疏郁复方颗粒的质量标准

第 33 卷 第 3 期 暨南大学学报(自然科学版) Vol． 33 No． 3 2012 年 6 月 Journal of Jinan University(Natural Science) Jun． 2012 ［收稿日期］ 2011 － 03 － 01 ［作者简介］ 李淑琴(1985 －) ，女，研究方向:中药学． E-mail:lishuqin3@ 126． com 通信作者:张荣华，男，教授，博士，E-mail:tzrh@ jnu． edu． cn 疏郁复方颗粒的质量标准 李淑琴1， 马仁强2， 张荣华1， 朱晓峰3， 杨 丽1， 潘梅英2， 宋志娟2 (1．暨南大学 药学院 中药学教研室，广东 广州 510632;2．广州博济医药生物技术股份有限公司，广东 广州 510602; 3．暨南大学 第一附属医院 中医科，广东 广州 510630) ［摘 要］ 采用薄层色谱法鉴别制剂中的首乌藤、丹参、白芍;高效液相色谱法测定制剂中芍药苷的含量．色谱柱: Hypersil ODS2-C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相:乙腈 － 0. 1%磷酸溶液(13:87) ;流速:1. 0 mL /min;柱温:30 ℃;检测波长:230 nm．结果显示薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰，重现性良好;高效液相色谱法测定芍药苷在 0. 023 78 － 0. 594 44 mg·mL －1呈良好的线性关系(r = 0. 999 9) ;平均回收率为 100. 46%，RSD值为 1. 25%(n = 6)． 此方法简便、快捷、准确，可用于疏郁复方颗粒的质量控制． ［关键词］ 疏郁复方颗粒; 质量标准; 芍药苷; 薄层色谱法; 高效液相色谱法 ［中图分类号］ R284． 1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1000 － 9965(2012)03 － 0289 － 05 Quality standard of compound ShuYu granule LI Shu-qin1， MA Ren-qiang2， ZHANG Rong-hua1， ZHU Xiao-feng3， YANG Li1， PAN Mei-ying2， SONG Zhi-juan2 (1． Department of Chinese Materia Medica，Pharmacy College，Guangzhou 510632，China; 2． Guangzhou Boji Pharmaceutical Biotechnology Limited Liability Company，Guangzhou 510602，China; 3． Department of Traditional Chinese Medicine，First Affiliated Hospital，Jinan University，Guangzhou 510630，China) ［Abstract］ To establish the quality standard of compound ShuYu granule． Thin-layer chromatography was used to identify polygoni multiflori caulix，salvia miltiorrhiza radix et rhizoma，and paeoniae radix al- ba;The content of paeoniflorin from preparation was determined by HPLC． The chromatographic condi- tions of paeoniflorin included the chromatographic column:hypersil ODS2 － C18(4. 6 mm × 250 mm，5 um) ;mobile phase:methyl cyanide-0. 1% phosphoric acid solution(13 ∶87) ;flow velocity:1. 0 mL / min;column temperature:30 ℃;detected wavelength was 230 nm． The characteristics of the TLC were accurate and reproducible;The linear range of paeoniflorin was 0. 023 78 － 0. 594 44 mg·mL －1(r = 0. 999 9)． The average recovery was 100. 46 % with RSD of 1. 25%(n = 6)． The methods are accurate and quick in qualitative identification and quantitative assay of this preparation，which can be used for the quality control of compound ShuYu granule． ［Key words］ compound ShuYu granule; quality standard; paeoniflorin; thin-layer chromatogra- phy(TLC) ;high performance liquid chromatography(HPLC) 疏郁复方颗粒由首乌藤、丹参、白芍组成． 功能 为舒肝解郁、宁心安神、燥湿活血．用于肝气郁结、痰 火扰神所致的轻、中度失眠、神经衰弱及抑郁症． 白 芍中的芍药苷为本方中有效成分，为了保证该药的 用药质量，本实验采用高效液相色谱法测定了制剂 中芍药苷的含量并进行了方法学验证． 采用薄层色 谱法对制剂中的首乌藤、丹参、白芍进行了鉴别;所 建立的方法简便、可靠、重复性好，可以用于该制剂 的质量控制． 1 仪器与试剂 1． 1 仪器 仪器 Dionex P680 高效液相色谱仪(公司:美国 Dionex公司) ;色谱柱:Hypersil ODS2-C18 (4. 6 mm ×250 mm，5 um) ;KQ-100DE 超声仪(昆山市超声 仪器有限公司) ;Sartorius CP225D 十万分之一电子 分析天平(北京东方安诺生化科技有限公司) ;水浴 锅(HHS-21-4，江苏金坛宏凯仪器厂)． 1． 2 试药 首乌藤对照药材(120939 －200705，0. 25 g /支);大 黄素对照品(110756 － 200110，20 mg /支) ;丹酚酸 B 对照品(111562 － 200403，20 mg /支) ;芍药苷对照品 (批号:110736 － 200934，20 mg /支) ，以上对照品均 购自中国药品生物制品检定所． 疏郁复方颗粒(来 源:广州博济医药生物技术股份有限公司，样品批 号:111206;111213 － 1;111213 － 2) ;阴性对照试验 所用药材均为生产用同批药材;薄层层析用硅胶 G (青岛海洋化工厂) ;乙腈为色谱纯，水为纯化水，其 它试剂均为分析纯． 2 方法与结果 2． 1 首乌藤的薄层色谱鉴别 取本品 2 g，加乙醚 30 mL与盐酸 2 mL，超声处 理 30 min，过滤，滤液挥干，残渣加甲醇 1 mL 使溶 解，作为供试品溶液．同法制成缺首乌藤的阴性样品 溶液．取首乌藤对照药材 0. 25 g，同法制成对照药材 溶液．取大黄素对照品，加甲醇制成每 1 mL 含 0. 1 mg的对照品溶液．薄层层析方法:照薄层色谱法(中 国药典 2010 年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述 4 种溶液各 4 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以 V石油醚(60 ～ 90 ℃)∶V甲酸乙酯 ∶V甲酸 = 15∶5 ∶1 的上层溶 液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视．供试品色谱中，在与对照药材和对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点;置氨蒸 气中熏后，斑点变为红色．结果见图 1． A．荧光 B．氨熏 1 － 3． 供试品;4． 首乌藤对照药材;5． 大黄素对照 品;6．缺首乌藤阴性对照 图 1 首乌藤的薄层色谱 2． 2 丹参的薄层色谱鉴别 取本品 3 g，加热水 30 mL使溶解，过滤，滤液加 稀盐酸调 pH 值至 2，加乙酸乙酯振摇提取 2 次，每 次 25 mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至 1 mL，作为供试 品溶液．同法制成缺丹参阴性样品溶液．取丹酚酸 B 对照品，加体积分数 75%甲醇制成每 1 mL 含 2 mg 的对照品溶液．照薄层色谱法(中国药典 2010 年版 一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述 3 种溶液各 3 μL，分 别点于同一硅胶 G薄层板上，以 V环己烷 ∶V二氯甲烷 ∶V丙酮 ∶V甲酸 ∶V冰醋酸 = 2∶4∶2∶2∶1 为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以质量分数 5%三氯化铁乙醇溶液，105 ℃加热至 斑点清晰．供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点．结果见图 2． 2． 3 白芍的薄层色谱鉴别［1］ 取本品 1 g，加稀乙醇 20 mL，超声处理 30 min， 过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇 1 mL使溶解，作为供试 品溶液．同法制成缺白芍阴性对样品溶液．另取芍药 苷对照品，加乙醇制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为 对照品溶液．照薄层色谱法(中国药典 2010 年版一 部附录Ⅵ B)试验，吸取上述 3 种溶液各 10 μL，分 别点于硅胶 G 板薄层板上，以 V三氯甲烷 ∶V乙酸乙酯 ∶V甲醇 ∶V甲酸 = 40∶5∶10∶0. 2 为展开剂，展开，取出，晾干，喷 092 暨南大学学报(自然科学版) 第 33 卷 以质量分数 5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色 清晰．供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的蓝紫色斑点．结果见图 3． 1 － 3．供试品;4．丹酚酸 B对照品;5．缺丹参阴性对照 图 2 丹参的薄层色谱 1 － 3．供试品;4．芍药苷对照品;5．缺白芍阴性 图 3 白芍的薄层色谱 2． 4 测定 (1)色谱条件与系统适用性条件［1］ 以十八烷 基硅烷键合硅胶为填充剂;以 V乙腈 ∶ V0. 1%磷酸溶液 = 13∶87 为流动相;流速 1. 0 mL /min;柱温 30 ℃;进样 量 10 μL;检测波长为 230 nm;理论板数按芍药苷峰 计算应不低于 3 000． (2)对照品溶液的制备 精密称定芍药苷对照 品适量，加甲醇制成每 1 mL含 60 μg的溶液，即得． (3)供试品溶液的制备 取本品 0. 5 g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇 50 mL，称定 质量，超声处理 30 min，放冷，再称定质量，用稀乙醇 补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得． (4)缺白芍阴性样品溶液的制备 按制剂工艺 制备不含白芍的样品，同供试品溶液的制备方法得 阴性样品溶液． (5)专属性考察 分别精密吸取对照品溶液、 供试品溶液、阴性样品溶液各 10 μL，注入液相色谱 仪中，按 2． 4(1)节项下色谱条件测定，试验结果见 图 4．结果表明，阴性样品溶液色谱图中与对照品位 置处无干扰，此法可行． A．对照品 B．样品 C．阴性样品;1．芍药苷 图 4 疏郁复方颗粒中芍药苷含量测定 HPLC (6)线性关系考察 精密称取芍药苷对照品， 加稀乙醇制成每 1 mL含 1. 20 mg的对照品储备液． 分别精密量取上述储备液 1. 0、1. 5、2. 5 至 50 mL量 瓶中，另精密量取储备液 1. 0、2. 5、5. 0 mL，至 10 mL 量瓶中，以上 6 份对照品溶液分别加稀乙醇稀释至 刻度，摇匀，使其质量浓度分别为 0. 023 78、0. 035 67、0. 059 44、0. 118 89、0. 297 22、0. 594 44 mg· mL －1的溶液．分别精密吸取以上 6 个不同质量浓度 192第 3 期 李淑琴，等:疏郁复方颗粒的质量标准 的对照品溶液 10 μL，注入色谱仪，以峰面积(Y)为纵 坐标，对照品质量浓度(X)为横坐标，进行线性回归，得 回归方程为:Y =207. 85X －0. 605 3，r =0. 999 9．结果表 明芍药苷对照品在 0. 023 78 － 0. 594 44 mg·mL －1 线性范围内与锋面积呈良好的线性关系． (7)仪器精密度试验 精密量取 2． 4(2)节项 下取芍药苷对照品溶液进样 10 μL，连续进样 5 次， 记录峰面积，根据所得峰面积值计算，相对标准偏差 RSD为 0. 44%(n = 5) ，表明仪器精密度良好． (8)稳定性试验 分别取同一供试品溶液(批 号:111206) ，精密吸取 10 μL，按上述色谱条件 0、3、 11、15、22 h时间测定芍药苷的含量，考察样品溶液 的稳定性，计算相对标准偏差．结果显示同一供试品 溶液在 0 ～ 22 h 内不同时间测定，峰面积值无明显 变化，RSD为 0. 52%表明供试品溶液中芍药苷含量 在 22 h内稳定． (9)重复性试验 精密称取样品(批号: 111206)的样品 6 份，按 2． 4(3)节项下操作制成供 试品溶液，精密吸取 10 μL注入高效液相色谱仪，测 定峰面积，计算本品 1 g中芍药苷的含量，并计算相 对标准偏差 RSD为 1. 16%，表明重复性较好． (10)加样回收试验 采用加样回收法，取己知 含量样品(批号:111206)6 份，每份 0. 25 g，精密称 定，分别精密加入 0. 040 8 mg /mL 的芍药苷对照品 溶液 50 mL，按供试品溶液制备方法处理，并按上述色 谱条件测定，以下式计算回收率． 平均回收率为 100. 46%，RSD为 1. 25%，回收率良好．结果见表 1． 表 1 芍药苷的测定回收率结果 样品 m取样量 /g m样品 /mg m添加芍药苷 /mg m实测芍药苷 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /% 1 0． 252 6 1． 654 2 1． 968 6 3． 591 8 98． 426 2 0． 250 4 1． 639 8 1． 968 6 3． 642 7 101． 741 3 0． 254 0 1． 663 4 1． 968 6 3． 639 0 100． 355 100． 46 1． 25 4 0． 257 9 1． 688 9 1． 968 6 3． 692 1 101． 755 5 0． 249 7 1． 635 2 1． 968 6 3． 600 9 99． 854 6 0． 251 8 1． 649 0 1． 968 6 3． 629 5 100． 604 2． 5 样品测定结果 分别精密吸取 2． 4(2)节项下对照品溶液及 3 批供试品溶液各 10 μL，依上述色谱条件测定，每批 平行测定两次，记录峰面积，计算含量．结果见表 2． 表 2 样品中芍药苷测定结果 批号 w /(mg·g －1) w平均 /(mg·g －1) RSD /% 111206 6． 790 6． 774 0． 33 6． 758 111213 － 1 5． 998 5． 984 0． 34 5． 969 111213 － 2 6． 330 6． 312 0． 41 6． 293 3 讨论 3． 1 首乌藤的薄层色谱鉴别 2010 版药典［1］对首乌藤定性鉴别项下采用加 乙醇加热回流 1 h 提取，提取方法较为复杂，通过实 验摸索，本制剂对首乌藤的鉴别采用超声处理．大黄 素以盐的形式存在，在提取时可用酸水解使之游 离［2］．所以，在本制剂中，供试品制备时加入少量盐 酸，提高其提取效率． 大黄素在乙醇中溶解性较好， 但提出的杂质较多，通过实验摸索，采用乙醚提取时 供试品中杂质较少，色谱斑点清晰，分离效果较好． 因此，制剂中首乌藤定性鉴别采用乙醚为溶剂提取 供试品． 3． 2 丹参的薄层色谱鉴别 本制剂提取工艺为水提，丹参在水提液中的主 要成分为丹酚酸 B．丹酚酸 B 含量的高低与加热温 度、加热时间密切相关，在较低温度(70、80 ℃)时含 量较高［3］． 2010 版药典中丹参定性鉴别项下供试品 制备主要采用加热回流方式，由于回流温度过高，丹 酚酸 B 容易被破坏，因此，薄层鉴别时斑点不清晰． 此外，丹酚酸 B 在水中容易水解，而在酸性条件下 (pH =2)时较稳定［4］．所以，在本制剂中丹参薄层鉴 别供试品制备时，加稀盐酸调节溶液的 pH 值到 2． 292 暨南大学学报(自然科学版) 第 33 卷 参考文献［5］中丹酚酸 B 的纯化方法，最后确定采 用乙酸乙酯振摇提取两次，分取乙酸乙酯层作为供 试品溶液．丹参薄层鉴别所用的展开系统多为甲苯 系统［6 － 7］、三氯甲烷系统［8］，甲苯、三氯甲烷均为对 人体危害较大的试剂． 经过实验摸索，丹酚酸 B 薄 层鉴别采用硅胶 G 板，展开剂系统以 V环己烷 ∶V二氯甲烷 ∶V丙酮 ∶V甲酸 ∶V冰醋酸 = 2∶4∶2∶2∶1 展开效果较好．由于丹 酚酸 B含酚羟基，故增加质量分数 5%三氯化铁乙 醇溶液显色． 3． 3 白芍的薄层色谱鉴别 参考 2010 版药典中白芍的定性鉴别项下振摇 提取法制备供试品溶液，结果色谱斑点不清晰．超声 提取技术省时、低温提取不会破坏有效成分、提取效 率高且方便操作［9］，因此采用超声提取制剂中芍药 苷;实验摸索中，考察了不同的提取溶剂、不同的提 取时间对芍药苷提取效率的影响，最终确定以稀乙 醇作为提取溶剂，提取 30 min． 通过实验摸索，本质量标准中对首乌藤、丹参、 白芍进行了定性鉴别，结果均显示色谱斑点清晰，且 阴性无干扰，可用于该制剂的定性鉴别．通过对芍药 苷方法学考察，结果显示，该方法色谱峰分离度高， 峰型良好，专属性强，重复性良好，适宜疏郁复方颗 粒中芍药苷的含量测定．总之，该方法快速、准确、重 复性好，可以用于疏郁复方颗粒的质量控制． ［参考文献］ ［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典［M］．一部．北 京:中国医药科技出版社，2010． ［2］ 张新乐，黄泽光，薛晓英，等． 加酸提取何首乌中大黄 素工艺的探讨［J］． 时珍国医国药，2007，18(3) :571 － 572． ［3］ 林 青，黄 琳，肖晓丽，等． 丹参水提液中丹酚酸 B 湿热降解动力学研究［J］． 中国现代中药，2008，10 (8) :29 － 31． ［4］ 郭永学，张 华，董悦生，等． 丹酚酸 B 的水解动力学 及降解机理［C］∥中国药学会学术年会暨第八届中国 药师周论文集，2008，2601 － 2614． ［5］ 陈世敏，胡 盛，李效宽，等． 丹酚酸 B 提取工艺的研 究［J］．中药材，2007，30(4) :477 － 479． ［6］ 王彦英，王 红． 丹参舒心胶囊薄层鉴别方法研究 ［J］． 齐鲁药事，2009，28(11) :661 － 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