鸭肝炎病毒A66弱毒的冻干试验

中日商禽传染病 1∞7年2期 第 s3朝 77，S 。 中循环抗体效价稍低．但制备成r一球蛋白液 。惴和凇 霎詈 3．1 用猪瘟兔化弱毒2次免疫接种肥育猪． 以看 出，当 r一球 蛋 白液总 蛋 白含量 谰至 能迅速提高血液中猪瘟循环抗体敬价．从表L 4 5mg／ml时．中和抗体敬价可提高4～8倍。 可以看出，2免后1 5～20天，沉淀抗体效价最 3．3 用猪瘟兔化弱毒免疫肥育猪制备的抗 低达1：8以上，中和抗体敬价最低达1：32以 猪瘟血清 r一球蛋白液．不仅含有较高效价的 上，这不仅消除了试验猪带毒危险，而且为制 猪瘟特异性抗体． 阻还含有多种非特异性 备具有较高猪瘟中和抗体效价的r-球蛋白液 抗体成分(这些成分时作为异体蛋白刺激机 提供了免疫物质基础 体．活跃生理功能 ，从而在临床上用于治疗 3．2 高教价抗猪瘟血清制备一般要用血毒 猪瘟，能获得较高治愈率和经济效益．值得推 加强免疫才可达到，用弱毒2次免疫尽管血液 广应用 。 f { 和寄 日彳 ； 干 南 吼恢一 _ ， { 鸭肝炎病毒A。s弱毒的冻干试验 曼班 兰—亘 周学利 陈弘年 窑 曹’弓 j、5 安徽省农业科学院斋敉 医研宽即 J日 摘 要 !·4 鸡 胚：由本所健康京白鸡群所产种蛋 鸭病毒性肝炎AB6鸡】l￡弱毒冻干疫苗的毒价为10 孵化。 cELD 。 m。’蚱干前同批鸡胚毒毒价为 。 cELD 1 ． 5 雏 鸭：用本所DHV阴性的康贝尔鸭 ． 。 兰 !： 。苎 三 群所产种蛋经人工孵化出雏。 卣的免疰期与鸡旺混台毒丰日同对雏鸡至步为45天 簿干苗 ～ ’。一 。 ’ ⋯ 有效保存期为：一 。c-：年 c r 十 。。c‘ 。 2 方法和结果 天 2、l DHV—A66弱毒冻干疫苗的毒价：将新 本试验测定了DHV—AS6~．胚弱毒冻干 采集的DHV A66鸡胚混合毒(胚体+绒毛 疫苗的毒价、免疫期及保存期。 尿囊膜 尿囊液+羊水)．按1份组织DtI4份 I 材 料 5 蔗糖脱脂乳保护剂[zZ充分混匀后装瓶冻 一 ． 。 干。出箱后，同时测定该DHV—A66弱毒冻干 1 1 A66弱毒株：我们分离并培育成的 一株 疫苗 及与其 同批采集保存 在一35 C下 的 f型鸭肝炎病毒(DHV)弱毒 。 DHV A 66鸡胚混合毒的毒价。 1·2 ATCC强毒株：从美国细胞收集库引 分别将上述冻干疫苗与鸡胚混合毒用生 进的 I型 DHV毒株-由汀荔省农科院畜牧 理盐水l0倍递进稀释，每一稀释度接种9日龄 兽医研究所转赠-我们通过雏鸭传代t其雏鸭 鸡胚6只，0．Ira+l／胚。根据接种鸡胚死亡数． 肝病料对1日龄雏鸭的毒价为10 ”DI Dse／ 按 R M 法计算出冻干疫苗和鸡胚混合病毒 0-lml。 的鸡胚 半数 致死量-分别为10 CEI⋯D ／ 【．3 DHV A66弱毒冻干痘苗：在本昕实验 0，lml和(EI DSO／O．1m1)(表1)。 兽药厂按规程制备。 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国膏禽传染病 1997年 2期(总第 93期) 裹1 DHV-A66森干前后的毒价 2．2 DHV—A66弱毒冻干疫苗的免疫期：将 2．3．1 DHV-A66冻于疫苗在不同保存期的 DHV—A66弱毒冻于疫苗及DHV—A66鸡胚混 物理性状及毒价测定：将 DHV—A66冻于疫 合毒，用生理盐水分剐各作100倍稀释 (台 苗15瓶，平分3组，分别在一20 C保存2年，O～ 10000个 DIMD5。／o．1m1)和1000倍稀释(含 4℃保存8个月，2O～30~C保存lo天。结果，疫 1000个 DIMD ／0．1m1)。冻干苗的两种稀释 苗外观物理性状无变化，颜色均匀，疏松多 度各皮下注射1日龄雏鸭25只0．1m[／只；鸡 孔，呈海绵状，溶解迅速完全。 胚混合毒的两种稀释度各皮下注射1日龄雏 将不同保存温度和保存期(见表3)的冻 鸭 1 5只，0．1ml／只。饲 养 不 同 日龄，均 用 干疫苗及同批采集的鸡胚混合毒，用生理盐 ATCC强毒攻击，结果，45日龄之内的雏鸭 水1O倍递进稀释，每一稀释度接种9日龄鸡胚 全部保护(80／80)。未免疫对照雏鸭攻毒，5日 6只，0．1ml／胚，根据接种鸡胚死亡数，按 R一 龄之内的全部死亡(10／10)，15日龄时死亡率 M 法计算出它们的鸡胚半数致死量。冻干疫 为6o (3／5)(表2) 苗一20'C保存2年、0～4℃保存8个月、2O～ 2．3 DHV—A66弱毒冻干疫苗的保存期 30'C保存1O天的鸡胚半 数 致死量 分 别为 囊2 DHV—A66骧千苗免疫期蠢定 组别接种物 免疫- A TCC gt ： 结果 (死亡敦，试验敦) 10-=0．1ml 10’30，lml 10-z0．1IILl 冻 10一 0 ． 1IILl l O lm J 试 千 1 0 ． 1ml 10- m lml 茁 10—0．1ml 验 10 rz0．1IILl 10～0．1IIL【 2．3万 2．3万 2．3万 2．3万 2．3万 2．3万 2 3万 2．3万 2．3万 2．3万 2 3万 2 3万 2．3万 2．37i 2．3万 2．3万 2．3万 2．3万 2 3万 10 ”CELDso／0．1m[、10 ”CELDⅫ／0．1m[、 10 ”CELD5。／o．1ml，鸡胚混合毒一35℃保 存2年、8个月、lo天的鸡胚半数致死量分别为 l06 CELDs0／o．1ral、1 一CELDSo／o．1ml、 邮 蟪壁。 叭叭 邮 5 5 5 心 1 5 坫 _罨一直．百_叠_罨_叠 仉 m 鸡 胚 混 合 毒 组 对 照 组 维普资讯 http://www.cqvip.com 10 ”CELD5o／o．1ml(表3)。 中国畜禽传染病 1997年 2期(总第 93期) 表3 DHV—A66雍干苗的毒价测定 2．2．3 DHV—A66冻干疫苗在不同保存期的 免疫保护试验：将上述不同保存温度和保存 期的冻干疫苗及鸡胚混合毒，用生理盐水分 别 各 作 100倍 稀 释 (含 1000～ 10000个 DIMD 。／o．1m1)，并分别各皮下注射1日龄雏 鸭5只，0．1ml／只，间隔4天(即5日龄)，均以 强毒攻击，结果所有试验雏鸭全部保护(3o／ 3O)；5日龄未免疫对照雏鸭经攻毒，死亡率为 93 (14／1 5)(表4。) 3 小结和讨论 3．1 试验表明，DHV—A66弱毒冻干疫苗毒 价(10 。 CELD 。／o．1m1)与其冻干前同批采 集 的 鸡 胚混 合 毒 的毒 价 (10 ”CELD ／ 0．1m1)相近．冻干过程中损失的毒价在半个 滴度之内。 表4 DHV—A66雍干苗的免疫保护试验 3．2 用本冻干疫苗免疫1日龄雏鸭，免疫后 至少在45日龄之内能抵抗2．37Y个 DLDso／ 0．1ml的ATCC强毒攻击 它对雏鸭的免疫 持续期，不短于冻干前同批采集的鸡胚混合 毒以同样免疫剂量接种雏鸭所产生的免疫 期。 3．3 DHV—A66弱毒冻干疫苗的有效保存期 为：--20℃，2年；o～4℃，8个月；20~30℃，10 天。在上述温度下的不同保存期内，冻干疫苗 的毒价基本稳定。分别用生理盐水作lo 稀 释后，0．1ml／只皮下注射1甘龄雏鸭，于免疫 后第 5天攻 毒，都能抵抗2．3万个 DLD 。／ 0．1mlATcC强毒的攻击。对照用的鸡胚混 合毒，一35℃保存2年，其毒价由10 。CELD 。／ 0．1ml下降，至10 CELD5。／o．1ml。用生理 盐水作1o 稀释后，0．1ml／只皮下注射1日龄 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国畜禽传染病 1997年 2期(总第 93期) 雏鸡，于免疫后第5天攻毒，仍能抵抗2．3万个 DL o／o．1mIATcc强毒的攻击。 本疫苗在配苗和冻干过程中 参考文献 1 陈弘年等：安徽农业科学，1990．4·36]一367 得到王殿中高级工程师的指 2 马闻天等：兽医生物 品，1987·9t278—283 ’ 此致’蚶‘ 扣 和奔 妈细和 鼋耋钗埭 兔病毒性出血症垂直感染病例 ／二 壹堡 娜 隋丽华 渠JI1玫 李谈搏 8 ·)7 (军事医学科学院实验动钫中心) l 995年5月，某实验兔繁育场发生兔病毒 性出血症，死亡5o余只，多数为孕兔和牡年 兔。剖检死亡孕兔发现临产胎兔亦表现与死 亡母兔相似的病变，经血凝和血凝抑制试验 证实，在胎兔肺、肝中亦存在大量兔出血症病 毒(RHDV)，证实 RHDV可通过胎盘垂直传 播。现将实验结果如下。 1 材料和方法 1．1 送捡动物：某实验兔繁育场送检的死亡 孕兔1只及其临产胎兔13只。 1．2 病理学检查：取死亡孕兔及4只胎兔的 肺、肾、肝、心、脾、小肠、盲肠等脏器组织， 1o 福尔马林 固定，石蜡包埋、切片，HE染 色，光镜观察。 1．3 血凝(HA)厦血凝抑制(H1)试验：取死 亡孕兔及6只胎兔肝、肺组织，l t lO加入 0·01M PBS(pH6．4)研磨，3000r／rain离心 2o分钟，取上清，1 2倍比稀释．加入1 人 O 型红细胞，室温作用1．5小时判定 HA滴度， HA阳性者，用 RHDV阳性血清(HI效 价1t1280)作HI试验，以进一步确诊。 2 结 果 2．1 剖检观察：死亡孕兔(孕兔予宫中共有 l 3只胎兔，其中3只胎儿很小，9只发育正常)。 I=1鼻有泡沫样血液，肛门出血；肺泡沫样血液 淤滞、水肿、气肿、淤血；肾肿大，可见针尖大 出血点；肝肿大，呈土黄色，质度脆弱；右心衰 竭，心肌出血；脾略肿大，呈黑紫色；盲肠近端 出血。胎兔肺局灶性出血、肝肿大、肾表面可 见小出血点、胸腺出血。 2．2 组织病理学观察：死亡孕兔肺出血、弥 漫性血管内凝血(DIC)；肾小球淤血、DIC、曲 管变性；脾淤血、浆液性渗出、淋巴小结退行 性变，肠粘膜上皮细胞坏死、脱落，淋巴集结 淋巴细胞逸失、淋巴集结部位可见小坏死灶。 肠牯膜上皮细胞坏死、脱落，肠集合淋巴结淋 巴细胞逸失，可见细胞坏死钙化，变性坏死细 胞脆浆呈颗粒状；肝小叶病变以外带为主，肝 细胞变性坏死，凝固性坏死，可见胞核及胞浆 包涵体，胞浆内可见深蓝黑色或黄褐色着染、 大小不一颗粒样物质，窦状隙扩张，坏死灶中 可见少量炎细胞浸润；心肌纤维变性、坏死， 被膜表面纤维素渗出。胎兔，1号兔肝淤血，髓 外造血，肝细胞浆可见蓝黑色着染小颗粒。肺 不张，血管淤血，肾披膜表面增生成一相当于 肾1／5厚的赘生层(纤维结缔组织、红细胞、上 皮样细胞构成)，肾曲管上皮细胞颗粒变性， 胞浆内可见蓝黑色着染细小颗粒状物质。2号 兔肝淤血、出血．组织灶性溶解，大单核细胞 增多，肝细胞浆可见蓝黑色着染小颗粒，其它 病变同1号胎兔。3号兔肾表面纤维化较轻，其 它病变同2号胎兔。4号兔肝轻度脂变，蓝色小 维普资讯 http://www.cqvip.com