反相高效液相色谱法测定野生甘草中甘草次酸含量

3 　结 　论 用 HNO3 溶解试样 ,采用加入法 ,利用空 气 - 乙炔火焰原子吸收分光光度法连续测定锰粉中 5 种微量元素 ,准确度和灵敏度高 ,简便快捷 ,适用 于纯度大于 99 %以上锰中 Fe , Pb , Sb ,Ca ,Cd 元素 的测定 ,有实用推广价值。 参考文献 1 　董仁杰. 理化检验 (化学分册) ,2002 ,38 (10) : 500 - 501 2 　许春萱 ,钟黎 ,杜献洲等. 信阳师范学院学报 (自然科学 版) , 2002 ,15 (4) : 411 - 412 3 　GB6689 - 88. 中华人民共和国国家标准 , 北京 : 中国标 准出版社 , 1989 4 　谭柱中 ,梅光贵 ,李维健等. 锰冶金学. 长沙 : 中南大学 出版社 , 2004 : 851 - 868 5 　苏星光 ,冯刚 ,张家骅等. 分析仪器 ,2003 , (3) : 28 - 31 6 　王彦吉 ,宋福增. 光谱分析与色谱分析. 北京 : 北京大学 出版社 ,1995 : 67 - 69 7 　吴金星 ,郑昔宝. 分析仪器 ,2002 , (2) :30 - 32 收稿日期 : 2006 - 02 - 24 Continuous determination of trace Fe , Pb , Sb , Ca and Cd in manganese powder by atomic absorption spectrophotometry. L i Gui hua , L i u Quanw en , L i u J unshen , Cui X uz hong ( S chool of Chemist ry and M a2 teri al S cience , Yant ai N orm al U ni versi t y , Yantai , 264025) A met hod is p resented for continuous determination of t race metal imp urities in manganese powder by atomic absorp tion spect rop hotomet ry (AAS) . The sample of managanese powder was dissolved with nit ric acid. The standard solutions of five imp urity element s ( Fe , Pb , Sb , Ca , Cd) with sequentially increased concent ration were added respectively into a number of sample solutions wit h same quantity and t hen SrCl2 solution was added. Five element s in t he sample solution were determined continuously by air2acelylene flame AAS. The determination conditions of t he inst rument were optimized and t he anti2interference ex2 periment was carried out . The recovery is 97. 6 %～102. 0 % wit h t he RSD of 1. 8 %～2. 6 %. 反相高效液相色谱法测定 野生甘草中甘草次酸含量 吴 　瑛 　袁守亮 (塔里木大学文理学院 , 新疆阿拉尔 , 843300) 摘 　要 　采用反相高效液相色谱法测定了野生甘草中甘草次酸的含量。甘草次酸采用超声提取 ,色谱分离柱 为 XDB - C8 柱 (150m ×4. 6mm i. d. , 5μm) ,以甲醇/ 水 (80/ 20) 溶液为流动相 (用磷酸将 p H 值调节为 3. 7) 。紫外 检测波长 250nm ,柱温为室温。线性范围 0. 01～0. 13 mg/ mL ,线性方程 A = 50. 535 + 31130. 2C ,相关系数 0. 9999 , 最低检测限 0. 5mg/ L ,平均回收率 101. 1 % ,相对标准偏差 1. 10 %(n = 5) 。该方法简单、灵敏、准确 ,为甘草原药材 及其制剂的质量控制提供了一个适用的分析方法。 关键词 　反相高效液相色谱法 　甘草 　甘草次酸 作者简介 : 吴瑛 ,女 ,1968 年 3 月出生 ,主要从事分析化学教学与研究工作。 　　甘草是豆科植物的干燥根茎 ,是常用的中药材 , 也广泛用于烟草、食品等领域。甘草的主要成分甘 草酸 (glycyrrhizin) 、甘草次酸 (glycyrrhetic acid) 均 属五环三萜皂苷类化合物。甘草次酸与两个葡萄糖 醛酸分子通过糖苷键连接 ,合成甘草酸。相反 ,甘草 酸经胃酸水解或经肝脏中β- 葡萄糖醛酸酶分解 ,形 成甘草次酸 ,即甘草次酸是甘草酸的苷元。近年来 的药理研究发现 ,甘草酸及甘草次酸类药物具有促 92　2006 年第 3 期 　　　　　　　　　　　　　分 析 仪 器 肾上腺皮质激素 (ACT H) 的作用[1 ] ,能防治病毒性 肝炎、高血脂症和癌症等疾病 ,是有效的干扰素诱生 剂及细胞免疫调节剂。甘草酸的药理作用实质上是 甘草次酸的效用[2 - 4 ] 。目前 ,对于甘草中甘草酸和 甘草次酸的测定已经有很多报道[5 - 6 ] ,但都只是测 定其中一种的含量 ,不能体现甘草总的活性成分含 量。本文在酸性条件下提取甘草粉末 ,将其中的甘 草酸完全水解成为甘草次酸 ,采用反相高效液相色 谱法 ( RP - HPL C)测定甘草中有效成分甘草酸和甘 草次酸的总量。本文所建立的方法 ,测定快速、试剂 用量少、灵敏度高、准确性好。 1 　实验部分 1 . 1 　仪器、试剂与样品 美国安捷伦公司 1100 型高效液相色谱仪 ,配 VWD 紫外检测器和数据处理系统。KQ - 100 E 型 医用超声波清洗器 (昆山超声仪器有限公司产品) ; 旋转蒸发仪 RE - 52 (上海青浦沪西仪器厂) 。 甲醇 (优级纯) ,北京化工厂生产 ;磷酸 (分析 纯) ,北京化学试剂厂生产。 甘草次酸对照品 ,北京试剂公司提供 ;甘草样 品 ,新疆阿拉尔甘草公司提供。 1 . 2 　样品溶液的制备 将甘草样品清洗干净、烘干 ,粉碎成粉末 ,精密 称取 0. 5g ,加入盐酸 2mL ,氯仿 20mL ,超声提取 15min ,提取 3 次。提取液过滤后 ,用氯仿萃取 2 次 , 旋转蒸发后 ,用甲醇定溶于 10ml 容量瓶 ,供 HPL C 分析用。 1 . 3 　色谱测定条件 色谱柱 : XDB - C8 ( 150mm ×4. 6mm i. d. , 5μm) ;流动相 :甲醇/ 水 = 80/ 20 (用磷酸调至 p H = 3. 7) ;紫外检测波长 : 250nm ;柱温 : 室温 ;进样量 : 20μL 。 2 　结果与讨论 2 . 1 　提取方法的选择 在提取溶剂 (氯仿) 中加入盐酸 ,目的是使甘草 中的甘草酸在提取过程中水解 ,转变成甘草次酸。 当盐酸浓度达到 1mol/ L 时 ,甘草酸可以完全水解 为甘草次酸。甘草次酸存在于植物组织细胞内 ,细 胞壁和细胞膜的破碎程度直接影响着提取效率 ,利 用超声波提取[7 ] 可以强化萃取过程 ,有利于细胞内 有效成分的提取。氯仿是亲脂性的有机溶剂 ,甘草 酸和甘草次酸容易溶解在其中 ,而且氯仿易于挥发 , 容易得到提取物。考虑到氯仿透入植物组织的能力 较弱 ,所以选择了 15min 的超声提取时间 ,反复提 取 3 次 ,使得样品中的有效成分提取完全[8 ] 。 2 . 2 　流动相的选择 采用最常用的甲醇/ 水作为流动相 ,通过试验选 择二者的合适比例 (80/ 20) 。甘草次酸为有机弱酸 , 易解离 ,为抑制其解离以减小色谱峰拖尾 ,加入少量 磷酸。实验结果明 ,在上述测定条件下 ,样品中待 测峰分离完全 ,峰形良好 ,没有拖尾现象。样品中甘 草次酸与标准品保留时间完全一致。图 1 和图 2 分 别为甘草次酸标准品和甘草样品在选定分离条件下 的色谱图。 图 1 　甘草次酸标准品色谱图 图 2 　甘草样品色谱图 2 . 3 　线性实验 精密称取甘草次酸标准品 14mg ,用甲醇溶解 并定容为 25mL ,分别移取甘草次酸溶液 0. 2、0. 4、 0. 6、0. 8、1. 0、1. 2mL ,定容于 6 个 5mL 容量瓶中 , 按上述色谱条件进行分析。每个浓度的标准品平行 测定 3 次 ,求出峰面积平均值。实验表明 ,在 0. 01 ～0. 13mg/ mL 范围内 ,甘草次酸浓度与峰面积呈良 好线性关系 ,A = 50. 535 + 31130. 2C ,相关系数 r = 0. 9999。最低检测限为 0. 5mg/ L 。 2 . 4 　精密度实验 在上述色谱条件下 ,选定浓度分别为0. 0224 03 　　　　　　　　　　　　　　　分 析 仪 器　　　　　　　　　　　　2006 年第 3 期 　 mg/ mL (编号 1) 、0. 0896mg/ mL (编号 2) 、0. 1344 mg/ mL (编号 3) 的标准溶液进样分析 ,平行测定 5 次。根据每次测定的峰面积 , 求得峰面积的相对标 准偏差。结果见表 1。 表 1 　色谱分析的精密度 样品 编号 峰面积 1 2 3 4 5 A RSD( %) 1 757. 3 759. 7 752. 6 761. 9 757. 1 757. 7 3. 47 2 2841. 4 2837. 7 2844 2846. 6 2836. 6 2841. 3 3. 75 3 4220. 6 4224. 6 4223. 9 4228. 5 4221. 8 4223. 9 2. 72 2 . 5 　加标回收率 准确量取不同体积甘草次酸对照品储备液 ,加入 到多份相同浓度的甘草提取液中 (甘草次酸含量为 0. 02405mg/ mL) ,按上述条件测定 ,回收率见表 2。 表 2 　甘草次酸回收率 样品 编号 加入量 (mg/ mL) 测定值 (mg/ mL) 回收率 ( %) 平均 回收率 ( %) RSD ( %) 1 0. 0112 0. 03554 102. 59 2 0. 0336 0. 05771 100. 18 3 0. 0560 0. 08134 102. 31 101. 1 1. 10 4 0. 0784 0. 10271 100. 33 5 0. 1008 0. 12497 100. 12 2 . 6 　甘草样品测定 准确称取 0. 5g 不同产地野生甘草粉末各 3 份 , 按样品提取方法提取后 ,在上述条件下测定 ,结果见 表 3。 表 3 　不同产地甘草中甘草次酸含量 产 　地 样品含量 (mg/ mL) 1 2 3 平均值 (mg/ mL) RSD ( %) 伽 　师 0. 4643 0. 5318 0. 4989 0. 4983 2. 76 乌 　什 0. 8971 0. 9412 0. 8861 0. 9081 2. 37 莎 　车 0. 7087 0. 6655 0. 7945 0. 7229 5. 36 阿瓦提 0. 7308 0. 7230 0. 8101 0. 7546 3. 93 夏马力 0. 7960 0. 8613 0. 7625 0. 8066 4. 10 从结果可以看到 ,不同产地甘草中甘草酸和甘 草次酸的含量存在一定差异。乌什的甘草中 ,甘草 酸和甘草次酸含量最高 ,夏马力次之 ,莎车和阿瓦提 的甘草相差不大 ,伽师的甘草中含量最低。 参考文献 1 　中国药典一部 , 2000 : 66 2 　郝飞. 中国药房 , 2001 ,12 (8) : 500 - 501 3 　范云鸽. 天然产物研究与开发 , 1996. 8 (6) :93 - 98 4 　Akao T , Aoyama M , Akao T , Hattori M , Imai Y , Namba T , Tezu2ka Y , Kikuchi T , Kobashi K. Biochem Pharmacol , 1990 , 40 : 291 5 　杜学勤. 西北大学学报 (自然科学版) 2002 , 25 (l) : 48 - 51 6 　杨明远. 宁夏工程技术 , 2003 , (8) : 246 - 247 7 　马远鸣. 超声波技术. 西安 : 陕西师范学院出版社 , 1980 : 30 8 　谢果 ,霍丹群. 食品工业科技 , 2002 , 23 (4) : 42 - 44 收稿日期 : 2006 - 04 - 26 Determination of glycyrrhetic acid in glycyrrhiza by RP2HPLC. W u Yi ng , Yuan S houli ang ( I nst i t ute of L iberal A rts an d S cience , T arum Universi t y , A l aer , 843300) The glycyrrhetic acid in glycyrrhiza was determined quantitatively by reversed2p hase high performance liquid chromatograp hy. The XDB2C8 column (150mm ×4. 6 mm i. d. , 5μm) was used for separation wit h met hyl alcohol/ water (80︰2 0) solution as mobile p hase. The detection was at 250nm and t he column was at room temperat ure. The linear range was 0. 01～0. 13mg/ mL . A = 50. 535 + 31130. 2 C and r = 0. 9999. The detection limit was 0. 5 mg/ L . The average recovery was 101. 1 % and t he RSD was 1. 10 % ( n = 5) . The met hod is simple , sensitive and accurate , and offers a suitable technique for cont rolling t he quality of natural licorice root s and medicines made f rom t hem. 13　2006 年第 3 期 　　　　　　　　　　　　　分 析 仪 器