10交叉配血试验 （凝聚胺法）

东莞常平医院 血库 文件编号： DGCPH-BK-SOP-10 交叉配血试验 （凝聚胺法） 版序：2005-1 页码：第1 页，共4 页 [原理] 凝聚胺试验是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间非免疫性的凝集，让已有抗体（IgG）反应的红细胞间的距离缩短。距离缩短后更能引起已反应的抗体和别的红细胞产生反应形成免疫性的凝集。而由凝聚胺所引起的非免疫性红细胞凝集反应可被后来加入的复悬液所中和而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，为阳性反应。如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。交叉配血试验是在盐水介质的基础上加入凝聚胺，检测供患之间是否相合，患者血清（浆）中是否含有具临床意义的红细胞异体抗体。 [试剂组成] 1，洁净试管，离心机，显微镜。 2，0.85% 氯化钠溶液：准确称取氯化钠（AR）8.5 g，用蒸馏水溶解并定容至 1000 ml。 试剂启用后，有效期为：二周。 3，凝聚胺试剂 *1 低离子介质溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2钠及稳定剂。 *2 凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。 *3 复悬液：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。 *4 阳性对照血清：含抗D血清，氯化钠及稳定剂。 4， 抗人IgG 血清。 [试剂保存和稳定性] 1． 凝聚胺试剂须保存在2-25℃。 2． 有效期内可使用。 3． 抗人IgG血清低温冰箱保存。复溶后放2—4℃冰箱保存。 东莞常平医院 血库 文件编号： DGCPH-BK-SOP-10 交叉配血试验 （凝聚胺法） 版序：2005-1 页码：第2 页，共4 页 [标本收集和准备] 1． 抽取受血者静脉血3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用EDTA-K2抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。 以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。 2． 2% 红细胞悬液： 用生理盐水洗涤红细胞3次。 根据下表进行红细胞悬液的配制。 悬液浓度（%） 压积红细胞（滴） 盐水（滴） ------------------------------------------------------------------ 2 1 2ml(40) 5 1 0.8ml(16) ------------------------------------------------------------------ [操作] 1． 取出3支试管分别标记主，次及对照测试： 主测管：加入病人血清（浆）2滴，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴， 次测管：加入供血者血清（浆）2滴，再加入病人3-5%红细胞悬液1滴， 对照管：加入2滴*4阳性对照血清，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴。 2． 各加入*1低离子介质溶液0.6ml，轻轻混匀，于室温下静置1分钟。 3． 再滴入2滴*2凝聚胺溶液，轻轻混匀，于室温下静置15秒。 4． 3400rpm离心1分钟，然后把上清液倒掉，管底保留大约0.1ml的液体。 5． 目测红细胞有无变成凝块，如果没有凝块，则必须重做，（请看注意事项6）。重做后仍然没有凝集现象出现，可能试剂失效。 6． 各滴入2滴*3复悬液，并轻轻混匀，观察结果。若为凝聚胺引起的非免疫性凝集，应该在1分钟内散开；若是异体抗体所引起的免疫性凝集，则不会散开。 7． 倒在玻片上用显微镜观察有无凝集。如有凝集反应，表示不合，此供血者的血液不适合病人使用；如无凝集反应，表示供血者的血液适合病人输注。 东莞常平医院 血库 文件编号： DGCPH-BK-SOP-10 交叉配血试验 （凝聚胺法） 版序：2005-1 页码：第3 页，共4 页 如果想进一步检测Anti-K抗体，则必须继续做辅助性的抗球蛋白试验，步骤如下： 8． 再滴入1滴*3复悬液。 9． 用生理盐水洗红细胞3—5次，并把最后一次上清液完全倒干。 10．滴入2滴Anti-human IgG血清，并混匀。 11．3400rpm离心1分钟。 12．观察有无凝集反应，如果有凝集反应，表示有Anti-K抗体，则必须进一步做抗体冲出试验，供血者的血液不适合病人使用。如果没有凝集反应，为了确保输血的安全性，须再各添加1滴已知致敏性红细胞至所有没有凝集的试管中，混匀，3400rpm离心1分钟。正常应有2+反应。如果没有凝集反应，可能是假阴性，辅助性抗球蛋白试验必须重做。 [结果判断] 1，ABO同型配血，主侧和次侧均无溶血及凝集表示无输血禁忌，可以输血。 2，如急需输血但一时无同型血液，作异型配血时（指O型血输给A，B或AB型，或A，B型血输给AB型时），主侧无溶血及凝集，但次侧必然有凝集或溶血。 [质量控制与附注] 1． 试剂超过有效期或有污染现象出现，即不可使用，必须更换。 2． 检验人员必须熟悉操作步骤，尤其是凝聚胺所引起的凝集反应，更要特别注意。 3． 中国人极少有Anti-K抗体，但其他人种比例较高，尤其是白种人，所以，当病人是其他人种时，为求安全起见，加做辅助性抗球蛋白试验。 4． 加做辅助性抗球蛋白试验是为了增加检测Anti-K抗体的敏感度，对检测其他的抗体无帮助。所以，除非想进一步检测Anti-K抗体，否则不须做到辅助性抗球蛋白试验。 5． 在冬天气温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清（浆）中可能含有寒冷凝集素等因子而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，请再滴入2滴*3复悬液，将试管立即置入37 C水浴中轻轻混匀，并在一分钟内观察结果。 东莞常平医院 血库 文件编号： DGCPH-BK-SOP-10 交叉配血试验 （凝聚胺法） 版序：2005-1 页码：第4 页，共4 页 6． 如果不凝集，可能是标本中含有肝素。如洗肾病人的标本或其他干扰存在，此时需多加2-4滴*2凝聚胺溶液以中和肝素或干扰因子。 7．0.85% 氯化钠溶液启用时，及时贴上启用时间；超期的溶液要及时更换。使用过程中，怀疑污染到溶液时或配血结果可疑时，必须更新该溶液。 8．受血者标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。2%红细胞悬液要求准确，必要时用生理盐水洗涤红细胞后重新配制。 9．进行交叉配血前逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D）血型，正确无误时可进行交叉配血。 10．操作过程中，①必须先排好试管，并做好标记；②每进行一步操作，必须进行一次核对。 11．结果判断必须先肉眼观察，再进行显微镜观察。注意观察弱凝集和排除非特异性凝集。 12．交叉配血试验中发现有不配合时，首先应考虑受血者和供血者的ABO血型和Rh(D)血型定型是否错误，必要时进行抗体筛检。其次，应注意有无特异性同种抗体，特异性未知的同种抗体存在，或者患者的血清在室温37℃或抗球蛋白血清中凝集所有的其他红细胞，造成交叉配血的困难，应进一步作有关试验进行鉴定。 13．两人值班时，交叉配血试验由两人互相核对；一人值班时，操作完毕后自己复核，并填写配血试验结果。（按“交叉配血核对”进行）。 14．各供血者间需进行交叉配血；已经输注的血液不足24 小时的，供血者间也需进行交叉配血。 15．交叉配血后的所标本加盖后，冰箱保存不少于7 天。