痰细胞学检查标本不同处理方法对分类计数结果的影响

痰细胞学检查标本不同处理方法对分类计数结果的影响 痰细胞学检查标本不同处理方法对分类计 数结果的影响 国际检验医学杂志2010年12月第31卷第l2期IntJI.abMed,December2,I.! lZ4一lZ6. 栾桂红,高鹏.毛细管电泳法药敏纸片内头孢他啶含 量口].国际检验医学杂志,2007,28(7):597599. 常霞,常丽.毛细血管电泳法在尿微量向蛋白和肌酐同时 测定中的应用[J].山东医药,2008,48(40):36. 韩西群,齐宗利,贺莉,等.琼脂糖凝胶电泳及SSCt法在 淋巴瘤克隆性TCR7基因重排检测中的应用[J].I1l东医 药,2009,49(42):23-25. 杨秉呼,孙偶君,张敏丽,等.毛细管凝胶电泳法测定硫代 寡核苷酸药物癌泰得的含量[J].色谱,2004,22(3):202 205. 顾志冬,徐汝明,王颖智,等.应用高效毛细管电泳筛检和 鉴定血清巾m蛋白[J].诊断学理沦实践,2005,4(4): 303—3O7. [7]陈建忠.DNA测序巾的毛细管凝胶电泳技术[J].医疗设 备信息,2005,20(1):4243. [8]刘春叶,张剑,许旭,等.毛细管无胶筛分电泳中一种 DNA定量分离模型的优化讨论[J].分析测试, 2009,28(5):5l9-524. r9]IiuC,XuX,ChenJ,eta1.MathematicalmodelforDNA separationbycapillaryclcctroph0resisinentangledpoly metsolutions[J].ChromatogrA,2007,1142(2):222230. [1o]桑付明,任秀莲,潘建新.等.高效毛细管电泳一激光诱导 荧光技术在荧光标记DNA分析巾的研究进展[J].分析 测试,2009,28(9):1]0O11O4. (本文责任编辑杨庆华收稿日期:2O100104) ? 新技术,试剂与设备? 痰细胞学检查标本不同处理方法对分类计数结果的影响 曾怀跃,董孝平,魏炳华,林凯平,杨贵洪 (深圳市龙岗区南湾人民医院检验科518123) 【关键词】痰;细胞学;分类计数;诱导痰 DOI:10.3969/j.issn.1673—4130.2010.12.069 中图分类号:R446.156文献标识码:B文章编号:l6734130(2010)12—146802 咳嗽是内科患者最常见的症状之一,其病冈复杂,极易被 误诊误治.误诊的原因除病凶复杂以外,主管医生没有重视辅 助检查,也是一个重要的原因.痰细胞学检查对于咳嗽尤其是 慢性咳嗽的诊断和治疗有积极的价值.标本的处理及分 类计数的方法直接影响着痰细胞学检查的质量,影?向着咳嗽的 诊断和治疗.本组以44例咳嗽患者的痰标本为丛础,埘比了 2种痰标本的保存和制片的方法,对痰细胞学分类计数进行 探讨. 资料与方法 1.资料1)标本来源:选用2009年10月18日至2010 年1月25日深圳市南湾人民医院门诊和住院患者5l例患者 的痰标本,其中自然咯痰13例,导痰41例.年龄从2个月 至49岁,男26例,女28例,患者症状为咳嗽或慢性咳嗽,I床 诊断为支气管炎或支气管肺炎.2)试剂与材料:保存液(10 二甲亚砜)乳化制片:0.1二硫苏糖醇,pH6.8磷酸盐缓冲 液;HE染液;薄层细胞学检测(thinprepcytologictest,TCT) 保存液,为广州鸿琪光学仪器科技有限公司产品;血液细胞稀 释液(迈瑞BC-300pPIUS稀释液),主要成分为氯化钠,硫酸 钠,缓冲液,由深圳市迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产. 2.方法1)随机选择8例患者乙二胺四乙酸二钾抗凝 血各制片2张,1张行HE染色,另1张行瑞氏染色.同时,取 0.5mI血液加到一痰杯之中.加10二甲亚砜1mI,放2,8 ?冰箱保存.制片时从冰箱中取出,恢复至室温.然后加4倍 *基金项目:深圳市龙岗区科技计划项目(YI一2009039). 体积的二硫苏糖醇,震荡2rain,置37?温箱温浴15min,加等 量的磷酸盐缓冲液,震荡5,10min,以离心半径为8em,1000 r/min离心4min,弃上清液,留0.5,】mI沉淀液充分摇匀, 取沉淀液制片,HE染色,蜕察.汁数中性粒细胞和嗜酸粒 细胞.2)所有收集到的痰标本,首先涂片在显微镜下观察,进 行细胞分类和活力检测,合格为:f:皮细胞<20,细胞存 活率>4O.无白细胞者弃之不用.3)选1O例痰标本,加 1O二甲亚砜1m1,放2--8?冰箱保存.制片时从冰箱中取 出,恢复至室温,然后加4倍体积的二硫苏糖醇,震荡2min,置 37?温箱,温浴15min,加等量的磷酸盐缓冲液,震荡5,10 min,以离心半径为8cln,1000r/min离心4min,弃上清液,留 0.5,1mI沉淀液,充分摇匀,取沉淀液制片,HE染色,观察. 计数中性粒细胞和嗜酸粒细咆.4)取44例痰标本,其中3例 自然咯痰,41例诱导痰.加l,2mITCT保存液,放2,8? 冰箱保存,制片时取出,恢复室温,震荡摇匀,将其分成2份:1 份按方法1:加2mI二硫苏糖醇,震荡1min,置37?温箱温 浴8min,再加5mI磷酸盐缓冲液,震荡10min,1000r/min, 离心4min,弃上清液,留0.5,1ml沉淀液,充分摇匀,取沉 淀液制片,HE染色,观察.另1份按方法2:加血细胞稀释液, 5ml震荡i0min,以离心半径为8cm,1000r/min离心4 min,弃上清液,留0.5,1mI沉淀液,充分摇匀,取沉淀液制 片,HE染色,观察.分别计数中性粒细胞和嗜酸粒细胞.5) 统计学方法:数据分析使用SPSS11.5统计软件统计处理. ]]]]] 国际检验医学杂志2010年12月第31卷第l2期 lntJIbMed,December2010,V0I_3],No.12 结果 1.血片经瑞氏染色效果良,HE染色红细胞被成片固 定,fH白细胞形忿良好;f}}经二甲业帆,二硫苏糖醇处理后的样 本,所制片可见细胞伞部溶解.尢法读片,可见f述试剂会溶解 破坏血细胞. 2.10例痰标本经l0甲砜处理,所制片中8例标本 中自细胞全部被破坏,存留的痫例l卜,细胞胞浆也破破坏,核有 肿胀,不易辨认,但痰液乳化良好,口J见该试剂也会溶解痰中血 细胞,二硫苏糖醇对痰液有乳化作剧. 3.,I_}jI'CT保存液保仔标小,经二硫精醇处理的一半,制 片后可见细胞尚槿完好,乳化良殳『.其中观察到rt性粒细胞的 有44例,^100.0,观察到嗜酸粒细胞的干丁6例,占13.6; 经血细胞稀释液处理的标本,制片后『1丁见细胞形态完好易辨, 其巾观察到lf】性粒细胞仃44例,Il00.0.观察到嗜酸粒细 胞的7例,占lj.9,经统汁学检验,Y一0.0903,P>0.05,两 者差异无统计学意义.町见破坏细胞的是10的二甲亚砜而 非二硫苏糖醇.见图1. 图1不同方法痰制片(HE染色;A:方法1,B:方法2) 4.同1例患者,前后2次分别留取2份标本,或同l份标 本经TCT保存后.震荡摇匀.分为2份标本,用法1和方法 2处理标本作细胞讣数.白细胞总数有差别,但其百分数无 差别.44例痰细胞lIl性粒细胞计数经方筹齐性检验,F一 0.0963,P0.05,办差卉性;采用双样本等方差检验,t一 0.0587.P>0.05;嗜酸粒细胞经方差齐性检验,F一0.8418, P<0.05,方差小齐;采用蚁样小异'差f检验,,一0.1178, P>0.05,2种办法差异无统计学意义.见表1. 表I2种处理方法检出中性粒细胞百分率(N)和 嗜酸粒细胞日'分率(E)比较(?) F一0.9627,z一0.0587.P>0.05;F一0.84l8,, 0.】178,P>0.05 5.计数方法中性粒细胞凶数量多可直接计数,嗜酸粒 细胞因数量较少,宜用网织红细胞计数法,计数l000个白细 胞中嗜酸粒细胞数量,再换算成百分率. 讨论 痰是呼吸道黏膜的分泌物,主要成分是黏液和细胞,据 Belda报道正常痰细胞主要足吞噬细胞(61)和lfl性粒细胞 (36Yoo),嗜酸粒细胞雨I淋巴细胞较少见.细胞分类训数的异 常,提示不的气道炎症和诱凶.研究表明嗜酸粒细胞增高 (>2.5)是支气管哮喘,嗜酸粒细胞支气管炎和过敏性疾病 的特征性标志,同时痰细胞计数是嗜酸粒细胞支气管炎的主要 诊断依据. 痰细胞学检查,一般要求痰液新鲜,以上二午9,lO时留痰 为好,凶痰液在呼吸道停留时间过长,细胞可能发生自溶破坏 或变性而结构不清,不宜做细胞学检查;而实际:作中,因痰 细胞学检查处理工作复杂,往往要成批检验,因而标本的保存 和制片就显得非常重要.开始时本组选用二甲亚砜为防腐 剂.,以浓度为10二甲亚砜为保存液[7],结果发现细胞被严 重破坏.为了证实细胞破坏是否因10的二甲亚砜所为,本 组选用r8例血标本和10例痰标本重复多次实验,结果8例 血标本细胞全部破坏,l0例痰标本细胞大部分破坏,小能进行 细胞学检合.为搞清楚破坏细胞是哪种化学成分,本组从液基 薄层细胞学检测巾得到启示,试用TCT保存液保存痰标本,结 果发现细胞保仔良好.本组选用44例痰标本,用TCT保存 液,置2,8?保存3,5d,然后震荡摇匀,分成2份标本,分别 用上述方法1和方法2处理,进行制片,染色,镜检,结果发现 细胞形态保存良好,结构清楚易辨.其中使用了二硫苏糖醇的 方法1,虽然细胞胞浆有所破坏,但仍属良好可辨,见图lA;只 使了血细胞稀释液的方法2,细胞整体保存良好,易于辨认, 见图1B,但当痰黏液较多时,其乳化情况小如办法1好.2种 方法经统计学处理,结果:巾性粒细胞和嗜酸粒细胞分类计数 P>0.05,差异无统计学意义;嗜酸粒细胞检出率统计学处理, Y-二0.0903,P>0.05,差异亦无统计学意义. 综j所述,本组发现,1)在2,8?冰箱内,TCT保存液保 存痰标本3,5d,细胞形态保存良好.2)血细胞稀释液完全可 用于痰细胞学检查,可得到良好结果,且操作简单,实用性强. 3)任痰黏液多时使用二硫苏糖醇乳化黏液,诱导痰一般黏液 较少,可小使用.总之,本组认为,方法2是一种经济,实用,操 作简单的办法,可在临床推广使用. 参考文献 周玉法,亓玉心.慢性咳嗽诱导痰细胞学分析21例LJ]. Iij东医药,2004,44(25):8. 咳嗽的诊断与治疗 巾华医学会呼吸病学分会哮喘学组. (2009)[J].中华结核和呼吸杂志,2009,32(6):412 415. 罗炜,赖克方,钟南山.诱导痰检测的方法学及其在气道 炎症评价巾的应用[J].国外医学呼吸系统分册,2004,24 (6):395396. BeldaJ,IeighR,ParameswaranK,eta1.Inducedsputum cellcountsinhealthyadults[J].AmJRespireCritCare Med,2000,161(2Pt1):475-478. 韩冬,张春雷.痰液脱落细胞学检查临床应用体会[J].检 验医学与临床,2009,6(20):1765,1768. 熊立凡,李树仁,丁磊.临J末检验基础[M].3版.北京:人 民卫生出版社,2004:271. 王兰兰,柳永和,李双庆,等.1临床免疫学和免疫检验 [M].3版.北京:人民卫生出版社,2005:37. (本文责任编辑杨庆华收稿日期:20100129) ]]]]]]]