宠物用复方酮康唑香波的药剂学研究

宠物用复方酮康唑香波的药剂学研究 3.5 标准曲线 .................................................................................................................20 3.6 精密度结果 .............................................................................................................21 3.7 准确度测定结果 .....................................................................................................21 3.8 处理的样品稳定性测定结果 .................................................................................21 3.9 香波样品含量测定结果 .........................................................................................22 3.10 加速试验结果 .......................................................................................................22 3.11 室温长期试验结果 ...............................................................................................244 宠物用复方酮康唑香波的质量标准............................................................................275 宠物用复方酮康唑香波质量标准起草说明................................................................29 5.1 一般质量检查 .........................................................................................................29 5.2 色谱鉴别 .................................................................................................................29 5.3 含量测定与标示量说明 .........................................................................................296 讨论................................................................................................................................30 ...................................................30 6.1 宠物用复方酮康唑香波工艺的确定 .................. 6.2 宠物用复方酮康唑香波处方的筛选 .....................................................................30 6.3 高效液相色谱含量测定色谱条件的选择 .....................................................32 6.4 鉴别 .........................................................................................................................347 结论................................................................................................................................348 文献综述........................................................................................................................35 8.1 宠物犬、猫真菌性皮肤病发病概况 .....................................................................35 8.2 宠物犬、猫真菌性皮肤病的诊断与治疗 .............................................................36 8.3 国内外宠物用化学药研究进展 .............................................................................39 8.4 国外近年来上市的主要宠物用香波 .....................................................................42 8.5 其它新品种介绍 .....................................................................................................43 8.6 宠物用化学药物发展趋势 .....................................................................................44 8.7 国内动物用药发展状况及存在的问 .................................................................45 参考文献............................................................................................................................47致 谢................................................................................................................................52 II 宠物用复方酮康唑香波的药学研究 宠物用复方酮康唑香波的药剂学研究 研究 生:潘学营 导师:王大菊 教授 华中农业大学国家兽药残留基准实验室,农业部食 品安全评价重点开放实验室 ,,, 中国 武汉 ,,, 要 摘 随着经济的稳步增长，我国宠物业的迅速发展，动物保健药品的需求量不断增加。 为预防和治疗宠物犬和猫的真菌、细菌及混合感染性皮肤病，制备由 1酮康唑和 2 葡萄糖酸氯己定组成的宠物用复方酮康唑香波。本研究拟参考 Virbac 公司 2001年 上市的 ketoconazole/chlorhexidine gluconate 香波处方， 新兽药审批办 并依照我 国? ，对宠物用复方酮康唑香波进行工艺、处方筛选、含量测定、稳定性初步 研法?究，制定质量标准。 采用冷混合法制备宠物用复方酮康唑香波。处方筛选中 以外观稳定性、泡沫体积、粘度为考察指标，对宠物用复方酮康唑香波中的主要辅 料抗氧化剂无水亚硫酸钠、十二烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基 甜菜碱等 4 因素 3 水平进行正交设计。优选结果为 0.2无水亚硫酸钠、7十二烷基 硫酸钠、12脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠和 4十二烷基甜菜碱。 建立宠物用复方酮康唑 香波含量测定的高效液相色谱法。用流动相稀释香波样品至合适浓度，0.45 m 微孔 虑膜过滤，即可。采用 Inertsil ODS-3 柱，柱温 40?， (65流动相为乙腈-0.1mol/L 磷酸氢二钠水溶液(内含 0.05mol/L 三乙胺) ?135)，磷酸调 pH 值至 3.2，流 速为 1.0mL/min，紫外波长为 235nm。结果明，酮康唑和葡萄糖酸氯己定标 准溶液浓度均在 1,100 g/mL 的范围内呈良好线性关系， KCZ Y ， 。, 34331X16638 ( r , 0.9999 ) YChlo-G , 32349X6523.6 ( r , 0.9999 ) 浓 度 为 酮康唑的日内和日间精密度分别小于 1.5和 2.1;100 g/mL、 g/mL、 g/mL 时， 10 1葡萄糖酸氯己定日内和日间精密度小于 1.8和 2.1。空白样品添加标准品 酮康唑和葡萄糖酸氯己定浓度均为 1mg/g、0.2mg/g、0.1mg/g 时，酮康唑的回收率 分别为99.46、99.60、99.97;葡萄糖酸氯己定分别为 100.32、98.79、100.34，两药 物的精密度均小于 1.7。 用 HPLC 法测定制备的 3 批宠物用复方酮康唑香波样品 含量，结果为酮康唑分别为标示量的 100.84、100.45、99.88，葡萄糖酸氯己定分别 为标示量的 93.28、 1 华中农业大学 2006 届硕士学位论文95.05、94.99，含量均 在中国兽药典规定范围内。 稳定性初步研究结果显示，宠物用复方酮康唑香波在温 度 25?2?，相对湿度60?10的条件下放置 6 个月和在温度 40?2?，相对湿度 70?10的条件下放置3 个月，含量测定结果酮康唑和葡萄糖酸氯己定均为 90,110， 粘度、泡沫体积、稳定性均无明显变化。表明宠物用复方酮康唑香波在室温 6 个月 和加速 3 个月的稳定性均良好。 本研究仿制的宠物用复方酮康唑香波制备工艺简 单，稳定性良好。含量测定中，样品处理简便，检测灵敏度高，定量准确，重复性 好，符合兽药制剂含量测定要求。所制定的质量标准适用于宠物用复方酮康唑香波 的质量控制。关键词:复方酮康唑香波，酮康唑，葡萄糖酸氯己定，宠物，质量标 准 2 宠物用复方酮康唑香波的药学研究 Pharmaceutical studies on Compound Ketoconazole Pet Shampoo Candidate: Pan Xueying Supervisor: Prof. Wang Daju National Reference Laboratory of Veterinary Drug Residues/MOA Key Laboratory of Food Safety Evaluation Huazhong Agricultural University Wuhan 430070 P. R. China Abstract With the development of economic and pets industry the requirement of animalhealth drug is more and more. Compound ketoconazole pet shampoo is a compoundformulation which consists of 1 ketoconazole and 2 chlorhexidine gluconate. It willbe used for prevention and treatment of fungal and bacteria dermatosis for dog and cat.Under the Guidance of Provision for New Animal Drug Approval and Keto-Chlorshampoo compound ketoconazole pet shampoo has been studied on preparing technologyformulation choosing determination of content preliminary stability and qualitystandard. Compound ketoconazole pet shampoo was preparationed by cold admixture. Thebest formulation of compound ketoconazole pet shampoo was screened by orthogonaldesign. Orthogonal design was utilized to optimize the 4 factors in the compoundketoconazole shampoo namely the antioxidant anhydrous sodium sulfite sodium laurylsulfate fatty alcohol polyoxyethylene lauryl ether sulfate sodium dodecyl betaine. Andthe results were anhydrous sodium sulfite 0.2 sodium lauryl sulfate 7 fatty alcoholpolyoxyethylene lauryl ether sulfate sodium 12 and dodecyl betaine 4. The quality standard of compound ketoconazole pet shampoo was studied and toestablish a HPLC method for the simultaneous determination of ketoconazole andchlorhexidine gluconate in shampoo. The shampoo sample was diluted to suitableconcentration with mobile phase and filtered with microbore membrane. The HPLCsystem was consisted of Inertsil ODS-35 m 150mm×4.6mm column temperature wasat 40? and mobile phase was composed of acetonitrile-0.1mol/L dipotassium hydrogenphosphate 65?135 adjust pH to 3.2 by phosphoric acid. The flow rate was 1.0mL/mindetection wavelength was at 235nm. The results show that both of the ketoconazole andchlorhexidine gluconate were fine linear in the range of 1,100 g/mL respectively andstandard curve and coefficient were YKCZ,34331X16638 r0.9999 and YChlo-G,32349X6523.6 r0.9999 respectively. Intra-day and extra-day RSD values ofketoconazole were less than 1.5 and 2.1. And intra-day and extra-day RSD values of 3 华中农业大学 2006 届硕士学位论文 chlorhexidine gluconate were less than 1.8 and 2.1 respectively. The recoverise ofketoconazole and chlorhexidine gluconate in control shampoo were 99.46 99.6099.97 and 100.32 98.79 100.34 respectively and both RSD values of the drugwere less than 1.7. Quality of the three groups compound ketoconazole pet shampoo samples weredetermined by HPLC and the results were 100.84 100.45 99.88 and 93.2895.05 94.99 respectively and suit to China Veterinary Drugs Pharmacopeia. Preliminary stability tests showed that the compound ketoconazole shampoo pet foris stable during 6 months in 25??2? correspond humidity 60?10 and during 3months in 40??2?， correspond humidity 70?10. Results of quality determination ofketoconazole and chlorhexidine gluconate in compound shampoo were 90,110. The preparation method of compound ketoconazole pet shampoo was simple and thequality was stable. The HPLC method of quality determination was easy and suitalbe andsensitivity and specificity. It’s well adapted for quality control of compound ketoconazolepet shampoo.Key Words: Compound ketoconazole shampoo ketoconazole chlorhexidine gluconatepet quality standard 4 宠物用复方酮康唑香波的药学研究缩略语表 6501 Coconut oil fatty acid diethanolamide 椰油酸二乙醇酰胺 Fatty alcohol polyoxyethylene lauryl ether 脂 肪 醇 聚 氧 乙 烯 醚 AES sulfate sodium 硫酸钠 BS-12 Dodecyl betaine 十二烷基甜菜碱 Chlor-G Chlorhexidine Gluconate 葡萄糖酸 氯己定 CMC Critical micelle concentration 临界胶束浓度 HPLC High performance liquid chromatography 高效液相色谱法 K-12 Sodium lauryl sulfate 十二烷基硫酸钠 KCZ Ketoconazole 酮康唑 Keto-Chlor Ketoconazole/Chlorhexidine gluconate 酮康唑/ 葡萄糖酸氯 shampoo shampoo 己定香波 M-550 Polyquoaternary ammonium salt-7 聚季胺盐-7 5 华中农业大学 2006 届硕士学位论文 ,前言 ( ,,研究背景 中国经济以年均 7的速度增长，过去 30 年中，随着中国居民可支配收入的增长， 消费观念也随之发生了很大的变化。近些年来，百姓家养宠物越来越普遍。据Animal Pharm 报道，美国是全世界宠物饲养量最大的国家，我国是仅次于美国的第二大宠 物饲养国家。据调查，北京市约有 150 多家宠物医院和诊所，北京登记在册的宠物 犬数量约为 41 万只，宠物总数量约有 300 万只，一年用在宠物的花费达 5 亿多 元(奚增禄等，2005)。另据统计，上海市民豢养宠物超过 100 万只，其中犬大约 60 万只，有 1000 多家宠物商店。广州现有各类犬达百万只，目前已有宠物诊所 100 多家。武汉目前有 60 万只宠物。然而宠物健康状况却不容乐观，现仅对宠物犬和 猫皮肤病发病情况作一介绍。 宠物犬和猫的真菌、细菌及混合感染性皮肤病在我国 宠物皮肤病中占有相当的比例。对 1200 多个病例的资料调查表明犬皮肤病发病率 达 20(马衍忠等，2000)。对宁波市自 1994,2000 年发病的犬各类皮肤病 351 例， 经检查确诊为螨虫、真菌混合感染性皮肤病，其中蠕形螨和真菌混合感染的 92 例， 占 26.21，蠕形螨、耳痒螨、真菌混合感染的 57 例，占 16.24，疥螨、真菌混合感染的 33 例，占 9.4，蠕形螨、疥螨、真菌混合性感染的 169 例，占 48.15(洪晓文，2000)。王祥生等对 2675 只皮肤病犬临床诊断，结果真菌性皮肤病 451 例，占 16.86，螨虫和真菌混合性感染皮肤病 1152 例，占 43.07。2004 年又对 313 例皮肤病犬诊断，结果真菌性皮炎 126 例，占 40.25(王祥生，2001)。廖晓兵等报道，引起犬皮肤病的病因可分为 10 类，其中以螨虫的感染率最高，真菌性皮肤病的危害最严重(廖晓兵，2004)。刘永旺等近年来对南京地区犬皮肤病的调查表明，引起犬皮肤病主要为螨虫和真菌(刘永旺，2004)。丁明星对 42 只非皮肤病犬、每只犬 7 个部位的被毛进行真菌分离、鉴定，被毛样本总数 294， 在 分离鉴定结果为 42 只犬全部检出真菌; 294个样本中，共培养出真菌总数 277 株;7 部位平均真菌数 39.6 株，每只犬平均培养出真菌数 6.6 株;耳内真菌数最高，高出 7 部位平均数 33.8。猫的小孢子菌对人构成了很大的威胁。据英国的调查，与感染猫接触的人有 50感染真菌，并且 69的家庭至少 1 人感染(丁明星，2003;Pepin 1987)。 ，宠物市场猫的带菌率为 45(吴吴金节等报道，户养猫的犬小孢子菌带菌率为 30 金节等，1999)。宠物真菌性 6 宠物用复方酮康唑香波的药学研究皮肤病由于其病程较长、反复发作，治疗后易复发，长期内服给药有一定副作用，且用药途径麻烦，对患畜的健康有很大的影响。因此开发预防和治疗宠物犬和猫真菌、细菌及混合感染性皮肤病的新兽药或新制剂势在必行。 世界动物保健品行业排名前 20 的 2001 年第一个研制出具有抗真菌和抗细菌双重功效的宠物犬和猫专Virbac 公司 用香波——Keto-Chlor 香波，未见其专利报道，其主要成分是 1酮康唑(Ketoconazole， 和 KCZ) 2葡萄糖酸氯己定(ChlorhexidineGluconate，Chlor-G)，用于预防和治疗任何年龄的宠物犬和猫细菌、真菌及混合感染性皮肤病，如皮炎、皮脂溢;使用前应用力摇匀，先用温水浸湿宠物被毛，然后涂足量香波，轻柔，涂匀，使其在宠物身体上保留 5min,10min，然后用洁净温热水冲洗，用完后吹干动物被毛。如果需要可以重复一次，每周 2,3 次，连用 4 周，然后每周 1 次，再酌情使用。该产品有 3 种规格上市，其预防和治疗犬和猫真菌、细菌及混合感染性皮肤病效果良好(Adam et al 2002)。 我国研制开发成功的二类以上新兽药主要有抗生素类:安普霉素、氟苯尼考;合成抗菌药:乙酰甲喹、恩诺沙星、达氟沙星、二氟沙星、沙拉沙星;抗菌促 ひ 耗俏魈 ? 掖肌? ? 还闫卓辜纳 嬉 喊?酱镞颉?冶酱镞颉 ? 兀豢骨虺嬉 郝若沁拎ぁ?蚊顾于?矶琶顾于?,厦顾于?乜酥槔 ，鲜鲆?锍 阴,奏 ? ? ?,厦顾厥粢焕嘈乱?猓 渌 轮频亩 嘁?铮 ? ?俏魈?谴偕 ぜ镣猓 渌 强咕 ?蚩辜纳 嬉 ǔ抡攘竦龋?002a;2004b;邱银生，2004)，且多数是食品动物用药。宠物专用药几乎是一片空白，没有正式报批的品种，兽医临床多是使用人用药物，为了规范我国兽医临床用药，满足动物保健用药需求，适应国际动物福利法，开发动物专用药物具有很重要的意义。 宠物药用香波属于较新的品种，我国兽药典没有收载此剂型，也未见其国家或地方质量标准。因此，开发宠物用复方酮康唑香波，并制订其质量标准进行探讨，对我国兽药尤其是宠物用药的发展具有一定的意义。总之，开发宠物用复方酮康唑香波对宠物的保健、改善宠物的福利和我国兽药行业的发展具有一定的意义。 ( ,,酮康唑和葡萄糖酸氯己定研究现状 酮康唑(ketoconazole KCZ)属咪唑类合成广谱抗真菌药，一般浓度对真菌有抑制作用， 高浓度时对敏感真菌有杀灭作用。对多种类型的皮肤真菌、酵母菌(糠秕孢子菌属、球拟酵母菌属、隐球菌属)、霉菌(毛霉菌)具有良好的抑菌和杀菌活性。其作用机理是能选择性地抑制真菌微粒体细胞色素 P-450 依赖性的 14--去甲基 7 华中农业大学 2006 届硕士学位论文酶，导致不能合成细胞膜麦角固醇，使 14--甲基固醇蓄积。这些甲基固醇干扰磷脂酰化偶联，损害某些膜结合的酶系统功能，如 ATP 酶和电子传递系统酶，从而抑制真菌生长(陈杖榴，2001a)。 有关酮康唑的研究报道很多，仅人外用制剂就有香波(A Nguyen et al 2003Invader Heyden et al 2002)、洗剂(张少明等，2004;杨燕等，2001;马传学，孙伟，1997)、软膏(Faergemmann J 1984 Heel R C et al 1982 Degreef H et al 1981)、乳膏(Pierard G E et al 1991)、搽剂(范义凤，1998)、凝胶剂(Ortonne J P et al 1992)、滴耳剂、滴眼剂、栓剂、酊剂、醑剂、霜剂等多种剂型。其中酮康唑洗剂就有多种商品上市，如采乐、海王、康王、敬宇等，主要用于治疗脂溢性皮炎及头皮糠疹(方.