【doc】细粒棘球蚴囊经甲苯达唑,阿苯达唑或阿苯达唑亚砜...

【doc】细粒棘球蚴囊经甲苯达唑,阿苯达唑或阿苯达唑亚砜... 细粒棘球蚴囊经甲苯达唑,阿苯达唑或阿苯 达唑亚砜... 第7卷第1期 1992年2月 地方病通报 ENDEMICDISEASESBULLETIN Vol7No.1 Feb.,1992 细粒棘球蚴囊经甲苯达唑,阿苯达唑或阿苯达唑亚砜 作用后其生发层的形态学变化和药物含量 煎兰杨元清尤纪青王鸣杰张超威郭惠芳 (中国预防医学科学院寄生虫病研究所,世界卫生组织疟疾, 血吸虫病和丝虫病台作中心上海市200025) 柴君杰?Rj (新疆地方病防治研究所,乌鲁术齐市830002) 摘要小鼠的继发性细粒棘球蚴囊在含甲苯达唑阿苯达唑或阿苯达唑亚砜1及10#g/ml的培养液中培 养1,7d时囊壁所含各药物的量相近,但生发层的受损以甲苯达唑组较重,次为阿苯达唑亚砜和阿苯达 唑组.感染小鼠ig上述3种苯并眯唑类化合物的等效剂量1,14d后24h,囊壁的药物含量甚低,但生发层 的损害仍以甲苯达唑组的较重,并认为阿苯达唑亚砜是阿苯达唑的有效代谢物. 关键词细粒棘球蚴囊;生发层:甲苯达唑;阿苯达唑:阿苯达唑亚砜 目前用于临床治疗细粒棘球蚴病的药物 主要仍是甲苯达唑(Meb)和阿苯达唑 (Alb),后者的代谢物阿苯达唑亚砜 (AlbSO)"经动物实验为有效代谢 物,其有效剂量仅为Alb的一半.药物代 谢动力学的研究指出,在等效剂量时, Meb的Cmax,AUC和囊壁的药物含量均 较Alb和AlbSO的明显为低.体外试 验结果明,这3种苯并咪唑类化合物均易 于扩散进人囊内,或在无药的培养液中迅速 释放已摄人的3种药物..本文系进一步 观察在体外持续培养和体内多次给药时,细 粒棘球蚴囊对3种药物的摄人,和生发层的 损害. 材料与方法 药工业研究院和杭州制药厂赠给.AlbSO 由本所合成.体外试验时,3种药物均用二 甲基甲酰胺溶解+再用RPMIl64O稀释至 所需浓度.体内试验时,3种药物均用l‰ 西黄蓍胶配制成混悬液+浓度为5O (Meb),300(Alb)和150(AIbSO) mg/ml作高效液相色谱用的甲醇为色谱 纯(上海吴泾化工厂出品) 虫源细粒棘球蚴原头节系取自新疆自 然感染的绵羊其保存与临用前的处置方法均 参照前文…. 动物取体重为2O?2g的NIH早性小 鼠,每鼠白腹腔接种原头节2000只,lO, l4个月后即可用以取囊作体外培养或分组 ig上述3种药物. 药物试剂Meb和Alb分别由上海医的 ? 5? 体外试验培养液为含20%小牛血清 RPMIl640并加人青霉素,链霉索各 地方病通报7卷 500IU/m1和二性霉素0.25gg/ml.上述 小鼠于感染后12,14个月,用摘除眼球放 血处死,随即剖开腹腔,剥取完整的细粒棘 球蚴囊,放置在盛有5ml培养液的有塞试 ,5只,在含5%CO, 管中,每管培养囊3 的37?恒温箱中培养1h后,加入上述3种 药液,终浓度为1或10g/ml.培养1,3 及后,各药物组取囊10只,用亨氏盐 平衡溶液洗涤3次后,滤纸吸干,经抽取囊 液计量和囊壁称重后,测定药物含量.另取 同批培养的囊5--7只,固定于l0%中性福 尔马林中此外,用含相当于10b~g/ml药 物组的二甲基甲酰胺的培养液作对照. 体内试验上述鼠于感染后10个月分 组igMeb,Alb和AlbSO的等效剂量(按 囊重抑制率评价),即各为50,300和 150mg/kg/d,连给7,14d,并于给药 l,3,7及14d后24h,各取3鼠,用摘除 眼球放血清采集各鼠的血液,肝素抗凝,分 离血浆,随即剖取细粒棘球蚴内囊5只,经 去除囊液和滤纸吸干.称重后,将囊组织和 血浆保存在一30?中备用.另自各鼠取5只 囊固定于l0%福尔马林中. 囊壁的组织学观察将上述体外和体内 试验中采集的囊,经石蜡包埋切片后,用 HE染色,观察生发层的变化,每种剂量或 浓度组各观察5o,100个切面,记录不同程 度的病埋损害,进行统计分析和比较. 药物含量测定按前文的高效液相 色谱法测定血浆,囊壁和囊液中的Meb, Alb和AlbSo. 结果 体外Meb:细粒棘球蚴内囊在含 ,7d Mebl#g/ml的培养液中持续培养1 时,囊壁的Meb含量较稳定,囊液的Meb 含量少于囊壁的,但培养7d后有明显增 加.Meb的浓度为10/~g/ml时,囊壁与囊 液的Meb含量均以7d组的为最高(表 l】. 裹1细粒鼻球蛐囊在吉甲苯速唑(Meb)的培养{盎中 培养7d时其囊璧(CW)与囊{盎(CF)的M曲吉量 Table1Mel~mdazol~(Meb)c0nn乜inEchinococcus granulosuscystwall(CW,gg)andcystflnld (CF,ml')afterexpe~ur~toMebfor7days.i?s n10;P>0,05,}P<0.03?…P<0,0l Yscorresponding7daygroup 含量Mebcontent ""镯CWCF Alb:浓度为l"z/?I1时,囊壁的Alb 含量,以培养3d组为较高,而囊液的Alb 含量则较平稳,囊摄人的Alb有部分已被 代谢为A1bso,囊壁的AlbSO含量亦以3d 组的为高,而囊液的则较平稳.Am的浓度 为10#g/ml时,囊壁的Alb含量随培养时 间的延长而增加,且以7d组为最高.囊液 的Alb含量在培养的3d内较平稳,7d后亦 明显增加(表2).囊壁与囊液的Albso含 量的波动趋势与Alb的相仿(表2) AlbSO:细粒棘球蚴内囊在含AlbSO 1或10#g/ml的培养液中培养1,7d时, 囊壁与囊液的AlbSO含量均逐渐增加,并 以7d组的为最高(表3). 体内感染细粒棘球蚴的小鼠用等效剂 量的Meb,Alb或AlbSOig治疗,并于给 药l,3,7及14d后的24h取血浆及囊组 织测定药物含量结果,在上述时间内血浆 中的Meb,Alb或AlbSO的含量均甚微, 囊壁的药物含量除少数组外,均低于体 1期肖树华等:细粒棘球蝴囊经甲苯达唑等作用后其生发层的形态学变化和药物含量7 寰2细粒?球蚴?在含阿革遮蛙(AJb)的墙莽液中培莽7d时萁羹叠(cw)与?j直(cF)的AIb和 阿肇选量亚砜(AIbSO)的含? T-Me2klbemhzele'^Ib1-"_一衄暑uIKe(MbSO)~enteatsim,c^oc0cc螂gra~ulosuscystwalt (CW,Eg一aldcyst晰d(cF,E埘rafterexpesm~toAlbfor7days. ?SD;?ffi10;p>0.05,}'<0.05,…P<0.01懵?哺pon血g7",group 外培养的各相应药物l#g/ml组的囊壁药 物含量(表4) 囊壁的组织学观察体外:当Meb, Alb和AlbSO的浓度均为lgg/ml时,囊 壁生发层的损害随培养时间的增加而加重, 但损害程度以Meb组的为较重,AlbSo组 的次之而Alb组的则较轻药物的浓度增 至lOpg/m1时,各组生发层受损的趋势与 lpg/ml组的相仿.培养7d后,Meb引起 生发层病损较重的坏死和脱落占23.3%, A1b和AlbSo组的各为13.4%和19.5% (表5). 体内:感染小鼠igMeb,Alb和 ,即见生发层出现 AIbSO的等效剂量ld后 不同程度的变化,且生发层示有坏死和脱落 的严重病损均占1O%以上,且以Meb和 AlbSo组为较高药物连给3,7d时,生 发层的病损仍以Meb组为较重,生发层示 坏死和脱落的占26.2%,33.3%,次为 A1bSo组.Alb组的则较轻.后2种药物 连给14d后A1bSo组示生发层有中度和重 度病损的达44%,而Alb组的为36.4% (表6). 寰3绷粒?竦蚴?在含阿革选毫亚砜(AIbSO)的 培养渍中墙莽7d时萁?叠(CW)和 ?{蠹(cF)的AlbSO含? Table3Albendazelesulfox.Me(Aa~so)~oatelltSIn Echinococcusgranulosuscystwall(CW,gg-bandcyst fltdd{CFlPg?mY')aftereXlmsuret0AIt~OIor7Stays. X?SD;II=10;'p>0.05.P<0.05.…p<0.ol W3??m一7daygroup. 药物帐度培养时阃 DrugTimeafter 吉量AlbSOc0址cnI ."CWCF 8地方病通报7卷 裹4用甲苯达唑(Meb)阿苯达唑(A1b)或阿苯选哇亚砜(AmSO)治疗小鼠井于每一疗程末攻 给药后2411的血浆(P)囊壁(cw)和囊液(cF)的药物浓度 hlbe4Mebeudszole(Meh),albend~role(Alh)oralbeindazol~sulfoxide(AibSO)~ontemtin plasma(P,-ml) andEchinococcusgranulosuacystwall(cw'')barberedinmice24hafterlastdoseofeachtreat ment~ollrse X?SD;ii=3(P],14—1CW). 裹5在体外细粒耗球蚴囊经甲苯达唑(Meh),阿苯达唑(A1b)或阿苯达唑亚砜(Amso)作用后萁生发层的变化 Table5AlterationofgerminallayerincystsofEchinococcusgranulosusexposedtomebendL zole(Meh) , AIh AjbSo Mebl0 AIb A]bSO Control 7 653l076.087332.733 60893671003.33.36.6 34t1001001339. 3l3.3l0.0 467t33l0.0Il35.36.76.7 40810787l50538.7l0.8 850535245000 正常nnormal,粗糙R;roughness,疏捂L;looseness,空泡变化v=vacuolizati0n,核模糊INindistia~tnuclear 坏死Ne=necrosis脱落D=desquamation; _F目The$D~temeaninginTable6 l期肖树华等:细粒棘球蚴囊经甲荤达唑等作用后其生发层的形态学变化和药物含量 襄6用甲苯达唑(Meb)阿苯达睦(AIb)硪阿苯达唑亚砜(AIbSO)口服冶疗感染小鼠 并于末次始药后24h瓣毒一时其生发屡的变化 Table6AlterationofgerminallayerincystsofEchinococcusgranuloauaharboredinmicetrea ted jgwithmebendazole(Meb),albeadazole(AIh)oralbendazolesulfoxide(AIhSO) andsacrificed24hafterlastdoseofeachtreatmentCOllrse 讨论 细粒棘球蚴在含相同浓度的Meb,Alb 或AlbSO培养液中培养1,7d时,囊壁和 囊液所含各药或其有效代谢物(如Alb组 的AlbSO)的总和相近,但从生发层受损 的情况来看,则无论是培养1d,抑或是培 养3,7d,生发层的病损均以Meb组的为 重,说明细粒棘球蚴的生发层对Meb较为 敏感 体内试验结果指出,宿主于多次i叠3 种苯并咪唑类药物后24h,未见其血药浓度 随给药次数的增加而递增.且均甚低微,表 明这3种药物无积蓄作用.从囊壁的药物含 量来看,Alb和AlbSO组的AlbSO含量除 个别组外亦相接近,但较宿主1次ig等效 剂量的Alb和AlbSO后,囊组织在8h内 所含的药量为低,同时除个别组外亦低 于体外培养的1g/m1相应组,提示用A1b 或AlbSO治疗时,较大量的AlbSO进人囊 壁,并维持一定时间,对于损害生发层是至 关重要的.在等效剂量下,AlbSO的剂量 仅及Alb的1/2,但给药后不同时间的生 发层损害均以AlbSO组较为严重,故可认 为AlbSO即为Alb的有效代谢物. 感染小鼠等效剂量的Meb1,7d后 24h,囊壁残留的药量较Alb或AlbSO相 应组的为低,同时1次igMeb后8h内, 囊组织的晟高药物含量为0.48,ug/g,而 Alb和AlbSO组的则高达8.06和7.05,ug/ g,但Meb所引起的生发层损害较Alb 和AlbSO组的为重,再次证明细粒棘球蚴 的生发层对Meb较为敏感.另一方面,在 所用的剂量下,宿主体内囊组织的Meb含 量,较体外用Mebl,ug/ml培养l,7d 的囊组织的Meb含量为低,但生发层的病 损则较体外培养的为重,提示除Meb原药 10地方病通报7卷 外.可能还有Meb的代谢物起作用. 参考文献 1肖树华,等甲苯达唑,阿苯达唑及其代谢物 实骑治疗小鼠继发性细粒棘球蚴病的研究.地 方病通报1990,5(3):11 2.肖树华,等感染继发性细粒棘球蚴的小鼠口 服4种苯井咪唑类化合物的药物代谢动力学 中国药理1991:12(5) 3尤纪青,等.体外培养的细粒棘球蚴囊对甲苯 达唑,阿苯达唑和阿苯达唑亚砜的摄人与释 放冲国药理1991;l2:367. (本文于I991年9月3日收到) MorphologicalAlterationandDrugContentinCystWallof EchinococcusgranulosusExposedtoMebendazole,Albendazoleor. AlbendazoleSulf0xide XiaoShu-hua,YangYuan-qing,YouJi-qing,WangMin_jie, ZhangChao—wei,GuoHuj—fang (InstituteofParasiticDiseasesChineseAcademyofPreventiveMedicine,WHO CollaboratingCentreforMalaria.SchistosomiasisandFilariasis,Shanghai200025) ChaiJun-jie (xmjiangInstitutefo,EndemicDiseaseControlandResearchUrumqi830002) Whensecondaryc3,stsof&hinOCOCCUSgranuloSUSremovedoutfrommicejnfectedwith protoscoleccs12-14monthspreviously,maintained/nvitrowereexposedtomebendazole (Meb),albendazole(Alb】oralbendazolesulfoxide(AIbSO)ataconcentrationof1or10 g/mlfor1,3and7d,thecontentsofeachdrugincystwallweresimilar.Meanwhile,theal— terationingerminallayerinducedbyMebwasmoreapparentascomparedwiththatinduced byAlbSOandAlb.WheninfectedmiceweretreatedigwithMeb,AlborAlbSOatanequal effectivedoseofrespective50,300andl50mg/kgdailyforl,3,7and14d,moresevere damageingerminallayerwasseeninMebgroup.IncomparisonwithAlbandAIbSO,the damageingerminallayerinducedbythelatterwasmoreintensivethanthatinducedbythe forlTler.24hafterlastdoseofeachtreatmentcourse.muchlessMeb,AlborAlbSOwasde- tectedincystwal1.TheresultsindicatethatthegerminallayerofE.granulosusismoresuscep— tibletoMebthantoAlbandAIbSO,andconvincethatAlbSOiSthemajoreffective metaboliteofAlb. Keywords:Echinococcusgranulosuscyst;Germinallayer;Mebendazole~Albendazole; Albendazolesulfoxide