伊曲康唑分散片人体药动学及生物等效性研究

科 学论坛 I■ 伊曲康唑分散片人体药动学及生物等效性研究 吴春华 胥德福 王 玫 王 洋 (1．哈尔滨同一堂药业有限公司 150025； 2．哈尔滨仁皇药业有限公司 150001； 3．哈尔滨同一堂药业有限公司 150025) [摘 要]目的：研究伊曲康唑分散片受试制剂与参比制剂在健康志愿者体内的药代动力学和生物等效性。方法：2O名健康男性受试者随机双周期交叉单剂 量E1服伊曲康唑分散片受试制剂和参比制剂200rag，采用液相色谱一质谱一质谱联用测定不同时刻血浆中伊曲康唑的药物浓度，求出主要药物动力学参数。 [关键词]伊曲康唑 药代动力学 生物等效性 HPLC／MS／MS． 中图分类号：K826．15 文献标识码：A 文章编号：1009-914X(2012)08-0104—0l 伊曲康唑为三唑类抗真菌药，具有广谱活性和良好的耐受性。主要用于念 珠菌性阴道炎、花斑癣、皮肤癣菌病如足底部癣、手掌部癣、口腔念珠菌病、 真菌性角膜炎、甲真菌病以及系统性真菌病等。本试验对伊曲康唑分散片试 验制剂及参比制剂进行了生物利用度研究，评价其生物等效性及药动学，为临 床合理用药提供试验依据。 1材料与方法 1．1 药品、试剂与仪器 药品：受试制剂：伊曲康唑分散片，每片含伊曲康唑100mg，哈尔滨三联药 业有限公司，批号050401；参 比制剂：斯皮仁诺，伊曲康唑胶囊，每粒含伊 曲康 唑 100mg，西安杨森制药有限公司，批号 050202139) 试剂：伊曲康唑对照品(含量99．6％，由哈尔滨三联药业有限公司提供)；内 标物为盐酸苯海拉明，购自中国药品生物制品检定所t甲醇和乙睛为色谱纯 ，购 自德国Merck公司，甲酸为分析纯，购自美国Tedia公司。 仪器：美国Thermo Finnigan TSQ Quantum Ultra型三重四级杆串联 质谱仪，配备电喷雾离子源(ESI源)及Xcalibur 1．4数据采集系统和Lcquan 定量处理软件，均为美国Thermo Finnigan公司生产；LC-10Advp输液泵， 日本岛津公司。 1 2血浆样品的分析方法 血浆样品的处理 ：取血浆 1OOul，分别加入 100 ul甲醇，100 ul内标溶液 (100ng／ml苯海拉明)和200ul乙睛，涡流混合Imin，离心5 min，分取上清夜， 取 20ul进行 HPLC／MS／MS。 色谱条件：色谱柱：Phenonmennex Cl8柱(4．6inln×150ram，5um)；流 动相 ：乙睛：水：甲酸(80：20：o．2)；流速：o．6mL／mint柱温 25。 质谱条件：电喷雾离子源(ESI源)；源喷射电压 3．8kv；加热毛细管温度为 320℃；鞘气(N2)压力35Arb；辅助气(N2)流量5Arb；碰撞气(Ar)压力1． 2mTorr；碰撞诱导解离(CID)电压分别为 35eV(伊曲康唑)和 25eV(内标苯海拉 明)；正离子方式检测，扫描方式为选择反应监测(SRM)，用于定量分析的离子 反应分别为m／z705—392，432(伊曲康唑)和m／z256一m／z167(内标苯海拉 明)；扫描时间为 0．3s。 1 3分析方法确证 方法的选择性：分别取6名受试者的空白血浆100ul置1．5ml塑料离心管 中，除不加内标外，按 “血浆样品的处理”依法操作，进样20ul，得色谱图，将一 定浓度的溶液和内标溶液加入空白血浆中，依同法操作，得色谱图，其中伊 曲康唑的保留时间为4．27rain，内标苯海拉明的保留时间为3．47min；取健康 受试者给药后收集的血浆样品，依同法操作，的色谱图。结果表明，空白血浆中 内源性物质不干扰伊曲康唑及内标苯海拉明的测定。 标准曲线制备：用空白血浆将伊曲康唑标准储备液稀释成 1．00、2．50、8． o0、25．0、8O．0、200，500、1000 lag／mL的样品，按 “血浆样品的处理” 依法操作，以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用 加权最4,--乘法进行回归运算，求线f生回归方程y=1．242 x 10 4_9．014×10一 ，伊曲康唑的线性范围为 1．00-1000ng／ml。 取空白血浆100uL，加入伊曲康唑1．00mg／uL标准溶液100uL，配制成相 当于伊曲康唑血浆浓度为 1．00ng／ml的样品，该样品在方法确证第二天进行 6样本分析，并根据当日标准曲线计算每一样本测定浓度，求得该浓度下伊曲 LC／MS／MS法测定血浆中伊曲康唑的提取回收率 阳 腱 矬 正 象 讯 发 iig．Ii¨ 网 怀 皿，最讯 厦 ng／miJ !．5O 80．0 900 l00 国}I复率 (％ 95 7 i00．7 92．8 86．4 94，2 93．7 94．0 92．2 94．9 92．9 9 ．2 84．0 91．1 95．3 96．6 84．0 9O．7 99．0 95．9 86．0 87．3 98．2 90 5 89．2 样品效 6 6 6 § 平均值 (ng／m1) 92．5 96．6 94 2 87．0 标准差 (ng／M) 3．1 3 1 2 2 3．2 104 l科技博 览 康唑的日内精密度(RSD)为7．9％；相对偏差(RE)为0．03％。结果表明LC／MS／ MS法测定血浆中伊曲康唑的定量下限可达 1．00ng／ml。 方法的精密度与准确度：取空白血浆100uL，按 “标准曲线的制备”项下 的方法制备低、中、高三个浓度，6样本，连续测定三天，求得本法的精密度与 准确度。 血浆样品提取回收率：取空白血浆100 ul，按 “标准曲线的制备”项下的 方法制备低、中、高三个浓度的样品，每一浓度进行6样本分析。同时另取空 白血浆 100ul，除不加标准系列溶液和内标外，按 “血浆样品的处理”项下操 作，向获得的全部上清液中加入血浆应浓度的标准溶液和内标各100ul，涡流混 合，进样分析，获得相应峰面积。以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算 提取回收率。见下表：三个浓度血浆样品提取回收率分别为92．5％、96．6％和 94．2％。 2 4数据处理 (1)药代动力学统计数据计算 采用梯形法计算AUC 值和AUCo~值；以半对数作图法，由消除相的浓 度点计算Ke和t ，2；T⋯ 和C 采用实测值。CL／F D／AUc。一 (D为给药剂 量200rag)；Vd／F=(CL／F)／K ；按下式计算受试制剂伊曲康唑分散片的相对生 物利用度(F)： F=AUCf1 一 H受试制剂)／AUC0 一 t{参比制剂)×100％ (2)生物等效性评价 对主要药动学参数对数转换后进行方差分析，并进一步采用双单侧t检验 和(1—2 a)置信区间法进行生物等效性评价，其中T 采用非参数检验法。如 受试制剂的AUco—t的90％置信区间为参比制剂相应参数的80％～125％范 围内，且受试制剂的C⋯ 的 90％置信区间为参 比制剂相应参数的70％～143％ 范围内，即可判断两制剂生物等效。 3结果分析 2O名受试者 口服含伊曲康唑 200rag的受试制剂和参比制剂后，获得如下 结果：血浆中伊曲康唑的Tmax分别为4．55±0．83和4．25±1．02h，Cmax分 别为 170．7±70．8和 155．5±73．3ng／ml，tl／2分别为 19．3±4．6和20．4 l1．4h；用梯形计算，AUCO—t分别为2385±i28l和2257±l168ng／ml， AUCO-。。分别为2496±1334和2371±1207ng／m1．以AUC0-t计算．伊曲 康唑分散片的相对生物利用度平均为l12．5±39．2％。 对主要药动学参数对数转换后进行方差分析，并进一步采用双单侧t检验 和(1—2 a)置信区间法进行生物等效性评价，其中采用非参数检验法。结果表 明：伊曲康唑的AUco—m和Cmax均拒绝生物不等效假设。受试制剂中，伊 曲康唑AUC0一t的90％置信区间为参比制剂相应参数的93．6～l21．6％， Cmax的90％置信区间为参 比制剂相应参数的 101．6～122．7％，Tmax无显著 性性差异。 4讨论 本试验方法回收率为92．5％-96．6％ ，日内及日间精密度(RSD)均小于 l5％ ，表明本试验建立的人血浆中伊曲康唑浓度的测定方法准确性强、重现 性好，标准曲线在 1．00～1000 ng／ml浓度范围内线性关系良好，符合伊曲 康唑的人体药代动力学及生物利用度研究的要求。 本试验20名健康受试者单剂量口服受试制剂和参比制剂200 mg后血浆 中伊曲康唑的浓度及主要药动学参数如Cmax、AUC、Tmax、tl／ 2经对 数转换后的受试制剂的AUCO—t 90％置信区闻在参比制剂的93．6％～l21． 6％范围，受试制剂的Cmax在参比制剂的10t．6％／～122．7％范围，Tmax经 非参数法检验，不同制剂间差异无显著性，说明受试制剂和参比制剂在人体内 的药动学过程相似，两制剂具有生物等效性。 参考文献 [1】Srivatsan V，Dasgupta AK，Kale P，et a1．Simultaneous determi— nation of itraconazole and hydroxyitraconzole in human plasma by high—performance liquid chromatography．J Chromatogr A，2004；1031： 307-313． 【2】中华人民共和国药典．二部．200年版．北京：化学工业出版社，2005．附 录 l73-176． 【3]钟大放．以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题．药物 分析杂志，l996；16：343-346．