微小,只有电子显微镜才能见到。病毒只能在宿主细胞内繁殖因此可称为寄生虫。宿主细胞内的病毒微粒称为病毒包含体,可在光镜下观察到。
HBsAg (乙肝表面抗原) 常出现在肝细胞胞质内。Kupffer 细胞也可显示抗原。
如果很多肝细胞被感染。抗原以微粒形式广泛散布、贯穿于细胞质中或集中在细胞质外围至肝窦之间,这就称为毛玻璃样。HBsAg在单个细胞内出现时,在于细胞质内呈椭圆形、圆形或不规则颗粒,特别是在核周的位置。这个程序也可染铜结合蛋白。
原理:地衣红染包涵体呈毛玻璃样。
对照:肝炎阳性的肝(肝炎携带者)。已知的铜对照。
固定:固定良好的组织。
技术:4-5m石蜡切片
设备:染色缸,蒸馏水清洗玻璃器皿。
试剂:
高猛酸钾
高猛酸钾Potassium permanganate 0.15 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
3% 硫酸sulfuric acid 5.0 ml
使用前配制,用后丢弃。
警告:刺激性,避免接触和吸入。
5% 草酸
草酸Oxalic acid 5.0 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,标签,保存期1年。
警告:刺激性,避免接触和吸入。
0.5% 高碘酸
高碘酸Periodic acid 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,标签,保存期1年。
警告:刺激性,避免接触和吸入。
地衣红:
地衣红,自然Orcein, natural 1.0 gm
70% 酒精alcohol 100.0 ml
盐酸Hydrochloric acid 1.0 ml
pH 值必须在1 至 2,溶液成熟至少需要48 hours,使用前过滤。保存期6个月。
警告:易燃性,刺激性。
分化液:
70%酒精 alcohol 100.0 ml
盐酸Hydrochloric acid 1.0 ml
新鲜配制,用后丢弃。
警告:易燃性,刺激性,腐蚀性。
安全:戴丁腈手套和白大衣,戴微过滤口罩。避免接触和吸入。
高猛酸钾:对皮肤和眼睛刺激,摄入可引起严重的胃肠反应。强氧化剂。
草酸:能引起严重的眼睛、皮肤和粘膜灼伤。吸入和摄入毒性。影响靶器官为肾血管和心血管系统,反复接触能引起皮炎。腐蚀性。
硫酸:吸入烟雾有毒性。影响靶器官为皮肤、呼吸系统、生殖系统及胎儿系统。对皮肤、眼睛和呼吸道有刺激性。当使用硫酸时应使用警告标志。慢慢加入溶解。
盐酸:对皮肤、眼睛和呼吸道有剧烈的刺激性,影响靶器官为皮肤、眼睛、呼吸系统、生殖系统及胎儿系统。腐蚀性。
程序:
1. 脱蜡至蒸馏水。
2. 高猛酸钾溶液10 minutes。
3. 流水冲洗。
4. 5% 草酸漂白,直至无色。
5. 流水冲洗,蒸馏水稍洗。
6. 0.5%高碘酸5 minutes。
7. 流水冲洗,蒸馏水稍洗。
8. *地衣红液 微波低火30-45 sec,放置30 minutes,镜检,如果黑色不够返回再染。
9. 70%酒精稍洗。
10.如果需要时可用分化液分化,镜检。
11. 70%酒精稍洗。
12. 脱水、透明和封固。D
* 传统方法:地衣红液室温 4-16 hours。
结果:
HBsAg、弹性纤维:黑褐色-黑紫色
铜结合蛋白:黑紫色
背景:浅褐-浅紫色
参考文献:
Sheehan D, Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd Ed, pp
247-248, Battelle Press Ohio
Crookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the Histopathology
Laboratory, 2nd ED, 1991, Anatech
Luna, L, Histopathologic Methods, 1st Ed, 1992, pp 295-296, American
Histolabs Inc.
Luna, L, Histo-Logic, 1978, Vol. VIII. No. 4. Recommended Procedure for
Demonstrating Hepatic B Antigen in Parafin Sections, LAB-TEK Div.
Miles Lab. Inc.
程序卡
地衣红染色- 包涵体- 乙肝抗原
对照:肝炎阳性的肝(肝炎携带者)。已知的铜对照。
技术:4-5m石蜡切片
1. 脱蜡至蒸馏水。
2. 高猛酸钾溶液10 minutes。
3. 流水冲洗。
4. 5% 草酸漂白,直至无色。
5. 流水冲洗,蒸馏水稍洗。
6. 0.5%高碘酸5 minutes。
7. 流水冲洗,蒸馏水稍洗。
8. *地衣红液 微波低火30-45 sec,放置30 minutes,镜检,如果黑色不够返回再染。
9. 70%酒精稍洗。
10.如果需要时可用分化液分化,镜检。
11. 70%酒精稍洗。
12. 脱水、透明和封固。D
* 传统方法:地衣红液室温 4-16 hours。
结果:
HBsAg、弹性纤维:黑褐色-黑紫色
铜结合蛋白:黑紫色
背景:浅褐-浅紫色
高猛酸钾
高猛酸钾Potassium permanganate 0.15 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
3% 硫酸sulfuric acid 5.0 ml
使用前配制,用后丢弃。
警告:刺激性,避免接触和吸入。
5% 草酸
草酸Oxalic acid 5.0 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,标签,保存期1年。
警告:刺激性,避免接触和吸入。
0.5% 高碘酸
高碘酸Periodic acid 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,标签,保存期1年。
警告:刺激性,避免接触和吸入。
地衣红:
地衣红,自然Orcein, natural 1.0 gm
70% 酒精alcohol 100.0 ml
盐酸Hydrochloric acid 1.0 ml
pH 值必须在1 至 2,溶液成熟至少需要48 hours,使用前过滤。保存期6个月。
警告:易燃性,刺激性。
分化液:
70%酒精 alcohol 100.0 ml
盐酸Hydrochloric acid 1.0 ml
新鲜配制,用后丢弃。
警告:易燃性,刺激性,腐蚀性。
5% 草酸
草酸Oxalic acid 5.0 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,标签,保存期1年。
警告:刺激性,避免接触和吸入。
日期:
技师:
使用限期:
地衣红:
地衣红,自然Orcein, natural 1.0 gm
70% 酒精alcohol 100.0 ml
盐酸Hydrochloric acid 1.0 ml
pH 值必须在1 至 2,溶液成熟至少需要48 hours,使用前过滤。保存期6个月。
警告:易燃性,刺激性。
日期:
技师:
使用限期: