牛卵泡抑制素抗体对小白鼠和大白鼠卵巢与子宫的作用

牛卵泡抑制素抗体对小白鼠和大白鼠卵巢与子宫的作用 实 验 研 究 牛卵泡抑制素抗体对小白鼠和 3 大白鼠卵巢与子宫的作用 ) 1 刘曙光杨利国 ()南京农业大学动物繁殖研究室 南京 210095 α 摘 要 从用牛卵泡抑制素- 亚基片段免疫过的健康鸡所产蛋的卵黄液中提取抗体 , 得粗提物 ; 然后用不同剂量的粗提物被动免疫 20 只性成熟小白鼠和 20 只发情周期大白鼠 , 并以生理 盐水处理作为对照 。结果发现 , 小白鼠用 013 ml 抗体处理后 , 卵巢与子宫增重显著高于对照组 ( ( ) ) P < 0105。大白鼠用 016 ml 抗体处理后 , 卵泡平均数显著高于对照组 P < 0105。这些结果表 明 , 牛卵泡抑制素抗体被动免疫对小白鼠和大白鼠的子宫和卵泡发育有促进作用 。因此 , 可用小 白鼠或大白鼠对卵泡抑制素抗体活性进行生物学测定 。 关键词 抑制素 抑制素抗体 被动免疫 小白鼠 大白鼠 ( ) 牛卵泡抑制素 b F I是一种糖蛋白激素 , 由, 关于抑制素生物活性测定 ,提供试验依据 。此外 〔1〕〔5〕 αβ和两个不同的亚单位通过二硫键联结而成。目前还没有统一的或定量单位。大量实验 Ling 等采用肝素 - 琼脂亲和层析等从牛卵泡 表明 , 抑制素免疫猪 、羊等动物后 , 所产生的抗体 () 液中分离出两种形式 A 和 B的抑制素 , 并证实 可中和外周血中的抑制素 , 减弱其对垂体的抑制作 α β 牛卵泡抑制素分子量为 32 KD , 和亚单位分子 〔3〕用 , 从而使 FSH 分泌增加 , 进而促进卵泡发育并 量分 别 为 18 KD 和 14 KD 。Maso n 等通 过 克 隆 提高排卵率 。因此 , 本试验的另一目的 , 是为进一αβcDNA , 生物合成 b F IB 的和亚单位前体 , 并推 αββ导出、和亚单位的肽类一级结构 。证明两种 步完善并建立抑制素生物活性测定方法提供实验依 A B 形式的牛卵泡抑制素都具有同样的生物活性 , 并在 据 。 体内抑制垂体分泌 FSH 。此外 , 抑制素还与下丘 〔4〕 1 与方法脑或更高级中枢神经活动有关。 关于抑制素主动免疫在动物繁殖中的应用 , 近 111 牛卵泡抑制素抗体的提取 十年来国外做了大量的研究 , 特别是在羊上取得了 将 500 ml - 20 ?冷藏的经 b F I 免疫后的卵黄 令人满意的效果 , 但在被动免疫方面的研究报道甚 液溶 于 1 000 ml 18 %硫 酸 钠 溶 液 中 , 搅 拌 均 匀 , α少 。本研究用牛卵泡抑制素亚单位片段免疫健康 静置 1 h , 然后于 3 500 转/ 分离心半小时 , 去掉上 鸡 , 提取卵黄液 , 制备卵黄抗体 , 用来被动免疫小 清液 得 沉 淀 。再 用 18 %硫 酸 钠 溶 液 溶 解 , 搅 匀 , 白鼠和大白鼠 , 观察其对鼠的子宫和卵巢及卵泡发 反复离心 3 次 。最后取硫酸钠沉淀蛋白 , 用水溶 育的影响 , 旨在为用卵泡抑制素抗体被动免疫黄牛 解 , 兑水彻底透析 , 然后浓缩 , 得牛卵泡抑制素抗 和水牛 , 提高牛群繁殖率 , 开发新的繁殖生物技术 ( ) 体 b F IAb220 ml 。 112 实验动物分组与处理 ( 小白鼠试验 取昆明种小白鼠 20 只 购于南 京铁道医学院实验动物中心 , 均为出生后 35 , 40 ) 日龄的雌性鼠, 称重后分为 4 组 , 每组 5 只 。试 3 国家九五重点攻关项目资助 ; ) 1现工作单位 : 广东省英德市畜牧局 。实验过程中得 验 ?、 ?和 ?组每只鼠于腹腔内各注射 b F IAb 稀 到本室王元兴教授 、牛树理研究员的指导和帮助 , 特此致 () 释液 014 ml 分别含 b F IAb 012 , 013 和 014 ml, 谢 。 对照组注射生理盐水 014 ml 。 收稿日期 : 1997 - 12 - 05 ( 大白鼠试验 取 SD 系大白鼠 20 只 购于南 2 结果与 科大学实验动物中心 , 均为出生后 3 月龄左右 ) 211 性鼠, 称重后分为 4 组 。试验 ?、 ?和 ?组小白鼠卵巢和子宫对牛卵泡抑制素抗体的反 , 于腹腔内注射 b F IAb 稀释液 018 鼠在发情期 应 ) () 016 和 018 ml, 分别含 b F IAb014 , 对照组注从表 1 可见 : 1试验 ?组小白鼠的卵巢和子 分别比试验 ?组重 , 与对照 组 相 比 , 差 异 显理盐水 018 ml 。 宫 , ( ) 效果评定 著 。 2卵巢/ 体重比也以试验 ?组最高 , 试验 ? ( ) ( ) , 与 对 照 组 相 比 , 差 异 显 著 P < 0105 。 组其 次 小 白 鼠 在 注 射 抗 体试 验 组 或 生 理 盐 水 ) ( )() 组后 72 h , 大白鼠在注射抗体 试验组3子宫/ 体重比也以试验 ?组最高 , 试验 ?组其 () ( ) 理盐水 对照组后 84 h , 先称体重 , 然后处 次 , 对 照 组 最 低 P < 0101 。以 上 结 果 表 明 , 取其卵巢和子宫 , 剃净粘附组织 , 用分析天平 b F IAb 被动免疫对卵巢和子宫的 增 重 具 有 促 进 作 称重 , 计算卵巢及子宫与体重的比 。用 , 作用强度与 b F IAb 用量有关 。比较本试验所大白鼠卵巢称重后 , 在放大镜下观察并直 用 3 种剂量 , 认为 b F IAb 用量以 013 ml 为宜 , 过 于 018 mm 的卵泡数 。 高或过低均影响卵巢和子宫的发育 。 表 1 bFIAb 对性成熟小白鼠卵巢和子宫增重的影响 ( 平均数 ?标准误) ( )( )( )( ) 别卵巢重 g子宫重 g卵巢体重比 mg/ g子宫体重比 mg/ g 01054 ?01006 1084 ?01014 1264 ?0131 1486 ?0169 023验 ?baba验 ? 01063 ?01006 01118 ?01009 21542 ?0120 41758 ?0128 验 ? 01030 ?01005 01052 ?01016 11244 ?0121 21150 ?0174 照组 01045 ?01006 01046 ?01019 11696 ?0112 11690 ?0159 ( ( ) ) P < 0101。b 与对照组比较 , 统计差异显著 P < 0105。 注 : a 与对照组比较 , 统计差异极显著 大白鼠卵巢和子宫对牛卵泡抑制素抗体的反录卵泡数 。从表 2 可知 , 卵泡数以试验 ?组最高 , ( ) 与对照组相比 , 差异显著 P < 0105 , 表明 b F IB 用各种不同比例的猪卵泡抑制素抗体分别处理抗体可以增加大白鼠的大卵泡数 。 期的大白鼠 , 进行卵巢和子宫的增重试验并记 表 2bFIAb 对发情期大白鼠卵巢和子宫的影响 ( 平均数 ?标准误) ( )( )()( )( ) 别卵巢重 g子宫重 g卵泡数 个卵巢体重比 mg/ g子宫体重比 mg/ g 01071 ?01007 133 ?0110 12 ?210 133 ?0103 159 ?0148 01701验 ?b01077 ?01006 0136 ?0104 0136 ?0120 1164 ?0113 验 ? 2312 ?214 验 ? 01065 ?01004 0135 ?0105 0130 ?0103 1164 ?0122 1716 ?215 01070 ?01005 0151 ?0111 0132 ?0103 2133 ?0145 照组 1410 ?118 ( ( ) ) 注 : a 与对照组比较 , 统计差异极显著 P < 0101。b 与对照组比较 , 统计差异显著 P < 0105。 讨论参 考 文 献 Shetch A R et al1 Interatio n of t hyrot rop hin re2 1 本试验用 b F IB 抗体被动免疫性成熟的小白鼠 leasing ho r mo ne wit h inhibin in male rat s , J 1 En2 情周期的大白鼠 , 发现小白鼠卵巢和子宫的增 docr1 1983 , 98 : 1 - 6 及大白鼠卵泡发育受 b F IB 抗体的显著影响 , Ling N et al1 Isolatio n and partial characterizatio n 可用小白鼠或大白鼠对抗抑制素抗体的促卵泡2 of a M1 32000 p rotein wit h inhibin activity f ro m 作用进行生物学测定 。 1 Natl1 Acad1 1 Regulatio n of t he synt hetic fluid , ProcBranden TD et alpo rcine follicul - ar 4 rate of go na - dot ropin - relesing ho r mo ne recep2 Sci1 U SA1 1985 , 82 : 7217 - 7221 Maso n AJ et al1 Co mplementary DNA sequences to rs in rat pit uitary cell cult ures by inhibin1 En2 3 docr1 , 1990 , 127 : 2387 - 23921 of ovarian follicular fluid inhibin show p recurso r st ruct ure and ho mology wit h t ransfo r ming growt h 5 喻晶华 , 等 1 抑制素的制备测定 , 生物化学与 β f acto r - 1Nat ure1 1985 , 398 : 659 - 6631 () 生物物理进展 , 1988 , 13 6: 433,435 。 Eff ect of an ant ibody aga inst bovine f oll icular in hibin on the devel opment of ovary an d uterus in mice an d rats Liu Shuguan , Yang Liguo ()L aboratory of Animal Rep roductio n , Nanjing Agricult ural U niversity Abstract α The antibodies against bovine follicular inhibin- subunit f ragment were p repared wit h yol k of immunized hens and used topassively immunized 20 mice and 20 rat s1 The result s indicated t hat t he mice t reated wit h 013ml of antibodies to inhibin p resented ( ) a higher weight of ovaries and uterus t han t hose t reated wit h normal saline P < 01051t he rat s t reated wit h 016ml of antibodies to inhibin had a greater number of follicles t han t hose t reated wit h normal saline1 These result s suggest t hat t he passive immunizatio n a2 gainst t he bovine follicular inhibin p ro motes t he uterine and follicular develop ment1 Therefore , t he mouse and rat can be used as ani2 mal model to develop a biological met hod for assay of t he antibodies to inhibin1 Key words : Inhibin antibody , passive immuniztio n , mice , rat s 风干精液中精子的复苏能力 张振中 陈秀英周亚惠 ()内蒙古乌盟畜牧研究所 集宁 012000 精子休眠是延长精液保存期的重要条件 , 除 1 材料与方法低温外 , 高渗也能使精子休眠 , 所以理论上讲 , 精 液脱水 也 是 一 种 精 液 保 存 的 途 径 。1949 年 以 来 , 111 试验动物精液 : 荷斯坦公牛和美利奴公绵羊 假阴道采集的精液 。国外有关动物精液冻干的研究报告 10 余篇 , 但均 ( 是冻干精子获得复苏的报道 。1993 年后 , 我们将 112 方法 : 将收集的精液用双优解冻液 本室生 ) 绵羊精子高渗休眠与复苏的研究成果应用于干精子 产的 一 种 供 牛 羊 颗 粒 冻 精 解 冻 用 的 解 冻 液 或 的复苏并取得了进展 , 现将试验结果报告如下 。 Hank′s 液稀释 , 吸取少量滴于有明胶膜载玻片的 一角 , 以另一洁净载玻片将其推成精液薄膜 , 于室 () 温下 温度 15 ?,18 ?, 湿度 70 , 80 %分别干 收稿日期 : 1997 - 12 - 13燥 30 min 、60 min 和 90 min , 而后将其置于 37 ?恒