包埋VE和Vc的卵磷指脂质体的合成

—9第4期日用化学工业包埋Ve和Vc的卵磷脂脂质体的合成／r—t北油院1026型00)塑(北豪‘摘要本文介绍了以卵磷脂为合成脂质体的原料，将vt和、分别包埋在脂质体内部的合成方{击．用透射电子显徽镜表证了超声波{击和乳灌{击合成的脂质体的形态结构，比较了两种方法合成的脂质体对Vt和vc包埋率的影响，选择了乳掖法合成脂质体时卵碑脂的最佳浓度，讨论了稳定剂及其浓度对脂质体分散灌的影响。．关键词堕星生合成_{}和d·’．Vc，哩，匕AbstracttThispaperintrodLICedansystheticmethodforIIIi盯oenpsu1atj0nVEandVcinlipo-8omeswithlecithinassysthetic]iposomemateria1．Thestructureo／llposomemadebytraoundaademulsionmethodwaSdeterminedbytransmlssi011ehct~onmieragraph、Alsotheel'feetoftwokindso／l~posomesonVzandvcmieroencapsuhtionrateWaScompered，theoptimumconcentrationofleithinwhlchusedintheemulsionmethod珊8selected，finallytheeffecto／墨tabilizeranditsconcemTetion011liposomedispersionsolutionWaSdiscaussed．Keywords：liposome．1ecithin，synthesis0引言脂质体作为化妆品使用主要有以下几方面的优点：(1)脂质体具有有效的促皮渗透作用}(2)脂质体可以有效地保护皮肤活性物质不被氧化和风干I(3)具有对皮肤活性物质和水份的缓慢释放作用，能长时间保持皮肤湿润。脂质体以其特殊的性能进入化妆品领域正越来越引起人们的重视。包埋v和v的卵磷脂脂质体分散液作为化妆品使用，并不需要将脂质体分离开来，因而可以极大地降低生产成本0。1实驻部分1、1主要原料卵磷脂(蛋黄提取物)，生化级，北京海淀生化制品厂V(生育酚)，医用，北京制药厂V(L一抗坏血酸)，二氯甲烷，分析纯，北京化学试剂厂丙二醇，分析纯，北京化学试剂厂乙醇，分析纯，北京化学试剂厂1．2主要仪器CSF-IA型超声波发生仪，上海超声波仪器厂sephadexG-50色谱柱，自制胶体磨，天津市微电机厂2JCL22—4型1．3实验合成(1)超声波法。将Vz、vc、卵磷脂和去离子水的混合液用N：气保护，于56℃的水浴中恒温15分钟，将超声波发生仪的探头接触液体并超声作用2O分钟，直至液体变为透明，即得包埋Ve和vc的卵磷脂脂质体分散液。(2)乳液法]。将Ve和卵磷脂溶于二氯甲烷中，溶于去离子水中。取5miVc水溶液倒入1OralV和卵磷脂的二氯甲烷溶液中，高速搅拌作用，并用胶体磨作用制成水／油型乳液。将水／油型乳液倒入lOOml去离子水中，缓慢匀速搅拌，并逐步升温，在2小时内由室温逐步升到56℃，其问蒸发掉二氯甲烷。得到(水／油)／水型乳液，即为包埋Ve和V的卵磷脂脂质体分散液。1．4性能测试(1)结构表征。脂质体分散液(统指包埋和vc的卵磷脂脂质体分散液)滴于透射维普资讯http://www.cqvip.com8(总173)日用化学工业电镜底板的铜网上制成样品，拍得透射电镜照片。(2)包埋率；脂质体分散液通过SephadexG-50色谱柱后，可将VE、Vc和脂质体分离开，收集脂质体部分，测定Ve和Vc的紫外吸收峰值确定Vt和Vc的浓度，进而确定V和Vc的包埋率。(3)热稳定性：加入脂质体稳定剂丙二醇或丙二醇和乙醇混合液，分别测定样品在一12_c和40℃各24小时后是否分层或有沉淀物来判断其热稳定性。2结果与讨论2，1脂质体形态结构表征图1和图2分别是超声波法和乳液法合成的卵磷脂脂质体的透射电镜照片。由图可知，合成的脂质体是一种球体结构，超声波法合成的脂质体直径为1500~5000A以上。图1超声被合成的包埋VE和Vc的卵礴脂脂质体透射电镜厢片(X20．0o0原目鳍去{)2．2乳液法合成脂质体最佳条件的选择乳液法是一种新的台成脂质体的方法，工艺条件要求比较严格，但可以大量生产，比较实用。(1)卵磷脂浓度对vt包埋率的影响脂质体的包埋率为：包埋率一篙X100乳液法合成脂质体关键要选择适当的卵磷脂浓度，卵磷脂浓度太大，难以形成稳定的图2腔体法合成的包埋VE和Vc的卵礴脂脂质悼透射电镜照片(×z0．0o0原匿缩去÷)脂质体，而卵磷脂浓度太小又难以达到较高的包埋率和高浓度的脂质体分散液卵磷脂分子的长碳链对ve分子有一定的亲合性，因而能使得v牢固地包埋在脂质体的双层中，但ve和卵磷脂分子比超过一定数值，合成脂质体就较困难。图3为卵磷脂浓度和Vt包埋率的关系。由图3可知，、的包埋率随卵磷脂浓度的增加而上升，但当卵磷脂浓度达到0．125M以后，Ve的包埋率不再上升。并且由实验知道，当卵磷脂浓度超过0，15M以后，形成脂质体的难度逐渐增大。选择卵磷脂的最佳浓度为0．125M臣3卵磷唐浓度对VE包埋辜的蟛响(2)温度的影响脂质体双分子层由凝胶相转变为液晶相●维普资讯http://www.cqvip.com第4期日用化学工业9(总174)的温度为相变温度。不同原料的脂质体其相变温度不同。卵磷脂脂质体的相变温度为50℃左右。合成脂质体时温度必须达到其相转变温度以上，这样才能使脂质体双分子层排列紧密，使脂质体的稳定性增强。但如果温度太高，使卵磷脂分子分解。并使vE分解。另一个温度考虑的因素为二氯甲烷。在合成脂质体过程中，必须将二氯甲烷除去．因此温度要高于其沸点，二氯甲烷沸点为4O℃。最终选择合成脂质体的最后温度为55℃。(水／油)／水型乳液(即脂质体分散液)合成中升温速度的快慢也是一个重要的因素。二氯甲烷的挥发是在升温过程中逐步进行的。升温速率太快。二氯甲烷迅速挥发，脂质体的双分子层来不及排列整齐，因而难以形成稳定的脂质体，因此需要一个缓慢的升温过程实验选择在3小时内由室温逐步升至5S℃。2．3超声波法和乳液法与包埋率的关系脂质体的最大包埋率是指在实验条件下能形成稳定的脂质体时的包埋率。不同的合成脂质体原料对不同的物质包埋率也不同。由表l和表2可知，超声波法脂质体对vE的最大包埋率为10，乳液法为15。超声波法合成的脂质体直径较小，一般为单层小泡，其包埋率较低。乳液法合成的脂质体直径较大，包埋率也高。表1超声波法对ve和vc包埋率的影响包埋宰v：eVcBI10l12l15slsisf稳定性好I好i较差{程差好I好I差I不镌舍或表2乳液法对V和V包埋率曲影响包蠼率jVlvc％}loI15l18l20}3sleJ稳定性I好{好I较差I不能舍成I好好I差l不能音戚两种方法对vE的包埋率无影响。在这里起决定作用的已不是脂质体的合成方法，而是Vc水溶液的酸性，因为在酸性太高的水液中不能形成脂质体。由表可知5的vc包埋率是能形成稳定脂质体的最高浓度。通过实验可以看出，脂质体对V的包埋不影响对v的包埋，反之亦然，因此，对vE和vc的混合包埋率即为对二者各自包埋率之和。2．4稳定剂及其浓度对脂质体稳定性的影响脂质体稳定剂较多，实验选用丙二醇和乙醇作为脂质体稳定剂，主要是因为二者常作为化妆品的组分或防腐剂使用。由表3和表4可以知道．丙二醇作为稳定剂使用，其浓度选择范围为1O～2O。丙二醇和乙醇混合使用，浓度选择范围为7～12表3丙二醇旅度对脂质体舟散液稳定性的影响丙二醇敢度，w0sI斗dz5一l2c冷冻小时辅有沉淀。好蚓有沉淀4o'c贮藏2‘小时辅有沉淀硝有沉淀}子}有沉淀表4乙醇和丙二薛混合液一对脂质体分散液稳定性的影响*指丙=薛和乙爵敢厦吾为5O3结论(1)由透射电镜照片可以看出，超声波法合成的包埋Ve和Vc的卵磷脂脂质体直径较乳液法合成的脂质体直径小。(2)超声波法合成的卵磷脂脂质体对V的最大包埋率为10，乳液法为15。二者对、rc的最大包埋率均为S。(3)乳液法合成脂质体时卵磷脂最佳浓度为0．125mo1(4)作为脂质体稳定剂使用，丙二醇的最佳浓度范围为1O～2O，丙二醇和乙醇混合液的最佳浓度范围为7～l2。(下转第6页)维普资讯http://www.cqvip.com日用化学工业r。]表1N一援丁基聚氨基葡糖抑菌效果不同浓度(mg／m1)N一投丁基试验菌株!茎兰!!!!!堑!Z4689盘黄色葡萄球菌9819091革兰氏化齄性链球菌zz94100阳性曹冀啊球菌10100白色盒球菌7354BB890革兰氏埃希氏大脑杆菌z055B09z肿炎克蕾自氏杆菌3B6283100阴性菌燕感嗜血杆菌5457077来自乙酰丙酸的一c00H在红外光谱上显示出1700cm的特征吸收峰。在制备工艺中我们将市售的聚氨基葡糖重新进行脱乙酰基处理，以提高其脱乙酰基度，目的在于在N一上最大限度地取代上羧丁基。这一亲水基团可以提高其溶解性。2．2工艺过程中要求反应温和，如室温、聚氨基葡糖反应浓度低(10g／L)、乙酰丙酸与葡糖胺摩尔比控制在1．5，反应时间短(30rain)。这些条件均有利于保护多糖键不被破坏，维持大分子聚合物。多糖的分子量与其粘度有关，分子量越大粘度越高，两者呈线性关系。目前测定多糖粘度的方法一般有两种：运动粘度测定和特性粘度测定。因为后者果用国外文献，国际上公认，故我们采用特性粘度测定。化妆品级透明质酸特性粘度为600～]200ml／g，N一羧丁基聚氨基葡糖为910ml／g，达到可以取代前者的质量标准。2．3目前化妆品中主要起保湿作用的透明质酸是由葡糖胺和葡糖醛酸的双糖重复聚合而成的一种高聚物。以此为参照物，在保湿性，特性粘度及分子量上与其比较，证实两者理化性质相近。在化妆品中，N一羧丁基聚氨基葡糖可以替代透明质酸。不仅如此，N一羧丁基聚氨基葡糖不合蛋白质，无异味，不影响化妆品(膏霜乳液)乳化。尤其重要的是N一羧丁基聚氨基葡糖具有很强的抑菌作用，这是透明质酸所不具备的，它可以有效地抑制皮肤、口腔牙齿中的致病菌，其效果与抗菌素相近。N一羧丁基聚氨基葡糖是一种新的修饰聚氨基葡糖产品，作为功能性组分在化妆品、药物、食品和化工等领域有着广阔的开发应用前景。参考文献E1]Mira，MetmllIm．)．B、Ma~om6t．1980(2)323E2]LaurentTCetal,Bicchem．Bioph~．Aeta1960．4zl476[33阍豪篡等r中国医药工韭杂惠199z．23(B)；337[I]ryOH．etallLBi。1．Cl~m1．1951．193I265[5]Washh*gton．JAISu~epfibilhyT哪IAgdilution．967～971。Manualor"CllnIMicrolfilogy4thed(I-接9页)参’考[1]Junsnger．E．，Holland．E．I．，Bouwstra，A．．c∞m吐j＆Tc~letries，1991，45．108[2]}IaMIAtutertscblager．Cosmetics＆Toiietrles·1990．89．105文献[3]EuropmPatent0461333A1]K¨∞，M⋯J口0lI，ScienceandTechnology．1988，9．1[5]周荣才，集玉增等，功能高分子学报。1990，(3)127维普资讯http://www.cqvip.com