铜绿假单胞菌菌苗预防白色念珠菌感染的实验研究

铜绿假单胞菌菌苗预防白色念珠菌感染的实验研究 铜绿假单胞菌菌苗预防白色念珠菌感染的 实验研究 中国微生态学杂志2006年6月第18卷第3期l67 文章编号:1005-376x(2006)03-0167-03 铜绿假单胞菌菌苗预防白色念珠菌感染的实验研究 【论着】 刘为国,曲晓娟,刘亚力,曹铁建,王爽 (1.大连大学医学院,辽宁大连l16622;2.盘锦市兴隆台区检验中心) 【摘要】目的利用铜绿假单胞菌菌苗探索阻断白色念珠菌感染的影响.家兔耳皮内注射白色念珠 菌,进行活菌攻击,建立动物感染模型.观察用铜绿假单胞菌菌苗免疫的家兔状况;用试管凝集法测定家免的抗体 效价;采用小白鼠体内吞噬法测定免疫组和空白对照组巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数,以得出铜绿假单胞菌 菌苗的免疫性.结果观察发现:与对照组比较,铜绿假单胞菌菌苗免疫组抗体效价,巨噬细胞的吞噬能力明显提 高;注射区局部感染及全身症状明显减轻;.肾脏感染灶减少,病理切片显示病情较轻.结论铜绿假单胞菌菌苗能 够减轻注射区局部感染及全身症状,对.肾脏的播散性白色念珠菌感染具有一定的阻断作用. 【关键词】白色念珠菌;铜绿假单胞菌菌苗;感染 【中圈分类】R379.4【文献标识码】A? TheexperimentalstudyofinhibitingCandidaalbicansinfectionbyPseudomonas aerugmosavaccine LIUWei—guo,QUXiao-juan,LIUYa-li,CAOTie-jian,WANGShuang (1.MedicalCollegeofDalianUniversity,Dalian116622,China) 【Abstract】 0bjectiveThisexperimentwasresearclfingfortheinfluencesofblockinginfectionsbyCandidaalbi_ cartsutilizingPseudomonasaeruginosavaccine.MethodsThefollowingstudywasundertakentoestablishanimalmodelof infectionsbylivingCandidaalbicanstOattackrabbitsthroughintradermieinjection.Toobservetheconditionsofrabbits immunityweusedPseudomonasaeruginosavaccinethroughassayingthepercentageofphagocytosisandphagocyticindexof macrophageinimmunitygroupandcontrolgroup.ResultsObservationshowedthat,thelevelofantibodytiterandphago— eytosepowerofrabbitsmacrophageofimmunitygroupinPseudomonasaer~~nosavaccinerisefasterthancontrolgroup. Thelocalinfectionininjectionsiteandconstitutionalsymptomisabated,Thenumberoffocusofinfectioninkidneywasde- creased.Thestateofillnesswasdecreasedbyobservingthepathologicalsection.ConcisionPseudomonazaeruginosa vaccinecouldeaselocalinfectionininjectionsiteandconstitutionalsymptom,anditcouldblockthedisseminatedirifec- tionsbyCand/daalbicansinkidney. 【Keywords】Candidaalbicans;Pseudomonaso.~Fll,ginosa;Vaccine;Infection 白色念珠菌是一种重要条件致病菌,近年来,随 着广谱抗生素,激素与免疫抑制剂的普遍应用,以及 肿瘤患者的放疗,化疗和其他获得性免疫功能低下的 患者(如艾滋病等)逐渐增多,而使内脏,皮肤,黏膜 被真菌感染者日益增多,据美国疾病控制和预防中心 的报告,在所有院内感染的常见病因中,念珠菌感染 已从2O世纪8O年代的第7位,跃居为目前的第6 位.2O世纪8O年代,念珠菌是危重症监护病房中的 常见感染病因,其中血液感染约为10%,尿路感染约 为25%.在2O世纪9O年代,在一些大的教学医院 院内念珠菌病的发病率已上升了500%,在小的教学 医院上升了219%,在大的非教学医院上升了 370%….在住院患者中由于念珠菌引起的血原性感 染已成为日益增加的难,在美国,念珠菌血症是 第4普遍的医院内m原性感染,仅次于凝固酶阴性葡 萄球菌,金黄色葡萄球菌和肠球菌之后.由于白色念 珠菌粘附感染的复杂性,白色念珠菌的耐药及抗真菌 药物副作用大的状况,致使治疗白色念珠菌的感染成 为临床上的一大难点.该实验主要探讨铜绿假单胞 菌菌苗对阻断白色念珠菌粘附感染的疗效. 【收稿日期】2005-】0-24 【基金项目】大连巾科技基金项?(编号为2004B3SI''l5) 【作者简介】刘为旧(1968)..剐教授,从lH口腔物:研究 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种白色念珠菌,由大连大学检验系保藏. 1.1.2实验动物家兔1O只,体重2,3kg,雄性; 小鼠2O只,体重2O一25g,雄性,由大连大学实验动 物中心提供. 1.1.3主要试剂铜绿假单胞菌菌苗(18~L/m1) 由北京万特尔生物制药有限公司提供. 1.1.4主要仪器(1)BH-2型摄影生物显微镜:O— LYMPUS;(2)D4—2A离心机:北京医用离心机厂;(3) 尼康数码相机:尼康中国有限公司;(4)吸液器(100 1):上海医械专机厂. 1.2方法 1.2.1白色念珠菌菌悬液的制备白色念珠菌接种 至新鲜的沙堡固体培养基,37培养24h,收集菌细 胞,用pH7.4的Hank~平衡盐溶液离心洗涤3次,用 血细胞计数板调整菌细胞浓度为5×10./ml. 1.2.2铜绿假单胞菌菌苗对家兔白色念珠菌感染的 影响(1)动物实验:l0只家兔随机分为2组,各为 5只.免疫组分3次,每次间隔ld,每次腹腔内注射 llnl铜绿假单胞菌芮尚进行免疫,3次免疫后,与对 照组同时接种白色念珠菌进行攻击制备感染模型,对 比观察全身状况及局部感染情况.(2)病理学检查: 168ChineseJournalofMicroeeology,June2006,Vo1.18No.3 模型制备完毕2周全部兔子处死,取两侧肾脏组织, 分别置于中性甲醛溶液中固定以用于常规HE染色. (3)血清学检查:处死家兔同时取血,直接试管凝集 法测定血清中抗白色念珠菌抗体效价. 1.2.3铜绿假单胞菌菌苗对小鼠抗体效价和吞噬功 能的影响(1)抗体效价的测定:l0只小鼠随机分 为2组,各为5只.免疫组分3次,每次间隔1d,每次 腹腔内注射1ml铜绿假单胞菌菌苗进行免疫,对照 组同时注射生理盐水,3次注射后断头处死小鼠,抽 血测定抗体效价.(2)吞噬功能的测定:菌苗组注射 0.5ml菌苗3次,间隔3d,对照组用生理盐水代替菌 苗,2组小鼠均于末次注射后3d处死,洗出腹腔渗出 细胞,在体外腹腔M'p吞噬鸡红细胞的吞噬百分 率及吞噬指数. 1.2.4统计学处理吞噬百分率使用四格资料的 检验,吞噬指数使用,检验与对照组比较,Jp值小 于0.01者为差异有显着性. 2结果 2.1铜绿假单胞菌菌苗对家兔白色念珠茵感染的影响 2.1.1动物实验一般状况:对照组受到白色念珠 菌攻击后表现为:战栗,局部及全身体温增高,全身体 温达到40,42clC,经过3次攻击后,表现为精神萎 靡,食欲下降,直至死亡;而免疫组受到白色念珠菌攻 对照组×400 击后表现为:局部及全身体温正常或略高,经过3次 攻击后,表现为精神良好,食欲基本正常. 2.1.2病理学检查(1)大体标本.肾脏大体标本 观察:对照组肾脏萎缩,上面分布几百个脓肿灶;而菌 苗组表现为充血肿胀,上面分布近几十个脓肿灶,数 量明显少于对照组.(2)HE染色光镜观察.镜下观 察:对照组显示为肾小管坏死,肾盂肾炎的表现;而免 疫组表现为肾小球炎症细胞浸润,肾小球肾炎的表 现.两者对比,免疫组显示为肾脏疾病的早期病变, 对照组显示为肾脏疾病的晚期病变.说明铜绿假单 胞菌菌苗对于白色念珠菌感染具有一定的保护作用. : 图l大体标本 图2HE染色光镜观察 2.1.3铜绿假单胞菌菌苗对家兔抗体效价的影响 结果显示:免疫组抗体效价明显高于对照组,菌苗 有提高家兔体液免疫功能的作用. 表l"菌苗"免疫动物后抗体效价(平均值) 2.2铜绿假单胞茵菌苗对小鼠抗体效价的影响 2.2.1铜绿假单胞菌菌苗对小鼠抗体效价的影响 结果显示:免疫组抗体效价明高于对照组,菌苗 有提高小鼠体液免疫功能的作用. 2.2.2铜绿假单胞菌菌苗对小鼠吞噬功能的影响 结果显示:免疫组吞噬百分率和吞噬指数明显高 于对照组,菌苗有提高小鼠吞噬功能的作用. 菌苗组×400 表2"菌苗"免疫动物后抗体效价(平均值) 3讨论 研究认为:念珠菌病患者的细胞免疫往往有不同类 型和程度的缺陷,而患者的非特异性和特异性免疫功能 在对抗白色念珠菌感染中起着主要作用.所以,免疫疗 法在念珠菌感染的治疗中具有重要的作用.如干扰素 ,IL一2,II一12,肿瘤坏歹巴因{(TNF—Or.),IL-6,IL一8,IL一15 等淋巴凶子具有提高机体白色念珠菌的抵抗力的作 用.}l_l丁以j增强机体免疫力的药物其来源相对困难, 限制了其应用,因此,探索新的念珠菌病的免疫治疗方 法具自-j重要的现实意义. 中国微生态学杂志2006年6月第l8卷第3期169 表3铜绿假单胞菌(MSHAJ茵毛株菌苗 对M'p吞噬鸡红细胞的增强作用 注:?,??均明显高于对照组(P<0.叭) 实验结果显示:铜绿假单胞菌菌苗能够提高家兔和 小鼠的抗体效价,增强小鼠的巨噬细胞的吞噬能力.同 时,铜绿假单胞菌菌苗能够减轻耳朵局部感染及全身症 状,对肾脏的白色念珠菌感染具有一定的阻断作用. 推测其作用原理可能与以下因素有关:铜绿假单 胞菌菌苗具有周身性复合菌毛的高效跨菌属的免疫原 性,免疫人体后能广泛封闭复合性糖蛋白和糖脂类受 体;可以调节体液免疫,产生高效价广谱交叉抗体;同 时调整细胞免疫,使CD/CD趋于正常;产生内生性 干扰素,白细胞介素2,激活NK细胞活性,并且使体内 免疫系统达到平衡状态. 目前,该菌苗应用于肿瘤,免疫失调性疾病的治 疗.该实验初步证实了铜绿假单胞菌菌苗对于白色念 珠菌感染具有一定的阻断作用,而新的免疫治疗方法 克服了白色念珠菌的耐药及抗真菌药物副作用大的缺 点,为临床探索防治念珠菌感染的方法起到了积极的 作用. 【参考文献】 [1]罗伯特H盖茨(美).美国最新临床医学问答——感染性疾病[M]. 征明明.崔速南译.北京:海洋出版社.2000. 『2]PFAI【JERMA.JONESRN,DOERNGV,eta1.Bloodstreaminfections duetoCandidaspecies:SENTRYantimicrobia1surveillanceprogramin NorthAmericaandLatinAmerica.1997—1998lJJ.AntimicrobAgents Chemother2000.44:747-751. 『3]BLUMBERGHM,JARV1SWR,SOUCIEM,eta1.Riskfactorsof candidalbloodstreaminfectionsinSI]rgicalintensivecareunitpatients: theNEMISprospectivemulticenterstudy[J].ClinInfectDis,2001,33: 177—186. [4]李志平,郝德治.张洪,等.铜绿假单胞菌PA—MSHA苗毛株菌苗辅 助治疗恶性淋巴瘤和肺癌的临床实验研究[J].华西医大, 2000,31(3):334-337. [5]李志平,郝德治.杨玉琼,等.PA.MSHA苗毛株菌苗辅助治疗恶性淋 巴瘤临床研究[J].重庆医学,2000,29(2):170一l72. [6]李志平,郝德治,任莉,等.PA—MSHA菌毛株菌苗辅助治疗肺癌临床 研究[J].四JIJ医学,20oo,21(3):193—195, [7]孙文平,付红文,刘妮.等.PA—MSHA苗毛株疫苗对三种痛症忠者免 }壁疗效的临床观察[J].中华微生物学和免疫学杂志,2000,20(4): 373.376. 文章编号:1005-376X(2006)03-0169-01 萧山地区524例健康献血者血清中乙肝前S蛋白调查 【临床研究】 施建妙.杨国眷 (1.浙江省萧山中心血库,浙江萧山311200;2.浙江省萧山皮防院) 【摘要】目的了解健康献血者(指表面抗原阴性,丙肝抗体阴性,艾滋抗体阴性,梅毒抗体阴性,AI小于 25赖氏单位)血清中乙肝前s.蛋白的阳性状况.方法采用ELISA法对萧山地区524例健康献血者作前S.蛋白 调查检测,同时对前s蛋白阳性标本采用放免法,作乙肝三系检测.结果有12例前s.蛋白阳性,阳性率为 2.3%,其中有1例乙肝三系核心抗体IgG阳性,其余11例乙肝三系各项指标全阴性.对12例阳性者作跟踪调查, 1年后,在12例阳性者中,有4例前s蛋白仍保持阳性,对4例阳性标本再作乙肝三系检测,除1例1年前核心抗 体IgG阳性外,其余3例乙肝三系各项指标仍保持阴性. 【关键词】前S.蛋白;乙肝三系;ELISA法 【中图分类号】14512.62【文献标识码】A 前s.蛋白是由乙型肝炎病毒外膜的大分子糖蛋白组成, 它是HBV-DNA前S基因的编码产物j,主要存在于Dane颗 粒,是乙肝病毒DNA复制的标志J,前S.蛋白与HBV—DNA 有很好的相关性,因此,前S蛋白可以作为乙肝病毒感染的 佐证J.该文旨在了解健康献血者血清中前S.蛋白阳性情 况,同时对前S.蛋白作为乙肝病毒特有的组成成分作进一步 探讨,现将实验结果报告如下. 1材料与方法 1.1标本 1.1.1血清标本由萧山地区中心血库提供,年龄在18—55 周岁,符合国家献血法要求的男性献血者164例,女性献血者 360例. 1.2.2跟踪血清标本在初次检测的前S.蛋白阴性者中, 随机抽取2O例作为阴性跟踪标本,初次检测前s,蛋白阳性 的12例为阳性跟踪标本,1年后抽取. 1.2试剂 l_2.1前S.蛋白酶免试剂盒由中国科学院上海生物化学 研究所阿尔法公司提供. 1.2.2乙肝三系检测放免诊断试剂由3V诊断技术公司? 中国?淮纺提供. 1.3方法 1.3.1前S.蛋白检测按前s蛋白酶免诊断试剂盒说明操 作,检测各孔』4值,以s/co值大于或等于1者为阳性,酶标仪 型号:MR4100. 1.3.2乙肝三系检测采用放免法,按3V公司试剂盒说明操 作,最后用r一计数仪测量结果,仪器型号:CN一682放免r-计数仪 2结果与讨论 【收稿日期】2005—11-21 在524例健康献血者中,前s.蛋白阳性为12例,阳性率 为2.3%,同时对12例阳性标本作乙肝三系检测,除1例标本 核心抗体IgG阳性外,其余11例各项指标全是阴性.跟踪1 年后,在12例阳性者中,有4例前s.蛋白仍阳性,而一起跟 踪的2O例前S.蛋白阴性者中无1例阳性,对4例阳性标本再 作乙肝三系检测.除1例1年前核心抗体IgG仍阳性外,其 余3例乙肝三系各项指标仍阴性.结果表明,在12例前s 蛋白阳性血清中,确有1例核心抗体IgG阳性,这与有关文献 报道,前s蛋白与乙肝存在很好的相关性相符合,而其余11 例标本并未出现相关的乙肝指标,这是否为实验的假阳性造 成,为此本人对阳性者进行1年的跟踪,其中还有4例前S 蛋白阳性,同一例献血者,在间隔1年后,前后2次试验,产生 相同的阳性结果,仅用假阳性来解释缺乏妥当.我认为这决 不是似阳性产生的偶然巧合,而是这些阳性者血清中确实存 在前S.蛋白,或者说存在结构类似于前S蛋白的抗原物质, 而其中8例1年后转阴,其原因之一不排除试验造成的假阳 性;其二是这部分献血者在1年过程中,因自身免疫调节使前 S蛋白或类似于前S蛋白的物质逐渐转阴,这一现象与有关 文献的报道存在差异.为此我大胆推测,前S蛋白是否是乙 肝病毒外膜蛋白的特有抗原成分值得考虑,在这些阳性者血 清中,是否存在与前S蛋白交叉的抗原成分,产生这种交叉 抗原成分是由于感染了别的病毒,这还需进一步探讨. 【参考文献】 [1]冯福氏,等.以pres.合成肽为抗原检测pres抗体[J].r1l华学 检验杂志,1995,18(3):154—157. 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