27睾酮

东莞常平医院 免疫实验室 文件编号： DGCPH-IMN-SOP-02-27 睾酮 版序：2005-1 页码：第1 页，共4 页 用途： 用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的睾酮含量。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys2010免疫测定分析仪。 概述： 雄激素睾酮的分子量为288D。在男性睾酮几乎全由睾丸的间质细胞合成，并由LH调节其分泌，受垂体-下丘脑负反馈机制的影响。睾酮促进男性第二性征的发育，维持前列腺和精囊的功能。血循环中的睾酮绝大多数与载体蛋白质结合（SHBG=性激素结合球蛋白）。女性的卵巢可产生少量睾酮。生理水平的雄激素对妇女没有特殊的作用。雄激素含量升高可引起女子男性化。检测女性体内睾酮含量有助于诊断雄激素综合征（AGS）、多囊性卵巢。当怀疑卵巢肿瘤、肾上腺肿瘤、肾上腺发育不良或卵巢功能不足时，也可检测睾酮。检测男性体内睾酮含量可用于诊断睾酮产生不足的疾病，如性腺发育不足、雌激素治疗、染色体异常（如Klinefelter综合征）和肝硬化。Elecsys睾酮测定方法采用竞争法原理和一种睾酮特异的单克隆抗体。被ANS （8-anilino-1-naphthalene sulfonic acid）和炔诺孕酮释放的内源性睾酮与钌标记的睾酮衍生物竞争生物素化的抗睾酮单克隆抗体上的结合位点。 原理： 采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。 · 第1步：50µl标本与生物素化的抗睾酮单克隆抗体和钌（Ru）标记的睾酮衍生物混匀。一部分抗体的结合位点与标本中的待测物结合（其数量取决于标本中待测物的浓度），一部分则与钌标记的半抗原结合，形成各自的免疫复合物。 · 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 · 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 ·检测结果由机器自动从曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条由从试剂条 试剂： M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力470ng生物素/ml粒子。含防腐剂。 R1：生物素化的抗睾酮单克隆抗体（灰盖），1瓶，8ml。浓度55ng/ml；磷酸缓冲液，40mmol/l，pH7.0。含防腐剂。 R2：钌标记的睾酮多肽（黑盖），1瓶，8ml。浓度3ng/ml；释放试剂ANS/炔诺孕酮；磷酸缓冲液，40mmol/l，pH7.0。含防腐剂。 东莞常平医院 免疫实验室 文件编号： DGCPH-IMN-SOP-02-27 睾酮 版序：2005-1 页码：第2 页，共4 页 储存和稳定性： 存放在2－8 度，切莫倒置。 未开封，可稳定至标明的保质期。 开封后，2－8 度12周； 放在Elecsys2010上，8周；（室温20－25 度；开盖时间累计不超过20小时）。 标本采集和准备： 血清：按标准常规方法采集。 血浆：肝素锂、钠、铵；EDTA-K3；氟化钠/草酸钾抗凝均可。如采用柠檬酸钠抗凝，结果应+10%进行纠正。标本在2－8度可稳定一周，-20度可稳定6个月。只可冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。不可以使用加热灭活的血清。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。 检测步骤： 提供的材料： 货号：11776061，100人份的Elecsys睾酮试剂盒包含： · M 链霉亲和素包被的微粒 · R1 生物素化的抗睾酮单克隆抗体 · R2 钌标记的睾酮多肽 需要的材料（未提供）： · Elecsys睾酮定标液（CalSet）货号1776088 Elecsys睾酮定标液II（CalSetII）货号03005658 · Elecsys通用质控品（PreciControl）货号11731416 · Elecsys通用稀释液货号1732277 · Elecsys、2010分析仪 · Elecsys系统缓冲液（ProCell）货号11662988 · Elecsys 测量池清洗液（CleanCell）货号11662970 · Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 · Elecsys 系统清洗液支架（Adapter for SysClean) ）货号11933159 · Elecsys 2010反应杯（Assay Cup) 货号11706802 · Elecsys 2010吸样头（Assay Tip) 货号11706799 · Elecsys 系统清洗液（SysClean） 货号11298500 方法： 按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。 东莞常平医院 免疫实验室 文件编号： DGCPH-IMN-SOP-02-27 睾酮 版序：2005-1 页码：第3 页，共4 页 将冷藏试剂预温到20 oC后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。 定标： 每批睾酮试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用睾酮CalSet II定标液定标。 定标频率： 每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求： · 一个月（同一批号试剂） · 7天（放置仪器上的同一试剂盒） ·根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。 质控： Elecsys通用质控品（PreciControl ）1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。 计算： 对每一个标本，仪器会自动计算结果，单位是nmol/l,ng/ml或ng/dl。换算方 法是nmol/l 0.288=ng/ml或ng/ml 3.47=nmol/l 干扰因素： 该方法不受黄疸（胆红素<30mg/dl）、溶血（血红蛋白<1.8g/dl）、脂血（脂质<2000mg/dl）和生物素<30ng/ml干扰，接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。17种常用药物经试验对本测定无干扰作用。偶尔会遇到高滴度抗链霉亲和素抗体的干扰。Elecsys睾酮测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。 检测范围： 0.069─52.00 nmol/l 或0.020-15.00 ng/ml 稀释： 由于检测范围较寛,一般不需要稀释后检测。如遇高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议1:5稀释。稀释后的标本睾酮含量必须高于3ng/ml或10nmol/l。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。 东莞常平医院 免疫实验室 文件编号： DGCPH-IMN-SOP-02-27 睾酮 版序：2005-1 页码：第4 页，共4 页 正常参考值： 百分位数 n 50% 5-95% 50% 5-95% nmol/l ng/ml 男性 132 17.5 9.9-27.8 5.0 2.8-8.0 女性 956 1.2 0.22-2.9 0.35 0.06-0.82 儿童 <1岁 22 0.42 0.42-0.72 0.12 0.12-0.21 1-6岁 29 0.42 0.10-1.12 0.12 0.03-0.32 7-12岁 31 0.63 0.10-2.37 0.18 0.03-0.68 13-17岁 16 12.6 0.98-38.5 3.6 0.28-11.1 各实验室应对各自地区人群的睾酮正常值波动范围进行调查，如有必要应自己测定一个参考值。