急性弛缓性麻痹病例中脊髓灰质炎病毒监测分析

河北省2010年急性弛缓性麻痹病例中脊髓灰质炎病毒监测分析 陈玫，郭玉，张俊棉，赵娜，崔志强，李静，张振国 【摘要】目的 分析河北省脊灰实验室病毒检测情况，为维持无脊灰状态提供依据。 方法 按世界卫生组织《脊灰实验室手册》进行病毒分离与鉴定，用逆转录-聚合酶链反应扩增VP1编码区基因片段，并进行核苷酸序列测定和分析。结果 河北省2010年从AFP病例粪便标本中分离到脊灰病毒12株，均为疫苗相关株，未发现脊灰野病毒和疫苗衍生脊灰病毒。结论 河北省2010年继续维持无脊灰状态。 【关键词】急性弛缓性麻痹；脊髓灰质炎病毒；疫苗衍生脊灰病毒 Surveillance of Poliovirus Isolates from Acute Flaccid Paralysis in Hebei Province CHEN Mei,GUO Yu,ZHANG Junmian,et al.Hebei Center for Disease Control and Prevention,Shijiazhuang 050021 [Abstract] Objective By analysing the surveillance status of laboratory for poliomyelitis of Hebei Province and to provide the laboratory data for maintaining polio-free status in Hebei Province.Method Virus isolation and identification were conducted according to the 4th edition of WHO polio laboratory manual. The sequence of VP1 coding region were amplified and sequenced. Result The total number of poliovirus isolates were 12 which was mainly distributed in the mid-south region of Hebei. No wild poliovirus and vaccine derived poliovirus (VDPVs) were detected. Conclusion Polio-free status was maintioned in Hebei Province in 2010. [Key words] Acute Flaccid Paralysis; Poliovirus; Vaccine-derived polio viruses 脊髓灰质炎（脊灰）是一种由脊灰病毒引起的严重危害儿童健康的传染病，侵犯对象多为5岁以下儿童[1]。随着全球消灭脊灰策略的实施及脊灰口服减毒活 作者单位：河北省疾病预防控制中心（河北 石家庄 050021） 作者简介：陈玫（1966-），女，河北无极人，学士，主任技师，主要从事医学病毒学检验工作。电话：0311-86573409 E-mail:chenmei0010@sina.com 通讯作者：张振国，学士，主任技师。 疫苗（opv）的使用，脊灰野病毒株的传播及流行已得到有效控制。河北省自1992年以来未检出过脊灰野病毒，但由于与我国接壤的印度、阿富汗、尼日利亚和巴基斯坦等国家仍有脊灰病例流行[2]，因目前我国仍在使用OPV预防脊灰,这就不 可避免的会发生疫苗相关麻痹型脊灰（Vaccine-associated Paralytic Poliomy-elitis,VAPP）,也有发生疫苗衍生病毒（Vaccine-derived poliovirus,VDPV）的可能性，甚至可能会发生循环（Circulating Vaccine-derived polioviruses,cVDPV）[3]。我们对河北省2010年分离到的脊灰病毒进行分析，为河北省维持无脊灰和预防VDPVs的出现提供控制策略和理论依据。 1 材料与方法 1.1 资料来源 AFP病例资料来源于全省AFP病例监测系统。粪便标本来自各市、县（区）疾控中心及送检的AFP病例粪便标本及其高危病例的5份密切接触者粪便标本，冷藏送至省疾控中心脊灰实验室；河北省疾病预防控制中心（CDC）脊灰实验室及中国CDC脊灰实验室检测结果。 1.2 方法 1.2.1 病毒分离与鉴定 按照世界卫生组织（WHO）扩大免疫规划和传染性疾病部脊髓灰质炎实验室手册推荐的方法进行病毒分离与鉴定。脊髓灰质炎病毒株送中国疾病预防控制中心国家脊灰实验室做型内鉴定及基因序列测定和分析。 1.2.2病毒型别复核与型内鉴别诊断 中国疾病预防控制中心国家脊灰实验室采用WHO推荐的PCR-RFLP法和ELISA法做型内鉴定，对型内鉴别异常株及从0剂次服苗者标本中分离到的PV做VP1区基因序列测定和分析[4、5]。 1.2.3 分析方法 采EPI6、SPSS13等软件进行数据分析。 2 结果 2.1 监测指标完成情况 2010年全省共报告15岁以下儿童AFP病例373例，报告发病率为3.3/10万。共检测AFP 病例粪便标本371例 , 14天内双份合格粪便标本采集341例，合格采集率为91.4%, 粪便标本采集后7天内送检369例，及时率为98.9%, 28天内报告结果366例，及时率为98.1%, 分离到的12株PV有11株14天内送达国家脊灰实验室，及时率为91.67%，与国家脊灰实验室结果符合率为100%。各项监测指标均超过了WHO 提出的80%的。 2.2 病毒分离与鉴定 从371例AFP病例粪便标本中分离到脊灰病毒（pv）12株，分离率为3.23%，Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型构成比分别占8.33%（1/12）、25.00%（3/12）、41.67%（5/12），混合型占25.00%（3/12）。3株混合型中1株为Ⅱ+Ⅲ型，其余2株均为Ⅰ+Ⅲ型。分离到非脊髓肠道病毒（NPEV）59株，分离率为15.9%。另从39例AFP病例接触者粪便标本中分离到3株PV,和10株NPEV（1.）。 表1 AFP病例及接触者粪便标本分离鉴定结果 对象 标本例数 PvⅠ PvⅡ PvⅢ Pv混合 P总 NPEV AFP病例 接触者 371 39 1 2 3 0 5 0 3 1 12 3 59 10 2.3 NPEV月份分布 2010年AFP病例粪便标本中分离到NPEV59株，不同月份分离阳性数不同，6~10月份较高，占全年总数的76.27%。（图1）。 图1 NPEV分离的月份分布 2.4 NPEV性别和年龄分布 59株NPEV的分离者中，男45例，女14例，男女之比为3.21:1。有53株NPEV是从0~4岁儿童中分离到，5~9岁分离4株，10岁以上分离2株。 2.5 VP1区核苷酸序列测定与分析 2010年从AFP病例粪便标本中分离到12株PV,从AFP病例密切接触者粪便标本中分离到3株，分离成单型共19株送国家脊灰实验室进行VP1基因核苷酸的序列测定和分析，与Sabin株相比，核苷酸变异0~2个的15株，占78.95%，最大变异数为6个（表2）。 表2 13株PV单型株核苷酸变异情况分析 型别 数量 核苷酸变异数 0 1 2 3 4 5 6 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 5 5 9 0 1 0 4 3 3 0 0 4 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 1 0 合计 19 1 10 4 1 1 1 1 2.6 核苷酸变异个数与性别的关系 从AFP病例中分离到的12株PV,分离成单型株共15株，男性发生变异14株，女性发生变异1株，男女比例为14：1，男性多于女性（表3）。 表3 脊髓灰质炎病毒株变异个数与性别的比较 性别 变异个数 合计 1 2 3 4 5 6 男 女 7 1 3 0 1 0 1 0 1 0 1 0 14 1 合计 8 3 1 1 1 1 15 3 讨论 中国所在的WHO西太平洋区已被证实为无脊灰区[6]，表明我国已经成功阻断了本土脊灰野病毒的循环。但多年来由于大量使用OPV，而且疫苗病毒株在人类肠道复制的过程中可能发生突变，并通过粪便排出体外，致使脊灰疫苗病毒一直存在于自然环境中，而且个别毒株在核苷酸水平上发生了不同程度的变异。河北省2010年从监测的371例AFP病例中分离到脊灰病毒12株，在核苷酸水平最大变异为6个，男性发生变异多于女性，这与河北省以往报道结果一致。河北省在2007年曾发现2株Ⅲ型脊灰高变异株，核苷酸变异分别达到7个和8个，且病毒在人群中已发生循环[7]，但通过及时的发现和有效的控制，阻断了其在人群中的继续传播，没有演变成cVDPVs。 2010年河北省15岁以下儿童AFP病例报告发病率为3.3/10万，超过WHO规定的1/10万的敏感性指标，合格粪便标本采集、送检、细胞培养、报告结果等各项指标均达到质量控制的要求，显示河北省脊灰实验室监测质量稳定，各项监测指标均保持在较高水平。2010年共监测371例AFP病例粪便标本，按WHO《脊髓灰质炎实验室手册》的要求进行病毒分离和鉴定。分离到PV12株，分离率为3.23%；分离到NPEV59株，分离率为15.9%。AFP病例的密切接触者粪便标本中分离到PV3株，NPEV10株。分离到的68株NPEV中，不同月份分离阳性数不同，6~10月份较高，占全年总数的76.27%。与以往报道NPEV的分离呈夏秋季感染高峰一致[8-10]。NPEV 感染男性多于女性，在年龄构成上以5岁以下小年龄人群为主,与其它省份报道一致[11 ] 。 河北省2010年从AFP病例和接触者中共分离到15株PV,，从型别来看，以Ⅲ型较多，经国家脊灰实验室进行型内鉴定均为疫苗株，没有发生VDPV。这些PV 株经VP1区核苷酸测序均有不同程度的变异，有一株Ⅱ型株达到6个核苷酸变异， 增加了潜在cVDPV 发生的可能性。河北省由于AFP 病例相关监测保持在一个较高的水平上, 对于及时发现和控制cVDPV, 阻断病毒的循环, 提供了一个良好的技术保证。 虽然我国所在的西太平洋地区在2000年已经实现了“无脊髓灰质炎”目标，但世界上还有4个国家（印度、尼日利亚、巴基斯坦和阿富汗）从未停止过本土脊髓灰质炎野病毒的流行。而且，在一些已经实现无脊髓灰质炎的国家和地区近年又重新输入野病毒导致新的传播链，有些病例已经消失多年的国家再度发生了脊髓灰质炎野病毒输入，有的甚至还引发了脊髓灰质炎野病毒流行。2010年，WHO欧洲区自2002年实现无脊灰以来，首次发生WPV输入并发生大规模爆发，其中塔吉克斯坦报告458例WPV病例[12]。2010年11月~2011年3月，保持无脊灰工作10年以来的刚果共和国发生了Ⅰ型脊灰野病毒的爆发流行，脊灰确诊病例达387例[13]。2011年8月我国新疆维吾尔自治区发生输入性WPV并引起局部传播。基因测序结果显示为Ⅰ型WPV，由巴基斯坦输入[14]。研究表明，脊灰野病毒的输入或VDPV的出现和流行与当地OPV接种率过低有关[15]。因此提高和维持高水平OPV常规免疫接种率、对高危地区和高危人群持续开展高质量的OPV强化免疫活动，及时有效运转急性弛缓性麻痹（AFP）病例监测系统，维持高质量的流行病学和实验室监测，是保持无脊灰状态、最终实现消灭脊灰的主要策略[1]。同时通过对AFP病例的病毒学监测，为制定河北省疫苗使用策略，探讨停止OPV的时机，并为消除VDPV引起的麻痹病例及全球消灭脊灰提供科学的依据。 4 参考文献 [1] 迮文远.计划免疫学[M].2版.上海：上海科学技术出版社，2001：321-346 [2] WHO.performance of acute flaccid paralysis(AFP) surveillance and incidence of poliomyelitis,2009.WER,2009,84(25):257-260 [3] 张勇，祝双利，赵蓉，等.中国急性弛缓性麻痹病例中脊髓灰质炎病毒疫苗株 VP1区基因变异的研究[J].病毒学报，2004，20（1）：28-33. 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