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胚胎资料

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胚胎资料人胚胎干细胞研究现状及其应用前景 印生艺印生艺印生艺印生艺 (联系地址:河北科技大学生物科学与工程学院 石家庄050018) 摘要摘要摘要摘要::::胚胎干细胞的研究自上世纪80 年代初期始, 经历了由低等动物、灵长类动物至人类胚胎干细胞研究的过程。从干细胞生物学特性、培养条件到干细胞建系的成功; 从科研服务于人类到由此引...
胚胎资料
人胚胎干细胞研究现状及其应用前景 印生艺印生艺印生艺印生艺 (联系地址:河北科技大学生物科学与工程学院 石家庄050018) 摘要摘要摘要摘要::::胚胎干细胞的研究自上世纪80 年代初期始, 经历了由低等动物、灵长类动物至人类胚胎干细胞研究的过程。从干细胞生物学特性、培养条件到干细胞建系的成功; 从科研服务于人类到由此引发的伦理之争; 从人类干细胞研究给医疗领域带来的广泛应用前景到目前研究尚存在的困难, 比较全面的反映了人类干细胞研究的现状和应用前景。由于胚胎干细胞在揭示生命的奥秘、攻克各种疑难杂症等方面具有极为诱人的前景, 尽管目前还有许多困难, 还存在争议, 如果能够正确引导, 建立相应完善的监管机制, 人胚胎干细胞研究领域的每个进步都将对人类自身发展做出重大贡献。[1] 关键词关键词关键词关键词: 干细胞; 特性; 胚胎;经历; 应用及展望;伦理 Situation of human embryonic stem cell research and its application prospects Abstract: Embryonic stem cell research since the beginning of the last century, the early 80s, experienced by the lower animals, primates to human embryonic stem cell research process. From Stem Cell, stem cell culture conditions to the success of the Department; from research services to the consequent human ethics dispute; from human stem cell research to the medical field to bring a wide range of application prospects difficulties still exist in the current study, reflect a more comprehensive status of human stem cell research and application. Because embryonic stem cells to reveal the secret of life, overcome all kinds of incurable diseases, and so has a very attractive prospect, although there are still many difficulties, is still controversial, if we can correctly guide, a comprehensive monitoring mechanism to establish the corresponding human embryonic stem cells .Each advance in the research field will make a significant contribution to the development of human beings. Keywords: Stem cell; properties; embryos; experience; applications and prospects; Ethics 胚胎干细胞是从囊胚的内细胞群和早期胚胎的生殖腺分离的多潜能细胞。人胚胎干细胞的研究上世纪末至今, 一直是生物医学领域的热点和焦点。它的研究既给医学领域在许多疑难疾病的治疗上带来希望, 同时就其研究是否有悖现有的伦理观念在社会界引发了激烈的争论, 且研究还处于基础阶段, 面临着许多的困难, 离临床应用还有相当长的路要走。 一 胚胎干细胞的生物学特性胚胎干细胞的生物学特性胚胎干细胞的生物学特性胚胎干细胞的生物学特性 胚胎干细胞是从哺乳动物的囊胚内细胞团和原始生殖细胞分离, 经体外培养获得的多潜能的细胞。胚胎干细胞的生物学特性有①全能性。在体外培养 的条件下, 胚胎干细胞可以诱导分化为机体的任何组 织细胞。全能性的标志是细胞面有胚胎抗原和Oct4 蛋白[2]。②无限增殖性。胚胎干细胞在体外适宜条件 下, 能在未分化状态下无限增殖。③胚胎干细胞具有 种系传递的功能。④胚胎干细胞易于进行基因改造操 作。⑤细胚胎干胞保留了正常二倍体的性质且核型正常。 二二二二 人胚胎干细胞研究人胚胎干细胞研究人胚胎干细胞研究人胚胎干细胞研究经历经历经历经历 1981 年美国科学家Evans 和Kanfman 从小鼠胚胎分离出细胚胎干细胞并成功建系, 从此开辟了哺乳动物细胚胎干胞研究的新纪元[3]。1998 年Thomsn 和Gearhrt 利用内细胞团和原始生殖细胞分别建立了人的胚胎干细胞系[4], 这一结果的宣布将胚胎干细胞的研究又掀开了新的一页。1999 年12 月, 美国《科学》杂志公布当年世界科学进展的评定结果, 干细胞研究成果列在举世瞩目的人类基因组工程之前, 名列十大科学进展首位[ 5]。国内在细胞胚胎干方面的综合性研究起步较晚( 1989 年) , 但发展迅速。在基础研究方面, 尚克刚、赖学良等已先后建立了小鼠和兔细胞系[6], 盛惠珍研究小组在国际上首次构建了人- 兔核移植重构胚[7]。在应用研究方面, 著名胚胎工程专家窦忠英的科研小组已第6 次从人类胚胎干细胞中分化诱导得到心脏跳动样细胞团[8]。中国军事医学科学院发现了“人胚胎干细胞素”[9], 用于临床多种疾病的治疗取得了明显效果。 三三三三 胚胎干细胞的应用及展望胚胎干细胞的应用及展望胚胎干细胞的应用及展望胚胎干细胞的应用及展望 1 研究人胚胎发育及疾病的发生此前对人胚胎的了解仅局限于从胚胎组织切片和其他种属胚胎的研究中获取信息, 但人与动物之间在胚胎发育和成体结构上都有很大差别。如今, 可以通过胚胎干细胞建立体外分化模型, 并建立各种基因改变的胚胎干细胞系, 以求发现某些基因或细胞因子在胚胎发育早期对不同类型细胞或组织分化的作用[10]。 2 用于移植治疗在组织工程中以胚胎干细胞作为种子细胞, 可以为临床的细胞、组织、器官移植提供大量的材料。通过控制胚胎干细胞生长环境、向胚胎干细胞转染某一种系细胞形成决定基因等, 可获得特定种系的较纯化的细胞, 并且数量不受限制[11]。将这些细胞用于移植治疗, 将给帕金森氏病、脊髓损伤、糖尿病、心肌损伤、肝硬化、肾衰竭、各种血液疾病等疑难病症的治疗带来新的希望[12]。 3 用于基因治疗利用基因打靶技术使外源性DNA 与胚胎干细胞中的相应部分重组, 或靶向破坏等位基因造成基因纯合失效来治疗某些遗传性疾病, 具有基因转移效率高、易于操作的优点。[13] 4 用于药物筛选和药物开发新药在临床使用前需要进行一系列的检测和实验, 这些实验都依靠动物来完成。但是动物模型实验不可能完全反映药物对人体细胞的作用。胚胎干细胞或许能模拟体内细胞或组织对被检测药物的反应, 从而提供更安全、更有效、更经济的药物筛选模型[14]。 四四四四 胚胎干细胞系的建立胚胎干细胞系的建立胚胎干细胞系的建立胚胎干细胞系的建立 胚胎干细胞的来源胚胎干细胞有以下几个来源:①从发育良好的囊胚中分离内细胞群细胞。②从5~9周的胚胎生殖腺中分离胚胎干细胞。③利用克隆技术( 治疗性克隆) 获得。即将体细胞核移植到去核卵母细胞中, 使之发育成囊胚, 再分离其内细胞群细胞。 胚胎干细胞的体外培养及鉴别培养条件: 需要特殊的培养液; 饲养细胞( 人或胚鼠的成纤维细胞) ; 需要加入白血病抑制因子抑制分化。鉴别特点: ①细胞内碱性磷酸酶活性高。②端粒酶活性高。③不被Hoechsy33342 和Rhodamine123 染色。④细胞表面有特殊标记。⑤能分化成3 个胚层的细胞。⑥可诱导分化为各种成体干细胞。 五五五五 胚胎干细胞研究与伦理胚胎干细胞研究与伦理胚胎干细胞研究与伦理胚胎干细胞研究与伦理 1 如何看待胚胎 首先, 胚胎是否就是人? 国内国家人类基因组南方研究中心伦理委员会的专家们认为,人类胚胎干细胞研究在遵循“行善和救人、尊重和自主、无伤和有利、知情同意、谨慎和保密”等伦理原则下, 在反对克隆人、支持治疗性克隆研究等伦理下, 赞同“对14 d 以内的人类胚胎可以用于实验研究”的观点[14 ]。他们指出, 14 d 以内的人类胚胎还只是一个球状的胚泡, 尚属一般性的生物细胞, 没有神经系统, 既无知觉也无感觉, 还称不上道德意义上的人。但是由于法律、宗教和历史等诸多原因, 宗教文化浓厚的国家普遍认为人类胚胎就是人之始。其次, 胚胎的来源是否合乎法律和道德? 胚胎的来源大约有3 种途径: ①自然流产或人工流产的胚胎。②辅助生殖剩余的胚胎。③用体细胞核移植技术产生的胚胎。那么何种途径是既合法又符合道德规范的, 这也是难以把握的。 2 人类胚胎干细胞研究是否会滑向生殖性克隆 1996年7 月5 日, 绵羊“多莉”的诞生曾引发了一场有关克隆人的可能性之争。比较而言, 胚胎干细胞研究引起的伦理争论比克隆羊更为激烈, 那就是人类胚胎干细胞研究是否会滑向生殖性克隆? 目前开展的胚胎干细胞研究, 事实上与生殖性克隆的原理相同, 胚胎干细胞的研究与生殖性克隆仅是一步之遥。可以说人类胚胎干细胞研究正于造福人类和给人类带来不测之祸的交叉路口。但作者认为, 只要人类遵循尊重科学,尊重生命, 遵守道德规范, 那么该项研究带给人类的肯定是福音。 综上所述, 由于胚胎干细胞在揭示生命的奥秘、攻克各种疑难杂症等方面具有极为诱人的前景, 尽管还有许多困难, 人们还有很大的担忧, 如果能够正确引导, 建立相完善的监管机制, 人胚胎干细胞研究领域的每个进步都将对人类自身发展做出重大贡献。展望本世纪, 将是生物医学工程高度发展的世纪, 人胚胎干细胞研究将推动生物医学深刻革命, 给人类带来更多的福音。 【1】 李芳兰,张国贞,人胚胎干细胞研究现状及其应用前景.中国组织工程研究与临床康复2007;11(3):567-569 【2】 周作民.人胚胎干细胞研究进展[J ].生殖与避孕,2004,24(5): 1-3 【3】 王春雨,贾占生.核移植胚胎干细胞的研究及其应用前景[J ].生物化学与生物物理进展,2005,32(3): 199-203 【4】 Thomson JA, Itskovitz EJ , Shapiro SS, et al. Embryonic s tem cell line derived from human blas tocys ts . Science 1998;282(5391):1145-1147 【5】 Evans MJ , Kaufman MH. Es tablishment in cultre of pluripotential cell from mouse esbryos . Nature 1998;292(4096):154-159 【6】 王志华.胚胎干细胞研究进展[J ].中国小儿血液,2005,10(6): 89-91 【7】 张军强. 胚胎干细胞的研究进展[J ]. 国外医学:妇产科学分册,2004,31(5):277-279 【8】 龙伟,石国庆.动物胚胎干细胞的研究进展[J ].草食家蓄, 2005, 30(2): 1-4 【9】 Solter D, Gearhard J . Enhanced: putting s tem cells to work. Science 1999;283(5407):1468-1470 【10】 Marshall E. Claim of human-com embeyo greeted with skepticism. Science 1998;282(5406):1390-1399 【11】 柯利白.胚胎干细胞的研究进展与前景[J ].草食家蓄,2004,31(3): 12-14 【12】 白雪涛. 人类胚胎干细胞研究的伦理思考[J ]. 甘肃社会科学,2005,52(1):169-172 【13】 胡亚利,徐运.胚胎干细胞的研究进展[J ].医学研究生报,2005,28(1): 77-80 【14】 岳丽铃,于海涛.胚胎干细胞的研究现状及临床应用前景[J ].中国优生与遗传杂志,2005,13(1): 4-5 胚胎工程之胚胎分割 生科生科生科生科L081L081L081L081张超张超张超张超 08L030411508L030411508L030411508L0304115 (联系地址:################## 石家庄050018) 摘要摘要摘要摘要::::胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术,胚胎工程技术内容丰富,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎,还需移植到雌性动物体内生产后代,以满足人类的各种需求。 关键词关键词关键词关键词:::: 胚胎工程;胚胎分割 胚胎工程技术广泛用于生殖生物学、胚胎学、发育生物学、遗传育种学和生殖医学的研究应用,并成为这些研究领域的重要技术手段。目前在生产上应用较多的是动物繁殖控制技术,包括人工受精技术、试管家畜技术、胚胎分割技术等。胚胎工程是生物技术的重要组成部分,它的研究和应用不仅推动了制药、器官移植医学等领域的变革,而且还加速了畜牧业生产的发展。目前我国在胚胎移植改良牛、羊品种,体细胞克隆牛、羊等家畜的技术方面已经进入国际先进行列。 从本世纪的三十年代起,胚胎工程技术就逐步成功地应用于畜牧业生产,尤其是在优良种畜的引进、品种的保存、种畜的迅速扩繁、品种的改良和濒危动物的保护等方面发挥了极其重要的作用,极大地提高了畜牧生产的科技水平,产生了巨大的经济效益和社会效益。胚胎工程主要是对哺乳动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作,然后让它继续发育,获得人们所需要的成体动物的新技术。实际上是动物细胞工程的拓展与延伸。早在1891年,英国剑桥大学的赫普就在兔子身上首次成功地进行了受精卵的移植实验。到本世纪30年代,这项技术已在畜牧业上获得了越来越明显的效益。进入70年代,出现了专门从事受精卵移植的企业。高等动物的受精卵移植又叫“家畜胚胎移植”。它是将优良种畜的早期胚胎从供体母畜体中取出来,移到受体母畜输卵管或子宫中,“借腹怀胎”繁殖优良牲畜的技术。 为成倍甚至成数倍地提高优良胚胎移植后所得到的成体数,用显微外科的手术将一个胚胎分割为2个或多个,制造同卵多仔。国内外科学家们已在鼠、兔、牛、羊、猪的胚胎分割上取得了成功,这一技术成为胚胎分割 胚胎分割(Embryo bisection)是指借助显微操作技术或徒手操作方法切割早期胚胎成二、四等多等份再移植给受体母畜,从而获得同卵双胎或多胎的生物学新技术。由于来自同一胚胎的后代有相同的遗传物质,因此 胚胎分割可看成动物无性繁殖或克隆的方法之一。胚胎分割技术可用于扩增可用的优良胚胎的数目和生产同卵双胎、同卵多胎的克隆动物,可用于濒危动物的保护,也可为早期胚胎遗传疾病的检查和性别鉴定等技术提供一种活 体组织检查的方法。 1.胚胎分割的研究概况 早在1904年,Spemann就进行了蛙类2细胞胚胎的分割实验,并获得同卵双生后代。20世纪30年代,Pincus等首次证明2细胞兔胚的单个卵裂球在假孕受体兔体内可发育为体积较小的胚泡。哺乳动物胚胎分割技术始于Nicholas( 1942) 对大鼠22细胞胚胎卵裂球的分离和培养研究。其后,1959 年Tarkow ski研究了小鼠1/4 ,2/4 ,3/4 卵裂球的发育规律,得到了世界上首例半胚来源的活体动物。20世纪70年代以来,随着胚胎培养及移植技术的发展和完善,哺乳动物胚胎分割取得了突破性进展。1979年,Willadsen等通过分离2细胞胚胎的卵裂球,也获得绵羊同卵双生后代。20世纪80年代以后,哺乳动物胚胎分割技术进人快速发展时期。1998 年,Rho 等又利用卵母细胞体外培养成熟、体外受精的方法获得了牛胚胎,移植12 枚四分胚给6 头受体,获得2 头四分胚的犊牛,这是第一次利 用体外胚分割 得到活体后代。当然,胚胎并不是随着分割次数的增加,产生的克隆动物就越多。如果超过四分割以上则产生的克隆动物个体数可能反而减少,甚至一个也得不到。为了使胚胎分割技术更便于在生产中推广应用,一些学者开始对这种显微操作技术加以改进,简化其方法并避免使用昂贵仪器,而采用在体视显微镜下徒手操作的简易方法进行胚胎分割。1988 年Williams 用止血钳夹住用刮胡刀片制成的显微手术刀片分割7龄牛胚得到了同卵双生牛犊。 我国家畜胚胎分割及相关的研究工作,自20世纪80年代晚期以后进展也很快。1986 年窦忠英等得到了国内首批分割胚牛犊(单生) ,该实验将分割所得的半胚装入透明带后移植受体与裸胚直接移植受体的产仔率均为25 %。谭丽玲等(1988年)对兔胚胎进行了半胚分割,并获得仔兔。1989年,江苏农科院、中科院遗传所获得山羊鲜胚分割羔羊;同年,张涌等也获得了山羊鲜胚和冻胚分割羔羊;此外,我国的研究人员也把胚胎分割与胚胎性别鉴定有机结合,推动了胚胎分割的深人研究和推广。 2.胚胎分割原理 早期实验胚胎学的研究发现,大多数哺乳动物的胚胎发育是调整发育,即去掉一个早期胚胎的一半,剩余的部分可以调整其发育方向,仍可以发育为一个完整的胚胎。反之,若把两个早期胚胎融合在一起,它们不是发育为两个连在一起的胚胎,而是在细胞间重新调整,仍发育为一个胚胎。但随着发育进程,其调整能力逐渐减弱,细胞的组织发育方向变得越来越固定,直到调整能力完全丧失。 早期的实验胚胎学证明哺乳动物2细胞期的每个卵裂球都具有发育为正常胎儿的“全能性”。对小鼠胚胎分割的实验认为,在32 细胞期的胚胎仍具有调整能力,但到64 细胞期的胚胎就逐渐失去这种能力。到神经轴时期的胚胎,再分割为两半,就永远不会发育为正常的胚胎了【1】。 3.胚胎分割方法 3.1毛细管吹吸法 该方法主要适用于分离2细胞到8细胞期卵裂球。在显微操作仪的帮助下,在无钙、镁离子的培养液中,用固定针吸住胚胎,用另一玻璃针挑开胚胎的透明带,细胞团自透明带中脱出。再用仅能通过胚胎的毛细管吹吸胚胎,得到单个卵裂球,再将卵裂球装入空的透明带中,体外培养至一定时期,移植入受体中。 3.2徒手分割法 该法主要适用于分割体积较大的胚胎,其优势在于可以不用显微操作仪。在立体显微镜下,用止血钳夹住切割刀片,将透明带切开一部分,再用直径略小于胚胎的毛细管吹吸几次,胚胎从透明带中脱出。手持玻璃针自上而下对称切割裸胚。这种方法多用于分割桑葚胚和囊胚。 3.3显微手术法 这种方法主要适用于分割桑堪胚和囊胚。在显微操作仪的帮助下,以固定针吸住胚胎,用玻璃针或显微手术刀将胚胎对称切割。在切割桑葚胚时,需要在不含钙、镁离子的培养液中,以降低细胞间的连接,降低由于切割造成的损伤。对胚胎的分割要注意对称,尤其是囊胚,要注意将内细胞团对称地一分为二。但这种方法与徒手分割相比无论切割有效率还是移植产羔率都是最低的。并且玻璃针带内切割需要昂贵的显微操作系统,因此这种切割方法在实践中很难得到推广应用【2】。 3.4酶消化法去透明带后分割法 3.5免疫手术法4.胚胎分割操作流程 胚胎分割可在哺乳动物2细胞期至胚泡期的胚胎进行。主要由胚的采收、用显微手术进行胚的分离、分离胚(裂球)的培养、分离胚的移植等4步组成。 5.胚胎分割技术的应用及意义 利用胚胎分割技术,取出着床前胚胎的单个卵裂球或取出滋养层细胞的一部分进行生化检验、PCR 扩增和性别鉴定以检测蛋白质或酶水平的生化缺陷、特定基因的缺失及伴性遗传病,以便在着床前决定是否终止妊娠,这对于优生优育有重要意义。世界首例胚胎分割--性别鉴定试管水牛在广西水牛研究所水牛场出生。胚胎分割技术经过近20年的发展,在理论和技术方法上都已经日趋完善, 对畜牧业生产和试验研究有着特殊的作用,尤其是对大型农场动物进行良种繁殖时,可用胚胎分割方式增加胚胎数目及人造同卵双胎和多胎数目,移植后便可获得更多的良种。哺乳动物胚胎冷冻保存技术与胚胎分割技术结合,可以增加胚胎数目和提高产犊率, 同时在加速家畜育种改良进程、建立基因库、保护资源等都有重要的意义。 参考文献参考文献参考文献参考文献 【1】陈品健.普通动物学[M].北京:科学出版社,2001,P:461. 【2】应璐祺,王争光,俞颂东.山羊早期胚胎切割技术比较试验[J].上海畜牧兽医通讯,2006,4:24225
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