Leber遗传性视神经病变患者的线粒体DNA检测及中医治疗分析

逦 生医至 年 1月第29卷第 1期 Hebei J TCM，January 2007，Vol 29，No．1 -跟 捕 话lll⋯ 兰毒毒誉 毒誊： 誊 萎 ，， Leber遗传性视神经病变患者的线粒体 DNA 及中医治疗分析※ 张铭连 石慧君 常永业 解世朋 庞朝善 毛爱玲 (河北省邢台市眼科医院中医眼科，河北 邢台 054001) 51 【摘 要】 目的 分析中国人Leber遗传性视神经病变(LHON)3个原发致病基因突变的特征及中医辨 证治疗的疗效。方法 对 81例 LHON患者分别用异源双链 一单链构像多态性(HA—SSCP)、限制性片段长度 多态性(RFLP)、突变特异性引物聚合酶链反应(MSP—PCR)~ DNA测序等方法检测其mtDNA11778、14484、3460 位点的基因突变情况，并进行中医辨证治疗。结果 81例患者(男59例，女 22例)中，11778位点突变71例， 占87．65％，14484位点突变8例，占9．88％，3460位点突变2例，占2．47％。中医辨证为肝经郁热型 58例 ，肝 郁肾虚型 14例，肝肾阴虚型9例。结论 中国人 LHON患者 mtDNA3个原发致病位点突变中，以 11778位点突 变为主，14484次之，3460最少。其发病与中医肝肾的关系最为密切，中医药治疗有一定的疗效。 【关键词】 DNA，线粒体；点突变；视神经萎缩，遗传性；聚合酶链反应；辨证论治 【中图分类号】R3 ．3；R3~)4；R4~6．9；R774．630．衢；f 【文献标识码】A 【文章编号】1032一 9(卸7Ⅻ一 1一∞ Detection of DNA in mitochondria and trealment of Leber’S Hereditary ZHANG Minglian，sm Huij~，CHANG }；bngye，et a1．Department ofOphthalmology， Hospital ofX／ngta／，X／ngta／054001 【Abstract】 Objective To analyze the characteristics of three primarily virulence genes mutation of Chinese Leber’ S Hereditary Optic Neuropathy(LHON)and the effect of differentiation of symptoms and signs．Metlm~ Mutation status of mitochondria DNA 1 1778，14484，3460 in patients with LHON were measured by HA-SSCP，RFLP，MSP-PCR and DNA sequencing．Results In all patients 87．65％ was 11 778 site mutation．9．88％ was 14484 site mutation and 2．47％ was 3460 site mutation．The liver meridian stagnated heat type was 58 cases，stagnation of liver-QI renal deficiency type Was 14 cases and hepatic and renal yin deficiency type Was 9 cases．Conc．．hlsion In three primarily virulence genes mutation of Chinese LHON，I1778 site mutation Was primary，14484 site mutation was secondary，3460 site mutation Was least．Th e onset of LHON Was related to hepatonephric Traditional Chinese Medicine． 【Key words】 Optic Neuropathy；DNA；Mitochondria；Differentiation of symptoms and si of TCM I ber遗传性视神经病变(kber’shereditary optic neu— ropathv，LHON)是常见的一种线粒体 DNA突变导致的遗传 性致盲性视神经疾病，现为急性或亚急性中心视力减 退，双眼同时发病，或先后发病，男性发病率高于女性，是 青年人致盲的主要原因之一 ，目前尚无有效治疗方法。 临床上一部分患者无家族史或家族史不清，仅有视神经 损害，往往很难确诊，线粒体DNA的位点突变目前认为是 LHON的特异性病征，其检测为临床早期诊断提供了重要 依据。2001—12—20o6—04，我们对 81例Leber遗传性视 神经病变患者进行线粒体 DNA检测和中医辨证治疗，现 ※ 基金项 目：河北省科学技 术研 究与发展计划项 目(编号 03270196D一71) 作者简介：张铭连(1962一)，男，主任中医师，学士。主要从事L千 医、中西医结合眼科临床研究。 将结果分析如下。 l 资料与方法 1．1 一般资料 8l例LHON患者均系我院住院患者，其中 男59例，女22例，男女比例为2．68：1；有家族史者64例，无 家族史17例；年龄最小7岁，最大42岁，平均 16．86岁，其 中7～l2岁12例，13—18岁55例，19—42岁14例；病程<1 个月6例，1—3个月44例，>3个月31例； ：J：发病71 例，先后发病 10例。所有患者均进行常规全身检 ，税力 、 裂隙灯、眼底、视野检查。Octopus一1O1全自动视野检查，表 现为中心暗点者113只眼，旁中心暗点 1只眼，中心相对暗 点 1只眼，广泛性视野损害 21只眼，未能查视野 24只眼， 正常视野 2只眼。28例行视觉诱发电位(P—VEP)检查，表 现为Pi 波潜伏期延长和振幅值降低者52只眼，Pl∞波潜伏 期正常而振幅值降低者2只眼，图形熄灭2只眼。lO例患 者行头颅 扫描未见异常。6例行 脚 检查未见异常。 维普资讯 http://www.cqvip.com 52 河北中医2007年 1月第29卷第 1期 Hebei J TCM，January 2007，Vol 29，No．1 25例荧光素眼底血管造影(FFA)检查，未见明显异常。眼 底表现为视盘充血，毛细血管充盈，弯曲79只跟，正常眼底 l2只眼，视盘颢侧色淡 45只眼，视盘色苍白26只眼。 1．2 中医分型 根据患者全身症状和舌脉象，参考眼底 表现，采用全身辨证与局部辨病相结合的方法，将 8l例 Leber遗传性视神经病变患者分为3型。 1．2．1 肝经郁热型(58例) 发病早期，眼底视盘色红， 盘周血管扩张，全身伴情志抑郁 ，胸闷易怒，舌尖红，苔薄 黄，脉弦或弦数 1．2．2 肝郁肾虚型(14例) 病至中晚期，眼底视盘色淡 或苍白，全身伴腰膝酸软，精神抑郁 ，脉弦细。 1．2．3 肝肾阴虚型(9例) 病至晚期 ，眼底视盘色淡或 苍白，伴五心烦热，潮热盗汗，男子遗精，舌质红，苔少，脉 细数。 1．3 病例选择 ①双眼同时或先后在青春期发病， 呈急性或亚急性视力下降。②视野有中心或旁中心暗 点，P—VEP表现 PI 波潜伏期延长和振幅值降低。③眼 底早期视盘正常或轻度充血 、水肿、毛细血管扩张，晚期 颢侧色淡或苍白。④符合上述特征有阳性家族史；或原 因不明的患者；或经积极治疗无明显效果者均进行线粒 体 DNA检测。检测阳性者纳入观察范围。 1．4 检测方法 首先详细询问患者的家族史，进行视力、 裂隙灯、眼底检查、视野及常规全身检查。征得知情同意 后抽取患者外周静脉血，利用血液滤纸法，邮寄至中山大 学中山眼科中心分子遗传室。将标本进行全血直接裂解 和微量 DNA提取，采用0)3种原发致病位点聚合酶链反 应(PCR)扩增，用常规酚氯仿方法，从患者和正常人外周 血中提取 DNA，进行 PCR扩增；②突变特异性引物 PCR检 测；③异源双链 一单链构像多态性分析(SSCP)；④经单链 构像多态性分析异常条带做 DNA测序，片段经纯化后，由 自动测序仪测序。检测患者 mtDNA11778、14484、3460位 点的基因突变情况。 1．5 治疗方法 1．5．1 中医辨证治疗 1．5．1．1 肝经郁热型 治宜清肝解郁。方用银公逍遥散 (自拟方)。药物组成：金银花、蒲公英各 15 g，当归、白芍 药、白术、茯苓 、银柴胡、牡丹皮、栀子、荆芥、防风各 10 g， 甘草 6 g。 1．5．1．2 肾郁肾虚型 治宜疏肝解郁 ，滋阴明日：方用 舒肝解郁益阴汤(《中医眼科临床实践》) 。药物组成： 当归、白芍药、茯苓、白术、丹参、银柴胡各 10 g，熟地黄、山 药、生地黄、枸杞子各 12 g，焦神曲6 g，磁石 22 g，栀子、升 麻、五味子各6 g，甘草3 g。 1．5．1．3 肝肾阴虚型 治宜滋补肝肾，益阴明 日。方用 明目地黄汤(《审视瑶函》)加味。药物组成：生地黄、熟地 黄各15 g，山药、山茱萸、茯苓、泽泻、牡丹皮、当归、五味 子、银柴胡、枸杞子、菊花、谷精草各 10 g。 1．5．2 配合用药 维生素类药 口服，无家族史者早期激 素 、抗生素治疗，中后期或有家族史者予营养神经改善血 循环药物 ，如胞二磷胆碱、三磷酸腺苷(ATP)、辅酶 A、碟 脉灵、葛根素、脑蛋白水解物等。 1．5．3 疗程 10日为 1个疗程，3个疗程观察疗效。 2 结 果 2．1 mtDNA突变检测结果 8l例Leber遗传性视神经病 变 mtDNA突变中，1l778位点突变 7l例，占 87．65％；14484 位点突变8例，占9．88％；346O位点突变2例，占2．47％。 2．2 治疗前后视力比较 见表 1。 表 1 治疗前后视力比较 眼数 治疗前 治疗后 2．3 随访 66例患者经平均 26个月随访，66只眼视力 提高 1—2行，62只眼视力保持不变，4只眼视力下降 2～3行。 3 讨 论 1871年由德国眼科医生 Leber首先描述 了一种以双 眼中心视力急性或亚急性下降，多累及青年男性为特征 的遗传性眼病，故命名为 Leber遗传性视神经病变。1988 年 Wallace等 首先线粒体 DNA第 1 1778核苷酸位点 突变可引起 LHON。Hwang等 统计 435例视神经疾病患 者 ，72例(17％)是 LHON。国内韦企平 报告母系中确有 发病者的37例LHON患者中 11778位点突变者33例，占 89．2％；14484位点突变者 3例，占 8．1％。无家族史的疑 似病例及病因不明的视神经疾病 82例患者中 11778位点 突变 26例，占31．7％。郭向明等报告 1l778位点突变占 92．9％，14484位点突变占5．7％，346O位点突变占1．4％。 本研究统计球后视神经炎339例，Leber病66例，占 l9．47％，对其中有家族史64例和无家族史而怀疑为 Leb— er病 34例共 98例患者进 行基因检测，8l例 阳性 ，占 82．65％。有家族史的 64例基因检测均为阳性，34例无家 族史而怀疑为 LHON，经基因检测 l7例阳性，占 50％。81 例mtDNA突变患者中，1l778位点突变7l例，占87．65％， 14484位点突变8例，占9．88％，346O位点突变 2例，占 2．47％。本组病例 14484位点和346O位点突变略高于有 关报道。 本病以男性发病者 居多，左炜 报告男 女 比例为 6．5：1，韦企平 报告男女比例为5．6：1。本组病例男性的 发病率低于有关报道，而女性发病率高于有关报道，男 59 例，占72．84％，女 22例 ，占26．16％，男女比例为 2．68：1， Hotta等 研究了29个 LHON家系共 334例患者，发现有2 个家系无任何 mtDNA位点变异。本组病例涉及 79个家 系 8l例患者均有位点突变。 对无家族史的 17例视神经炎患者在行 mtDNA检测 前，于发病早期给予糖皮质激素冲击治疗 l0—14日，均无 明显治疗效果 ，与未用糖皮质激素治疗的 HLON患者效果 相同。提示本病糖皮质激素冲击治疗无效。因此 ，在临 床工作中除对原因不明视神经炎或视神经萎缩患者进行 详细的家族史调查及视力、眼底 、视野 、视觉诱发 电位等 检查外，应及早进行 mtDNA基因检测，以避免重复多项检 维普资讯 http://www.cqvip.com 河北中医2007年 1月第 29卷第 1期 He J TCM，January 2007，Vol 29，No．1 查或给予患者不必要的可能有害的治疗。 Leber遗传性视神经病变属于中医眼科青盲范畴。中 医学认为，肝 开窍于 日，经脉上连 目系。“肝受血 能 视”，“肝和则 目能辨五色矣”。“肾为先天之本”，肾主藏 精，精能生髓 ，脑为髓海 ，日系内通于脑。肝肾同源，精血 相互化生。因此，肝‘ 与日系的关系最为密切，正如张景 岳所谓“肝肾之气充则神采光明”。本组 8l例 Leber遗传 性视神经病变患者经采用全身辨证与局部辨病相结合的 方法，分为肝经郁热，肝郁肾虚、肝肾阴虚型3型，且其早 期多表现为肝经郁热，中晚期多表现为肝郁‘肾虚或肝‘肾 阴虚型，进一步说明本病与肝肾的功能有着密切的关系。 在治疗上应注重解肝郁，养肝血，滋肾阴，尤其在本病的 中晚期，视神经已发生萎缩，应以滋补肝肾为主。今后我 们将进一步通过现代科学技术研究具有滋补肝肾功能的 中药治疗 LHON的确切机理。 参考文献 [1] Leber T．Uber herebitare und congerntal Sehenervenleiden J ． Graef’s Arch Ophthalmol，1871，17：249—291 [2] 庞赞襄 ．中医眼科临床实践[M]．石家庄：河北人民出版丰十， 53 1979：l(】6 l3 J al1a(-e DC，Singh( ，[a~ltⅥr，H(deg JA，SehurrTG，Lazza AMS． et a1．Mito~ hondrial I)NA mutation associated with Leber’s heredit． ary『1p¨ t’ll(、un)pathy J ．Science 1988，242：1427—1430 l4 J Hwang JM，Lee JJ，Kim MK．Statistics of oplic neumpathy in Seoul Municipal Bovamae H(rspital ill Koma[J J．Neuro-Ophthalmology， 2O0o．24：489—495 [5] 韦企平，孙艳红，宫晓红，等．中国人 Leber遗传性视神经病 变线粒体 DNA突变的主要类型和l临床特征[J]．中华眼底病 杂志，2004，20(2)：78—80 6] 郭向明，贾小云，肖学珊，等．· 国人 Leber遗传性视神经病 变线粒体 DNA突变频谱[J]．中华眼底病杂志，2003，19(5)： 288—291 [7] 左炜，陈金卯，胡世兴．Leber遗传性视神经病变 30例l临床分 析[J]．中华眼底病杂志，2004，20(1)：44 [8] Hotta Y，Fujiki K，Ha) akawa M，et a1．Clinical~mures of Japa- nese Leber’S her~titary optic neuropathy th 1 1778 mutation of mitochondri'a!．DNA[J J．Jpn J Ophthalmol，1995，39：96—108 (收稿 日期：2006—06—10) ” ●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·■ ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·● ⋯ ‘●⋯ ‘●⋯ ·● ⋯ ·●⋯ ·●⋯ ‘● ⋯ ·● ·临床报道· 赛肤润配合艾灸预防褥疮 35例 石 燕 (江苏省无锡市中医院肿瘤科，江苏 无锡 214001) 【关键词】 褥疮；赛肤润；艾灸；预防与控制 【中图分类号】 R 632．1；R 245 【文献标识码】 A 【文章编号】 1002—2619(2007)01—053—0l 褥疮也称压力性溃疡，是长期卧床患者的常见并发 症。我科所收治的晚期肿瘤患者 80％为恶液质 ，患者存 在体质差 、卧床时间长的问题．如何预防褥疮成为工 作的一大难题。2005—03--2005—09，笔者采用赛肤润配 合艾灸方法预防35例褥疮高危患者，现报告如下。 1 资料与方法 1．1 一般资料 本组 35例均为我院肿瘤或住院患者，男 l9例 ，女 l7冽；平均年龄 68岁 ；住院时间 l0—25日。所 有患者均卧床时间长 ，自理能力受限，入院时受压皮肤发 红．经翻身、按摩能缓解，无水疱、溃烂、水肿。 1．2 治疗方法 患者取舒适卧位，将艾条点燃后对准身 体受压部位温和灸 ，距离皮肤 3—4 cm，使患者感到局部温 热舒适，以局部出现红晕、皮肤温度不超过 45~C为宜。每 个部位灸 l0 15 min，每 日 1 2次。然后将赛肤润搽剂 (法国优格 医疗 用品公 司生 产，国药管械 [进]2002第 1660683号)喷涂于艾灸部位并轻轻按摩1 min，配合定期 作者简介：石燕(1982一)，女，护士。从事中医护理工作。 翻身。 2 结 果 35例患者住院期间均未发生褥疮。 3 讨 论 褥疮是由于身体局部组织长期受到压力、摩擦力、剪 切力的作用，使血液循环障碍，持续缺血缺氧，营养不良导 致局部组织坏死。肿瘤晚期患者皮肤组织萎缩，弹性较 差，皮脂腺及汗腺分泌少，皮肤干燥 、多皱褶，对冷、热 、痛 、 触压等感觉功能降低。同时，患者自理能力受限，长时间 卧床，皮肤常受汗液、大小便浸渍，极易发生褥疮。局部受 压过久常导致在皮肤出现变化之前，肌肉及脂肪组织已处 于坏死状态 ，发生融解并向皮肤表面破溃。艾灸能改善局 部组织血液循环，提高皮肤的抗菌能力，配合使用赛肤润 搽剂，能在局部形成亚油酸保护膜，限制皮下水分流失，减 少体液 、排泄物的浸渍。躁动患者应避免使用艾灸，防止 烫伤和引起其它不良反应。此外，I临床工作中不能忽视加 强营养、保持皮肤清洁、定期翻身 、使用气垫床等其它预防 手段。 (收稿 日期：2006—06—16) 维普资讯 http://www.cqvip.com