【doc】国产氨酚羟考酮胶囊人体生物等效性研究

【doc】国产氨酚羟考酮胶囊人体生物等效性研究 国产氨酚羟考酮胶囊人体生物等效性研究 中国药物应用与监测20l1年2月第8卷第l期ChineseJourna1.fDrugApplicationandMonitoring,Vol?8,N.?l,F.bmry2()11 国产氨酚羟考酮胶囊人体生物等效性研究 郝光涛,梁宇光,高洪志,刘泽源(军事医学科学院附属医院药理室,北京100071) f摘要l目的:评价国产与进口两种氨酚羟考酮胶囊的生物等效性.方法:24名健康男性志愿者随机交叉单剂量口服2种 氨酚羟考酮胶囊,采用高效液相色谱一紫外法和高效液相一质谱.质谱法分别测定血浆中对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮的浓 度.结果:受试制剂与参比制剂中对乙酰氨基酚的t…分别为(0.75?0.48)和(0.64?0.43)h,Cm分别为(13.45?6-13)和 (13.72?5.24)mg.L,,t1,2分别为(1.92?0.51)和(2.24?0.72)h;AUCo一ff~'l为(39.55?8.34)和(39.65?8.58)mg.L,'h, AUC分别为(42.30?8.85)和(42.95?10.11)mg?L,?h,受试制剂的相对生物利用度为(101.56?19.43)%;而盐酸羟考 酮的f…分别为(O.86?0.34)和(0.90?0.42)h;Cm分别为(25.81?9.54)和(22.53?7.32)g'L,;t1/2分别为(4.51?0.87)和 (4.52?0.73)h;AUCn_巾分别为(129.67?37.27)和(116.78?41.35)Pg?L-1.h,AUC分别为(134.07?38.69)和(121.61?42.13) ug.L...h;受试制剂的相对生物利用度为(116.18?25.90)%.结论:两制剂具有生物等效性. f关键词l氨酚羟考酮胶囊;对乙酰氨基酚;盐酸羟考酮;高效液相色谱一紫外法;高效液相色谱一质谱一质谱法;生物利用度 『中图分类号lR971.1I文献标识码lA【文章编号l1672—8157(2011)01—0009—04 BiOequiavailabilityofdomesticparacetamolandoxycodonehydrochloridecapsules HAOGuang.taoLIANGYu—guang,GAOHong—zhi,LIUZe— yuan(PharmacologyDepartmenl_AffiliatedHospitalofACndyoj MilitaryMedicalSciences,Beijing100071,Chin IABSTRACT】 Objective:Toevaluatethebioequiavailabilityofthedomesticandtheimportedparacetamolandoxycodone hydrochloridecapsules.Methods:Thebloodconcentrationsofparacetamolandoxycodonecapsulesintwocapsulesin24healthy malevolunteersweredeterminedbyHPLC—UVandHPLC— MS-MSafterasingleoraldosewitharandomizedcrossovermethod. Results:Themainpharmacokineticparametersoftheparacetamolinthetestandreferencepreparationwereasfollows:tmaxwere (0.75?0.48)and(0.64?0.43)h,respectively;Cmwere(13.45?6.13)and(13.72? 5.24)mg'L,,respectively;tl/2were(1.92?0.51) and(2.24?0.72)h,respectively;AUCo—mwere(39.55?8.34)and(39.65? 8.58)mg'L,'h,respectively;AUCo一were(42.30?8.85) and(42.95? 10.11)mg?L-I.h,respectively.Therelativebioavailabilityofparacetamolinthetestpreparationwas(101.56?19.43)%. Themainpharmacokineticparametersoftheoxycodoneinthetestandreferencepreparationwereasfollows:tmwere(0.86?0.34) and(0.90?0.42)h,respectively;C…were(25.81?9.54)and(22.53? 7.32)Pg'L..,respectively;fl/2were(4.51?0.87)and (4.52?O.73)h,respectively;AUC0一mwere(129.67?37.27)and(116.78? 41.35)PgL,h,respectively;AUC0were(134.07?38.69) and(121.61? 42.13)Pg'L..?h,respectively.Therelativeoxycodonebioavailabilityofthetestpreparationwas(116.18?25.90)%. Conclusion:Thedomesticparacetamolandoxycodonehydrochloridecapsuleswerebioequivalenttotheimportedones. IKEYWORDSlParacetamolandoxycodonehydrochloridecapsule;Paracetamol;Oxycod one;HPLC—uV;HPLC—MS—MS; Bioavailability 氨酚羟考酮胶囊是复方制剂,其活性成分为盐酸 羟考酮及对乙酰氨基酚.羟考酮是阿片类中枢镇痛 药,主要作用于中枢阿片受体;对乙酰氨基酚是乙酰 苯胺类解热镇痛药,通过抑制前列腺素的合成阻断痛 觉末梢神经的传递.两者合用能同时作用于中枢神 【通信作者J刘泽源,男,主任药师.Tel:(010)66947251 E—mail:1331l010528@189.cn 【作者简介】郝光涛,男,药师.Tel:(0l0)66947269,E-mail l3146323056@m165corn 经系统和周围神经系统发挥协同止痛作用,临床应用 广泛[1-3]0我们采用高效液相.紫外法(HPLC.uv)和 高效液相.质谱.质谱法(HPLC.MS—MS)测定服用氨 酚羟考酮胶囊后人血浆中对乙酰氨基酚和盐酸羟考 酮的浓度,并对受试制剂的药动学特性,生物利用度 及其与参比制剂的生物等效性进行研究[4-6]o 1仪器与试药 Q.Trap质谱仪,配有电喷雾离子化源以及 中国药物应用与监测2011年2月第8卷第1期 ChineseJournalofDrugApplicationandM.nitoring, Vo1.8,No.1,Febmary2011 Analyst1.3.3数据处理软件(美国AppliedBiosystem 公司);Agilent1100型高效液相色谱系统,包括二元 输液泵,自动进样器,切换阀(美国Agilent公司). 受试制剂:氨酚羟考酮胶囊(北京华素制药股 份有限公司,规格:每片含盐酸羟考酮5mg,对乙 酰氨基酚500mg,批号070901);参比制剂:氨酚 羟考酮胶囊(美国马林克罗制药公司,规格:每片 含盐酸羟考酮5mg,对乙酰氨基酚500mg,批号 0532H11787o 对乙酰氨基酚对照品(中国药品生物制品检定 所,纯度>99.95%,批号100018-200107);内标:茶 碱(中国药品生物制品检定所,纯度99.95%,批号 100121.199903);盐酸羟考酮标准品(北京华素制药 股份有限公司,纯度>99%,批号060405);盐酸纳洛 酮对照品(中国药品生物制品检定所,纯度>99%, 批号171239.200504);甲醇,乙腈为色谱纯,其他试 剂均为分析纯,空白人血浆由307医院血液科提供. 2方法与结果 2.1研究对象 24名健康男性志愿者,平均年龄(34.464- 3.31)岁,平均身高(1.674-0.06)m,平均体重为 (65.04?5.36)kg,体重指数(23.20?0.90),经心电 图,血压,血常规,尿常规及肝,肾功能等检查均正 常.受试者均无烟酒嗜好,受试前2周内未服用过任 何药物,均自愿参加并签署知情同意书.本研究 经军事医学科学院附属医院伦理委员会批准实施. 2.2试验方案 本试验采用双周期自身交叉试验设计,单剂量口 服给药,全部受试者随机进入2个试验组,每组9,12 名.每组受试者每次试验时分别服用受试制剂或参 比制剂.两次用药间隔7d. 受试者于试验前1天晚上20:00前入住药物临床 试验机构I期病房,禁食12h,第二天早上8:00空腹 用200mL温开水服药,2h后方可再饮水,4h后统 一 进食低脂膳食.分别于给药前及给药后0.25,0.5, 0.75,1,1.5.2,3,4,6,8,12,24h各取上肢静脉 血5.0mL,肝素抗凝血样于常温下静置0.5h后,3000 r.min-离心10min,上层血浆于一40保存待测[. 2.3对乙酰氨基酚血药浓度测定方法 2.3.1色谱条件固定相:Kromansil—Cl8柱(4.6mm X150mm,5pm);流动相:乙腈一水(8:92);柱温: 10?;流速:1.0mL?rain,;进样量:25pL. 2.3.2血浆样品的处理与测定精确吸取500L血 浆置5mL离心管中,加入50L茶碱内标溶液(浓度 ? 1O? 为200g'mL),50L甲酸,涡旋振荡混匀后,再加 入5%异丙基叔丁基甲醚3mL,涡旋振荡混匀2min, 3000r.min离心5min.吸取上清液于另一5mL离心 管中,于40?水浴下用氮气吹干后,加入流动相200 涡旋混合均匀,离心2min(3000r?min.),取上清 液25进行HPLC分析. 2.3-3标准曲线的制备取空白血浆450,依次加 入对乙酰氨基酚标准系列溶液50,配制成相当于 对乙酰氨基酚血浆浓度为0.5,1.0,2.0,5.0,10.0, 15.0,20.0mg?L.的血浆样品,按"2.3.2"项下方法进 行测定,以样品浓度()为横坐标,对乙酰氨基酚峰 面积与内标峰面积的比值(y)为纵坐标,用加权(w = 1/x)最小二乘法进行回归运算,得回归方程:y = O.9951X+0.0173,=0.9992.表明对乙酰氨基酚 血药浓度在0.5,20.0mg?L.范围内呈良好线性关系, 定量下限为0.5mg?L,. 2.3.4方法学考察在空白人血浆中加入不同量的对 乙酰氨基酚制成低,中,高(1.0,5.0,15.0mg?L)不 同浓度的标准血样,每个浓度各5个样品,按上述测 定方法分别测定日内,日间变异,结果见表1. 表1HPLC法测定血浆中对乙酰氨基酚的准确度,精密度及回 收率.n=15 Tab1Accuracy,precisionandrecoveryofparacetamoiin plasmawithHPLC.n=15 2.4盐酸羟考酮血药浓度测定方法 2.4.1色谱和质谱条件(1)色谱条件:VenusilMp ClR色谱柱(100mm×4.6mm,5pm),美国Agela TechnologiesInc公司;流动相为甲醇.10mmol?L乙 酸铵一甲酸(50:50:0.05,v/v/v);流速:0.8mL?min (分流1:1,v);柱温:35?;进样量:30pL;(2) 质谱条件:离子喷雾离子化源,离子喷射电压:4500 V;温度:500?;源内气体1(GS1,N2)压力:50psi; 气体2(GS2,N,)压力:40psi;气帘气体(N)压力: 15psi;正离子方式检测;扫描方式为多重反应监测 (MRM);羟考酮和内标纳洛酮的解簇电压(DP)分别 为28v和50V;碰撞能量(CE)分别为:60eV和36 eV;碰撞气(N,)压力:Medium;用于定量分析的离 子反应分别为m/z361.1一m/z298.1(羟考酮)和m/z 328.0一m/z253.3(纳洛酮). 2.4.2血浆样品的处理与测定精密量取血浆样品 中国药物应用与监测20l1年2月第8卷第l期 ChineseJoama1ofDrugApplicationandMonitoring,Vol?8,No?1,February2011 300gL,置具塞试管中,加入内标溶液(1gg'mL..纳 洛酮溶液)100gL,加入300pL甲醇一水(50:50,) 混合溶液,混匀,JJH/k3mL提取试剂乙醚一二氯甲 烷(3:2,v/v),涡流混合30S,往复振荡10rain(240 次.min.),离心5min(3500r?rain),取上层有机相于 另一试管中,40?氮气流下吹干,残留物加入150gL 流动相溶解,涡流混合,取30进行HPLC—MS-MS 分析. 2.4.3标准曲线的制备取空白血浆300mL,依次加 入羟考酮标准系列溶液300txL,配制成相当于血浆浓 度为0.3,1.0,3.0,10.0,30.0,100.0gg?L.的血浆样 品,按"2.4.2"项下依法操作,制备工作曲线.以血浆 中待测物浓度为横坐标,待测物与内标物的峰面积比 值为纵坐标,用加权(W=1/x)最小二乘法进行回归 运算,求得的直线回归方程:Y=0.0402X+0.00122, ,.=0.9998,定量下限为0_3g?L,. 2.4.4方法学考察在空白人血浆中加入不同量的盐 酸羟考酮制成低,中,高(1.0,10.0,80.0gg?L)不同 浓度的标准血样,每个浓度各6个样品,按上述测定 方法分别测定日内,日问变异,结果见表2. 表2血浆中羟考酮测定方法的准确度,精密度及回收率.n =18 Tab2Accuracy,precisionandrecoveryofoxycodonein plasma.18 2.5血药浓度测定结果和主要药动学参数 受试制剂与参比制剂的血药浓度.时间过程经 3p97药动学程序拟合,结果均符合二室开放模型.两 时曲线详见图1;主要药动学参数详 种制剂的平均药. 见表3,表4. 14 12 10 8 6 4 2 O 一 2 2468lOl A 35 3O 25 20 .D 15 lO 5 twopreparations 表42种制剂盐酸羟考酮的主要药代动力学参数比较 Tab4Mainpharmacokineticparametersofoxycodoneintwo preparations 2.6相对生物利用度 将受试者口服受试制剂及参比制剂后的血药浓 度数据以梯形面积法计算AUC.…根据血药浓度一时 问曲线末端血药浓度点,以LnCg~f进行回归,求得 消除速率常数ke;t…21ke=0.693/ke;AUC=AUC0_f ? 1l? 中国药物应用与监测2011年2月第8卷第l期 ChineseJournalofDrugApplicationandMonitoring,Vo1.8,No.1,February2011 +C.(tn为最后一次可检测血药浓度的采样时间; C巾为末次可测定样本的药物浓度);CL/F=D/AUC (D为给药剂量);=(CL/F/K~),根据=AUC受试制 mj/AUC比制剂x100%求算受试制剂的相对生物利用 度.结果显示,受试制剂中对乙酰氨基酚的平均相 对生物利用度为(101.56?19.43)%,盐酸羟考酮为 (1l6.18?25.90)%. 2.7统计学处理及生物等效性分析 本实验设计类型将受试制剂与参比制剂的主要 药动学参数采用双向单侧f检验进行分析,即将c… AUC,AUC.一 数据进行对数转换后进行多因素方差 分析,结果详见表5. 表5对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮AUC.,AUC0及双向 单侧f检验表 Tab5Twoone.sidetestofAUC0.AUCn一andC…of paraeetamolandoxycodone 由表5可见,采用双单侧f检验分析计算出C, AUC,AUC,对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮的T1, T2值均大于T…)=1.7341,显示两种制剂的药动学 参数在试验的批间差异均无统计学意义(P>0.05), 表明受试制剂与参比制剂生物等效. 3讨论 本试验采用HPLC.uv法和HPLC.MS.MS法分 ? 12? 析人血浆中对乙酰氨基酚和盐酸羟考酮的浓度.该 方法的回收率和批内,批问精密度均符合人体药动学 研究和生物利用度测定的要求.本试验采用质谱检 测器,使检验灵敏度大大提高;样品预处理比较了乙 醚,乙酸乙酯,氯仿和异丙基叔丁基甲醚等有机溶剂 的提取率,结果发现异丙基叔丁基甲醚提取对乙酰氨 基酚的效果较好,而乙醚.二氯甲烷(3:2)提取率较 高. l参考文献1 [1]1杨常敏,祁琳.氨酚羟考酮的临床应用【J】.中外医学研究, 2009,7(10):l51. [2]张勇,刘小玲.氨酚羟考酮片治疗癌症疼痛的临床疗效【J]_内 蒙古医学杂志,2009,41(7):805.807. [3]3廖文欣,陈敏.氨酚羟考酮与曲马多治疗病理性疼痛的疗效比 较[J].中国医疗前沿,2010,5(8):50. [4]王晖,陈军剑,钟望涛,等.健康志愿者口服对乙酰氨基酚的 时间药代动力学fJ1.中国f临床药理学与治疗学杂志,1996,1 (2):97—98. 【5】王玉,张拮,陈西敬,等.高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚 的血药浓度及其生物利用度[J].中国l临床药学杂志,2002,11 (2):97—99. [6]向平,沈敏,沈保华,等.生物检材中吗啡类生物碱的LC—MS— MS分析[J].法医学杂志,2006,22(1):52—57. [7]王瑾,柴栋.药物I临床试验方案的常见问分析【J].中国药物 应用与监测,2009,6(6):368—370. f8】钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问 题[J].药物分析杂志,1996,16(5):343—346. (收稿日期:2010.04—29修回日期:2010—08—16) 临床评价栏目介绍 为了紧扣药物应用与监测主旨,关注临床热点药物发展动态,我刊将临床评价栏目 设为 重点栏目.此栏目主要刊载药物的临床研究,疗效观察,安全性评价,经济学评估,循 证药学 等内容.对于质量较高尤其是基金课题资助的稿件可以优先刊,刊载周期为4,6个月.欢 迎广大医,药,护及科研工作者踊跃投稿. 撰写要求:资料与方法中应包括患者入选,排除标准,分组及给药方法,疗效评价标准, 观察指标,统计学方法等具体内容;结果部分应有较充分的观察指标相关数据;讨论应结合近 3,5年内相关文献,探讨主要的结果数据对临床的指导意义.