地洛他定片对变应性鼻炎病人鼻分泌物中神经生长因子影响的研究

第16卷第12期 中国现代医学杂志 Vol.16No.12 2006年6月 ChinaJournalofModernMedicine Jun.2006 地洛他定(去羧氯雷他定)是氯雷他定的主要 活性代谢产物,它除了能十分有效且极具选择性地 拮抗H1受体以外,还具有独特的抗变态反应和抗 炎作用[1]。临床研究发现:地洛他定片对变应性鼻炎 有良好的治疗作用[2]。我们在前期的研究中证实:神 经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)在变应性鼻 炎动物模型及病人鼻黏膜中的达均有增强[3,4]。那 么地洛他定片对变应性鼻炎进行治疗后,NGF的含 量是否有变化?NGF含量的变化与变应性鼻炎病人 症状的改善之间有无相关性?为此,我们对此问题 进行了探讨。 1 材料与方法 1.1 研究对象 文章编号: 1005-8982(2006)12-1878-03 地洛他定片对变应性鼻炎病人鼻分泌物中 神经生长因子影响的研究 谢志海 1,蒋卫红 2,赵素萍 2,王承龙 2,李彦华 1 (1.新疆医科大学附属中医医院 耳鼻咽喉科,新疆 乌鲁木齐 830000; 2.中南大学湘雅医院 耳鼻咽喉科,湖南 长沙 410008) 摘要:目的 探讨地洛他定片对变应性鼻炎病人鼻分泌物中神经生长因子含量的影响情况。方法 采用成 组设计的方法,分别比较试验前、试验后两组间鼻分泌物中NGF的含量(ELISA法),并对NGF下降指数与症 状体征下降指数进行相关性分析。结果 试验后两组间鼻分泌物中 NGF含量的差异有显著性 (P<0.001); NGF下降指数与症状体征下降指数之间呈正相关关系(r=0.876,P<0.001)。结论 NGF的含量减少可能是 地洛他定片治疗变应性鼻炎过程中的一个作用因素。 关键词: 变应性鼻炎;神经生长因子;酶联免疫吸附试验;地洛他定 中图分类号: R765.21 文献标识码: B Effectofdesloratadineonnervegrowthfactorlevelinnasal dischargeofpatientswithallergicrhinitis XIEZhi-hai1,JIANGWei-hong2,ZHAOSu-ping2,WANGChen-long2,LIYan-hua2 (1.DepartmentofOtolaryngology,AffiliatedTraditionalChineseMedicalHospital,XinjiangMedical University,Urumqi,Xinjiang830000,P.R.China;2.DepartmentofOtolaryngology,Xiangya Hospital,CentralSouthUniversity,Changsha,Hunan410008,P.R.China) Abstract:【Objective】ToassesstheeffectofdesloratadineonNGFlevelinnasaldischargeofpatientwithal- lergicrhinitis.【Methods】TheNGFlevelinthenasaldischargeofexperimentgroupandthecontrolledgroupwas testedbyELISA,andcomparedforsignificantdifferencesbeforeandaftertheexperiment.Thecorrelationbetween descentindexofNGFandthatofsymptomandsignwasanalyzed.【Results】TheNGFlevelinnasaldischargein desloratadinegroupsignificantlydecreasescomparedwiththatincontrolgroup(P<0.001).Therewaspositivecorre- lationbetweendescentindexofNGFandthatofsymptomandsignofpatients(r=0.876,P<0.001).【Conclusion】 DecreaseofNGFmaybeaneffectivefactorofdesloratadineintreatingwithallergicrhinitis. Keywords:allergicrhinitis;nervegrowthfactor;ELISA;desloratadine 收稿日期:2005-07-21 [作者简介]谢志海,中南大学湘雅医院援疆干部 1878· · 第12期 谢志海,等:地洛他定片对变应性鼻炎病人鼻分泌物中神经生长因子影响的研究 按照1997年海口,以2004年3月～9月 间就诊于中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科的变应性鼻 炎病人为研究组,共42例。其中,男21例,女21例; 年龄18～59岁,平均32.5岁。给予地洛他定片(5 mg/d,共服药2周)。以另外10例诊断明确的变应 性鼻炎病人为对照组。其中,男 5例,女5例;年龄 19～58岁,平均33.8岁。给予与地洛他定片外形相 似的赋形剂片(安慰剂)。所有病例至少4周内未接 受抗组胺药、类固醇及色苷酸钠等药物治疗。在试 验开始前和试验结束时分别收集病人的鼻分泌物, 置于-70℃超低温冰箱中待测。 1.2 方法 采用成组设计的方法,分别比较试验前、试验后 两组间鼻分泌物中NGF的含量。为了排除可能存在 的鼻黏膜通透性减小给试验分析带来的影响,以人 血清白蛋白(HSA)作为衡量鼻黏膜通透性的指标, 在检测NGF的同时,对HSA也进行检测,并与NGF 一样进行试验前、试验后两组间的比较。 1.2.1 鼻分泌物收集方法 以镊子夹取1cm×3cm 大小的明胶海绵在直视下放入鼻中隔和下鼻甲之 间,5min后取出,挤压出明胶海绵中的鼻分泌物,测 量体积后,以磷酸缓冲盐溶液(PBSpH7.2)稀释 5 倍,2500g4℃离心 15min,收集上清液,置于 -70℃超低温冰箱中待测。 1.2.2 ELISA法 将标本取出,4℃ 20000r/min离 心 30min,收集上清液使用人 NGF及 HSA定量 ELISA试剂盒(上海森雄科技实业有限公司)进行 NGF含量的测定。试验步骤按试剂盒说明进行。 1.3 统计学处理 1.3.1 采用SPSS11.0统计软件进行分析。所有数 据均采用均数±标准差(x±s)表示。组间均数比较 时进行正态性检验和方差齐性检验后采用成组t检 验。双侧P<0.05为差异有统计学意义。 1.3.2 按以下公式计算出 NGF含量的下降指数及 变应性鼻炎病人症状体征积分下降指数,采用SPSS 11.0统计软件进行两者之间的相关性分析。 NGF含量下降指数=用药前NGF含量-用药后NGF含量 用药前NGF含量 症状体征积分下降指数=用药前总积分-用药后总积分 用用药前总积分 2 结果 2.1 两组病例人口统计学和其他基线特征比较 统计分析显示:治疗前试验组与对照组在性别、 年龄、身高、体重、心率、血压、病史和各临床症状等 方面均无统计学上的差异,说明两组间具有良好的 可比性,见表1。 表1 治疗前两组基础数据的比较 (x±s) 续表1 治疗前两组基础数据的比较 (x±s) 计数指标的两组比较用确切概率法计算。 计量指标的两组比较用t检验,其检验统计量为t。 组别 年龄(岁) 身高(cm) 体重(kg) 心率(次/min) 收缩压(mmHg) 舒张压(mmHg) 病史(年) 喷嚏 对照组(n=10) 33.80±7.69 162.40±9.10 57.20±8.39 75.92±7.07 115.00±10.00 80.00±9.43 5.40±5.99 2.40±0.70 试验组(n=42) 32.48±11.81 163.71±7.29 56.88±8.55 76.48±6.11 112.88±8.11 75.24±7.73 5.17±4.34 2.38±0.62 t值 0.337 0.488 0.106 1.379 0.710 1.679 0.142 0.085 P值 0.738 0.627 0.916 0.174 0.481 0.099 0.888 0.933 组别 流涕 鼻塞 鼻痒 眼部症状 鼻黏膜体征 总分 对照组(n=10) 2.40±0.70 2.00±0.67 1.50±0.70 0.70±0.82 1.90±0.57 10.90±1.79 5(19.2) 5(19.2) 试验组(n=42) 2.26±0.63 2.14±0.57 1.00±1.01 0.38±0.66 2.21±0.52 10.38±2.19 21(80.8) 21(80.8) t值 0.613 0.693 1.474 1.309 1.690 0.696 P值 0.543 0.491 0.147 0.197 0.097 0.490 1.000 性别(例,%) 男 女 2.2 试验前、试验后两组间HSA及NGF的比较 从表 2可以看出试验前及试验后两组间 HSA 值差异均无显著性。试验前两组间鼻分泌物中的 NGF含量差异无显著性,但试验后两组间鼻分泌物 中NGF含量的差异有显著性。 2.3 试验组NGF含量的下降指数与症状体征积分 下降指数之间的相关性分析 如附图所示,试验组NGF含量的下降指数与症 状体征积分下降指数之间呈显著正相关关系 (r= 0.876,P<0.001)。 1879· · (下转第1882页) 表2 试验前、试验后两组间HSA及NGF的比较表 (x±s) 附图 NGF含量的下降指数与症状体征积分下降指数之间 的相关性 3 讨论 结果显示试验前及试验后两组间 HSA值无显 著性差别,提示试验前及试验后两组间鼻黏膜的通 透性差异均无显著性。试验前两组间鼻分泌物中的 NGF含量差异无显著性,但试验后两组间鼻分泌物 中 NGF含量的差异有显著性,说明:在两组鼻黏膜 的通透性无明显差别的情况下,地洛他定组病人鼻 分泌物中NGF的含量较对照组减少。相关性分析显 示,NGF下降指数与症状体征下降指数之间呈正相 关关系,提示:随着变应性鼻炎病人服药后鼻分泌物 中NGF含量的下降,其症状和体征有好转的趋向。 那么服用地洛他定片后病人鼻分泌物中 NGF 含量减少的可能机制是什么呢?地洛他定是氯雷他 定的主要活性代谢产物,是一种新型高效、选择性强 的H1受体拮抗剂[1]。但是,单纯用拮抗H1受体来解 释NGF含量减少的机理是不尽合理的。因为拮抗了 H1受体虽然阻断了组胺的生理作用,可以缓解变应 性鼻炎的许多症状,但是迄今为止并没有发现 NGF 的产生与组胺有直接的联系。 地洛他定独特的抗炎作用似乎可更好地解释 NGF含量减少的机制: 体外试验,地洛他定除了能抑制人嗜碱性 粒细胞释放组胺和 LTC4外,还能更有效地减少 IL-4和IL-13的产生[5]。而免疫学研究表明,IL-4是 变应性鼻炎发病的关键性因子。它不但可诱发胚系 的ε基因转录使B细胞朝IgE方向转型,而且也是 肥大细胞生长因子,与IL-3协同能促进肥大细胞增 殖与分化。它还可增加血管细胞粘附分子-1 (VCAM-1)在内皮细胞的表达,进而促进炎症细胞 在局部浸润。 研究表明,在地洛他定的作用下,人肥大细胞株 和嗜碱性粒细胞株分泌 TNF-α、IL-3、IL-6、IL-8 和GM-CSF减少[6]。这是很有临床意义的,因为IL-3 可促进肥大细胞增殖,导致肥大细胞数量增加,并有 激活巨噬细胞的作用;IL-6能促进B细胞增殖分化 和分泌抗体,对 T淋巴细胞具有广泛效应,并可正 向调节 IgE的生成与活性;IL-8是一种炎症介质, 是已发现的趋化因子中最强的一种,它能激活中性 粒细胞趋化、脱颗粒、释放超氧化物和溶酶体,增加 粘附分子的表达,同时对淋巴细胞和单核细胞的集 中起作用,并刺激嗜酸性粒细胞释放组织胺; GM-CSF可诱导粒细胞、巨噬细胞的增生和分化,它 与IL-5在嗜酸粒细胞的产生、活化方面协同作用, 它还具有延长嗜酸性粒细胞生存期的作用,能使其 数目增加,同时能激活巨噬细胞;TNF-α 能趋化嗜 酸粒细胞和嗜中性粒细胞向内皮细胞迁移,诱导血 管内皮细胞和成纤维细胞合成CSF,它还能增强呼 吸道VCAM-1的表达,促进炎性细胞包括嗜酸性粒 细胞粘附于血管内皮细胞,渗入鼻黏膜组织,引起鼻 变应性炎症的发生。因此,这些细胞因子的减少可 有力地减少炎性细胞的浸润及活化。 地洛他定还能够抑制鼻黏膜细胞表达细胞间粘 附分子-1(ICAM-l),抑制人支气管上皮细胞释放 IL-8和可溶性ICAM-1[7]。ICAM-1在变态反应性炎 症中主要通过与其配体———淋巴细胞功能相关抗原 -1(lymphocytefunction-associatedantigen,LFA-1) 结合,使T细胞粘附于抗原提呈细胞、内皮细胞、上 皮细胞和各种靶细胞,进而使嗜酸性粒细胞等选择 性聚集于炎症和免疫反应局部,引发变态反应的发 生和发展。因此,抑制ICAM-1在鼻黏膜上皮中的表 达可以减少炎性细胞的浸润,从而减轻炎症反应。 近年的研究发现,除了神经胶质细胞、少突胶质 细胞等神经系统的附属细胞外,肥大细胞、嗜酸性粒 细胞和 CD4+T细胞及某些 B细胞均可产生和释放 NGF。因此,地洛他定可能通过减少IL-4、IL-6、IL-8 或IL-13的产生、抑制 ICAM-l、TNF-α 和 GM-CSF 等的表达,减少肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒 细胞、CD4+T细胞等的黏附、浸润及活化,从而进一 组别 HSA(μg/mlL) NGF(pg/mL) 试验前 试验后 试验前 试验后 对照组(n=10)14.97±1.10 14.30±0.93 117.59±4.36100.86±3.99 试验组(n=42)15.48±0.84 14.40±0.82 115.36±5.3680.60±10.66 t值 1.620 0.343 1.219 9.769 P值 0.112 0.733 0.229 0.000 中国现代医学杂志 第16卷 1880· · !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! (上接第1880页) 步减少NGF的合成和释放。 当然,以上许多试验还只在体外证实,其在人体 内的机理还有待广泛临床应用后加以进一步验证。 参 考 文 献: [1]GEHARS,MELTZEREO.Desloratadine:Anew,nonsedating,oral antihistamine[J].JAllergyClinImmunol,2001,107(4):751-762. [2] SALMUNLM, LORBERR. 24-hourefficacyofonce-daily desloratadinetherapyinpatientswithseasonalallergicrhinitis [ISRCTN32042139][J].BMCFamPract,2002,3(1):14. [3]谢志海,赵素萍,王承龙.神经生长因子在变应性鼻炎病人鼻黏膜 中的表达[J].中国耳鼻咽喉颅底外科杂志,2003,9(2):86-88. [3]XIEZH,ZHAOSP,WANGCL.Expressionofnervegrowth Factorinthenasalmucosaofallergicrhinitispatient[J].Chinese JournalofOtorhinolaryngology-SkullbaseSurgery,2003,9(02): 86-88.Chinese [4]赵素萍,周新富.实验性变应性鼻炎鼻黏膜神经生长因子的测定 [J].中华耳鼻咽喉科杂志,2001,36(04):275-277. [4]ZHAOSP,ZHOUXF.Measurementofnervegrowthfactorin thenasalmucosaofexperimentalallergicrhinitis[J].ChinJO- torhinolaryngol,2001,36(04):275-277.Chinese [5]SCHROEDERJT,SCHLEIMERRP,LICHTENSTEINLM,etal. Inhibitionofcytokinegenerationandmediatorreleasebyhuman basophilstreatedwithdesloratadine[J].ClinExpAllergy,2001, 31(9):1369-1377. 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(王荣兵 编辑) 中国现代医学杂志 第16卷 法)肌肝(Cr)(试剂 Randox公司酶法)。尿 mAlb 采用免疫散射比浊法,使用 Beckman公司生产的 Array-360特定蛋白仪及其配套试剂。结果分别以 NAG/Cr、mAlb/Cr表示。 1.4 统计学处理 用SPSS11.0分析软件处理 2 结果 2型糖尿病患者与正常对照组 NAG/Cr和 mAlb/Cr结果,见表1。 表1 2型糖尿病患者中与正常对照组 (x±s) 注:1)与正常对照组比,P<0.001 2)与正常对照组比较,P<0.01 根据2型糖尿病患者中 HbAlc值分为:血糖控 制良好组 HbAlc为 5.79±1.2;血糖控制不良组为 HbAlc9.41±2.47,两组 NAG/Cr和 mAlb/Cr结果见 表2。 表2 血糖控制良好组与血糖控制不良好组 注:1)与正常对照组比较,P<0.05 2)与正常对照组比较,P<0.001 3 讨论 本文实验结果显示 2型糖尿病患者尿 NAG/Cr 水平显著高于对照组 (t=2.42,P<0.001),mAlb/Cr 水平显著高于对照组(t=1.89,P<0.01)。两者异常 率比较差异有显著性(χ2=5.13,P<0.05)。血糖控制 不良组尿NAG/Cr水平显著高血糖控制良好组(t=2. 42,P<0.001),mAlb/Cr水平显著血糖控制良好组 (t=1.89,P<0.05),两者异常率比较差异有显著性 (χ2=5.01,P<0.05)。血糖控制不良组中长期血糖 控制不良不仅引起肾小球损伤并可进一步引起肾小 管损伤,从而使NAG/Cr显著增多。故可知在DN早 期尿 NAG/Cr(46.7%)异常检出率明显高于 mAlb/Cr (28.6%),并且其含量随着病情的加重而增高与病 情严重程度有一定的相关性。长期血糖控制不良引 起肾小管损伤,研究表明尿NAG/Cr对于早期肾小 管损伤有较高的敏感性,是DN早期诊断的一个有 价值的检测指标。 参 考 文 献: [1]孙明谨,曾玉琴,李雪锋,等.糖尿病患者T,B细胞亚群的研究[J].中 国现代医学杂志,2005,15(22):3455-3457. [1]SUNMJ,ZENGYQ,LIXF,etal.StudyofTcellsubsetsand Bcellsubsetsinpatientswithdiabetesmullitus[J].ChinaJournal ofModernMedicine,2005,15(22):3455-3457. (王荣兵 编辑) 组别 例数 NAG/Cr(U/mmol·L) mAlb/Cr(mg/mmoL) 正常对照组 52 0.94±0.28 0.32±0.35 糖尿病组 78 4.38±0.32 0.94±0.42 组别 例数 NAG/Cr(U/mmol·L) mAlb/Cr(mg/mmoL) 正常对照组 52 0.94±0.28 0.32±0.35 1组 2组 35 43 2.21±0.15 5.67±0.53 0.57±0.36 1.12±0.57 1882· ·