出现肩峰的原因与对策

随着柱子的使用时间越长，越很容易出现肩峰或叉峰的现象，那怎么样可以很好的去避免呢？ 请您来解析: 1.产生肩峰或叉峰是我们很不愿意看到的，因为它的出现与柱子的关系很大，那产生的原因一般有哪些？ 2.平时实验中怎样有效避免肩峰或叉峰的出现呢？ 3.对于已经产生肩峰或叉峰，你有什么好的处理方法去进来弥补？ 〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓 图谱如下: 有可能是柱子的吸附能力下降了，还有可能是样品本身的酸碱性发生了变化， 柱子可能被未处理干净的样品污染了，造成柱效降低，保留时间提前，直接后果就是分离交叉，甚至共淋洗,如果色谱柱出现干枯现象，有填料塌陷，也会造成叉峰。 色普柱键合相降解,c18出现硅醇基，或有大量吸附物在色谱柱上。 产生分叉和肩峰的原因一般是柱子柱效下降，还有时遇到强极性的物质，进样量过大，再有是柱头塌陷，柱身出现断层，柱外死体积过大，流动相配置不合理等。 可能的原因有： 1.柱子发生轻微堵塞。 2.柱子内填充料松动或功能缺失。 3.流动相中存在空气或压力不稳定。 一般原因有：柱子或保护柱污染，柱头塌陷，键合相脱落。 1.保护柱或柱入口处部分阻塞，此时需分段检查，确定阻塞部位，清洗疏通，必要时更换部件； 2.保护柱或色谱柱被污染，性能下降，此时需清洗保护柱或色谱柱，必要时更换新的； 3.进样体积太大或样品浓度太高，平衡被破坏，此时需稀释样品或减小进样量。 可能原因有：柱子被污染；柱子塌陷；样品浓度过高或进样量过多导致柱子负载；样品中的物质没有被充分分离。 可能原因有：1 样品没有处理干净或者长时间进样没有清洗柱子导致柱效下降；2 样品浓度过高或进样量过多；3 流动相pH值不合适；4 样品不纯，目前条件没有充分分离杂质等 样品浓度过大 ,样品溶剂过强, 柱塌陷或形成短路通道, 进样器损坏都有可能产生肩峰及叉峰 肩峰或叉峰的出现一般由于色谱柱填料流失引起，导致柱头塌陷，而导致填料流失的原因比较多。其他原因还有静电对工作站和检测器的屏蔽干扰。 我们辟开分析方法的原因，只谈为什么会出现肩峰和叉峰。 举个例子： 色谱柱有如一个海底的通道，人们可以在海底看到各种各样的景色。一群人一起进入通道，各个人被不同的景色所吸引，所以大家观看的时间都不一样，所以，大家是陆续从海底通道的另一端出来了。 所以某一样品进入色谱柱，各物质与固定相间作用不同，时间也不同，最终陆续的出峰。 为什么肩峰和叉峰呢？比如海底全污染了一片黑呼呼的，每个人进去了肯定不会逗留。色谱柱被污染了，化合物与固定相之间的相互作用弱了，大家出来的时间就相近了，就出现了叉峰和肩峰。在比如海底通道不允许观看景色了，人们进去肯定很快就一起出来了，就像色谱柱填料倒塌了，此时分离效果差了，就出现肩峰和叉峰了。 肩峰和叉峰可能是分离度不好是几个峰，也可能就是一个峰，只不过因为柱原因，例如死体积啊，出现了问题。 例子不是很确切，但是意思应该很明白。 一是仪器原因，管路堵塞，或有气泡等 二是色谱柱的柱效降低，如污染，固定相流失，塌陷，这样样品相对柱效是过载的 三是进样量过大或样品在流动相中分配系数低。 可能有以下原因：流动相比例不合适；流动相的PU值；柱子的类型。 可能原因样品体积过大， 2.样品溶剂过强 : 3.柱塌陷或形成短路通道 : 4.流动相或比例选择不合适，5、流动相污染 肩峰的原因有多种，就上述几张图来看，有可能是1.选择柱子错误；2.柱子已经到寿命了；3.pH值有问题。 2.平时实验中怎样有效避免肩峰或叉峰的出现呢？ 调节样品的pH值在合适的位置，不要用极性太强的溶剂长时间的冲柱子。 样品处理尽可能干净，做完样品一定做好色谱柱的清洗工作。 尽量少做低PH和过高PH的流动相。 选择合适的流动相，减小进样量，用保护柱，做样后及时冲洗注意保养。柱子长时间不用时用纯有机相（一般的柱子）封存。 避免方法有： 1.用方法中流动相比例、流速冲洗柱子30分钟。 2.尽量采用成熟方法进行液相操作。 3.更换柱子。 4.排查流动相中是否有流动死角。 使用正确的流动相，可以很好的保护柱子，避免肩峰或叉峰出现。 1.平常工作中注意流动相和样品的过滤，定期更换新流动相，防止系统管路阻塞； 2.样品尽量处理干净，按要求使用色谱柱，定期检查柱效； 3.注意控制样品浓度，防止过载。 避免的方法有：对柱子注意清洁保护以免其被污染；对于非水性柱尽量少用大比例的水相冲洗柱子以防止柱子塌陷；注意样品的浓度配制和进样量；选择合适的流动相使样品得到充分分离。 避免的方法有：1 样品尽量处理干净，进样一段时间后要充分清洗色谱柱，必要时加保护柱；2 不要进太浓的样品；3 流动相pH值要合适；4 条件色谱条件使样品分离。 用流动相配样,采用适当的样品进样量, 选用合适的色谱柱 ,及时维护仪器 在日常实验中，由于色谱柱的特殊结构（硅胶柱和键合相柱），以及固定相的稳定性受填装密度和使用维护影响重大。所以在使用时候，因注意以下几点： 1 不经过前处理，直接上柱分析吸附性强、杂质含量非常多的样品。否则易导致永久性吸附和柱子堵塞，导致固定相提前OVER。 2 在冲洗柱子的时候，反相柱，如C18柱应避免用纯水相冲洗（可用5%有机比例以上的有机水溶液来冲洗），不然硅胶基质经常在全水相冲洗下，键合键容易被冲散，柱头也就很容易塌陷了。 3在使用色谱柱时候，应避免经常在强酸性和强碱性流动相中分析样品。否则，容易导致硅胶基质被腐蚀破坏。 4 避免使用含较高浓度金属离子的水和试剂（如自然水），不然容易产生金属离子效应，直接影响色谱柱的寿命。 5 不要经常拆卸柱头，否则易导致柱头的填料直接损失，同时也容易影响填料填装紧度。 色谱柱维护是避免肩峰和叉峰的有效措施之一！那么如何维护： 1、仔细阅读柱说明 2、仔细学习产品及样品的性质，确定比较好的冲洗液 注意正确的安装色谱柱，特别是柱头 有预柱的话，注意好预柱的使用及更换、维护 注意仪器保养，严格按照操作规程做，样品过滤，选择合适的色谱柱（很重要），注意实验条件。 开展好预试验，选择合适的样品提取方法；选用合适的流动相及其比例。 减小体积，采用较弱的样品溶剂 ，更换色谱柱，更换比例，更换流动相 3.对于已经产生肩峰或叉峰，你有什么好的处理方法去进来弥补？ 调节流动相的流速或调节样品的pH值，如果是被污染了，冲洗色谱柱,如果是由于色谱柱选择性造成的，则换色谱柱，也预示着可以换色谱柱了。 对分叉，肩峰的柱子进行再生处理，一般是按柱子说明书进行再生。有时需要对柱子进行添补处理，力求恢复使用。 对于产生的肩峰和叉峰处理： 1.采用峰高进行合并计算。 2.重新进行检测。 要么就处理色谱柱子；要么就改善流动相，如PH、加缓冲盐等。 1、可能是柱子使用时间太长，柱效降低，也可能是样品污染，进样量太大。 2、可以改用不同的流动相，或者改变流动相的组成，改变流动相的PH。改变柱温，改变固定相。 3、可以改变以上某种条件后重新进样，或者通过软件优化处理，经常对柱子进行清洁维护 首先确定产生肩峰的原因，逐步解决问题；若问题一时难以解决，改用峰高定量或手动积分将肩峰合二为一以总面积定量。 视具体情况具体解决。对于柱子污染的，冲洗、再生柱子；柱子塌陷的就没了；样品的问题是可以调节的。 解决的办法有：如果是样品污染柱子，可以冲洗色谱柱或者更换保护柱；调节合适的流动相pH值来优化峰形；调节流动相比例等使样品杂质充分分离。 可以将柱子的滤片下下来看是否有异物，如果有异物可以进行用100%甲醇超声，如果不能清洗下来可以改用异丙醇超声。这样处理了也不能使用很久，最好更换柱子。 峰高定量或手动积分定量 如果是属于静电干扰导致，仪器和工作站接地即可解决（N2000又一定几率会出现这类现象）。 如果是属于填料流失导致的，反冲和再生是没什么效果的，修补柱头是一个比较好的办法。即打开柱头，清洗或者更换柱头筛板，然后挖去部分已经变性的填料，然后用和这根色谱柱一个规格的填料填补回去，具体为加一滴分散剂（四氯化碳和二氧六环混合液），然后补一点填料，轻轻敲平，然后，重复添加几次，直到填料已经填满柱管平口为止（有时候高1mm会比较好）。修补后，用纯甲醇冲洗2小时以上方可使用。本人一朋友在巨化集团，就是得益于这样的修补技术，那根C18柱，每天工作4小时左右，已经有了10年的寿命。 1、冲洗色谱柱，一般情况下，不要反冲；尝试调节流动相；改变流速。 2、可以考虑拆下筛板清洗，此时根据说明书或者咨询师 3、在柱前面加填料，这也是补救的措施 4、至于液相色谱的再生，就不说了，论坛上说了很多，注意冲洗的顺序，及做好相应的记录，便于以后查询 仪器问题就不说了，色谱柱的污染有两种，一是大颗粒或强吸附性物质，基本废了；二是缓冲盐结晶，纯水加5个点的甲醇冲；固定相流失，塌陷也废了。 肩峰或分叉 进样量太大或样品浓度过高时，要减少进样量或稀释样品；样品溶剂太强时，应使用软弱的样品溶剂；色谱柱性能欠佳时，应更换色谱柱。