临床医学论文-EDTA-K2致假性血小板减少分析

临床医学论文-EDTA-K2致假性血小板减少分析 EDTA-K2致假性血小板减少分析 【关键词】 EDTA;假性;血小板计数 摘要 目的:探讨EDTA-K2抗凝血时导致血小板计数假性减少现象及避免措施。方法:对采用全自动血球计数仪检测，血小板计数值异常偏低的561例标本，进行再次血涂片，观察血小板分布情况，对其中发现的涂片与计数明显不符的5例患者再次抽血进行手工血小板计数、末梢血涂片观察血小板分布情况、抽取肝素抗凝血进行血细胞计数等方法复检。结果:上述5例在后三种方法复检时血小板计数在正常范围，与初次乙二胺四乙酸二钾(EDTA)抗凝血血细胞分析仪所测血小板计数结果明显不符。结论: EDTA抗凝剂偶尔可导致血小板发生聚集，引起血球计数仪计数血小板结果的假性减少，临床工作中应引起同行们的高度重视。 关键词 EDTA;假性;血小板计数 在临床检验工作中，常发现有少数病人经全自动血细胞分析仪进行血细胞分析时，血小板计数值异常偏低，临床反馈与临床症状严重不符，经手工计数或其他方法复检血小板数又正常，为探讨其发生原因，本文对血常规检验中遇到的5病例进行分析报道如下。 1 资料和方法 1.1 资料来源对2003年1月,2006年7月间用全自动血球计数仪进行血液分析时，血小板计数值异常偏低的561例(?50×109/L)，取同份血进行血涂片观察血小板分布情况，对其中发现的涂片血小板分布情况与计数值明显不符的5例，初步考虑存在血细胞分析仪血小板计数结果与真值不符的现象，依此做为符合研究条件的病例进行进一步研究。 1.2 方法 1.2.1. 对2003年1月,2006年7月间用我科门诊检验室全自动血球计数仪进行血液分析时，血小板计数值低于50×109/L 的561例患者的标本，均经二种仪器同时进行初检或复检，并取同份血进行血涂片观察血小板分布情况，对其中发现的涂片血小板分布情况与计数值明显不符的5例，一方面与临床了解临床症状表现，确定5例均无皮肤粘膜出血点、紫癜等明显出血征象、肝脾淋巴结不大，另一方面与患者协义:再次抽血进行EDTA抗凝血血球计数仪血液分析、手工血小板计数、末梢血涂片观察血小板分布情况、抽取肝素抗凝血进行血细胞计数等方法复检。同时进行了部分其它化验检查如凝血功能、纤维蛋白溶解试验、肝功能、肾功能、血脂、血糖、血流变、血液免疫球蛋白、补体含量、红细胞沉降率等，结果发现EDTA抗凝血在血球计数仪分析时再次出 现血小板计数值明显降低，用其它方法复检血小板却在正常范围内，其余的检验项目结果均未见明显异常。 1.2.2 血细胞分析仪为美国贝克曼-库尔特 MAXM 五分类血细胞分析仪和日本SYSMEX XT-1800五分类血细胞分析仪，试剂(溶血剂、稀释液、清洗液)为仪器配套试剂，全血校准液及全血质控物由四川迈克科技有限公司提供。 1.2.3 血细胞计数严格按有关操作进行。 2 结果 该组病例用全自动血球计数仪分析见血小板计数明显减少，仅7×,,9/L,33×109/L，但临床表现均无明显出血征象，与血小板计数值明显不符，肝脾淋巴结不大，在进一步检查过程中，均进行骨髓检查显示骨髓象无明显异常表现，血涂片血小板分布不少。其他化验检查如凝血功能、纤维蛋白溶解系列、肝肾功能、血脂、血糖、血流变、血清免疫球蛋白及补体含量、红细胞沉降率等结果均属正常范围。经显微镜下手工血小板计数PLT结果均大致正常、用肝素抗凝血做血小板计数结果也大致正常，末梢血液直接血涂片显示血小板数量不少，分布无明显异常，取EDTA抗凝血进行血涂片显示血小板明显聚集成簇(每簇中血小板数大于15个)甚至成片(血小板数约50个,100个)，极少见血小板单独存在。正是由于大量血小板聚集在一起，导致血小板计数的假性减少。经显微镜下手工血小板计数PLT结果为175×109/L,288×109/L;用肝素 抗凝血做血小板计数结果为119×10,/L,188×109/L;而直接末梢血涂片见血小板分布大致正常，见表1。 表1 5例患者检验结果(略) 3 讨论 3.1 由于EDTA抗凝剂对血液中细胞形态和血小板聚集性几乎均无影响，用EDTA作为血细胞分析仪进行细胞分析的抗凝剂已被ICSH (Intemational Council for Standardization in Haematology，国际血液学委员会) 认定，并得到广泛使用，但EDTA偶尔可导致血小板发生聚集，引起血小板假性减少，Onder等于1980年报道了EDTA可引起血小板聚集，出现假性血小板减少，以后引起了人们的注意。 3.2 EDTA致血细胞分析仪血小板计数假性减少的病理机制，到目前为止并不是特别清楚，可以确定的原因之一是:EDTA致血小板假性减少的发生，是在EDTA盐作为抗凝剂的前提下出现的免疫介导的血液中冷抗血小板自身抗体，究其原因，可能与血小板表面存在某种隐匿性抗原有关,,,。Bragnani G 等认为，EDTA可导致血小板活化，因而改变血小板膜表面某种隐匿性抗原构象，与存在于血浆中的自身抗体结合，激活PLA、PLC、AA、ADP、5-TH等活性物质。这些活性物质又能活化血小板纤维蛋白原受体，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团，出现使血小板互相凝集现象，这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体直接作用于血小板膜糖蛋白IIb/IIIa上，同时，这种与血小板结合的自身抗体 Fc端可与单核细胞或淋巴细胞膜上Fc受体结合，出现卫星现象。另外，动脉粥样硬化、血栓形成和炎症性血管疾病的发生、发展与血小板在体内的激活程度、单核细胞凋亡的状况相关,,,。 3.3 为了保证血小板计数的准确性，对结果有疑问的标本，可以采用不同的方法复检。 3.3.1 对于血小板计数值有疑问的标本，直接用EDTA抗凝血标本进行血涂片经瑞氏染色后，显微镜下观察血小板分布情况，如见血小板大量聚集或血小板分布并不减少(当然，这个工作需有一定的实践经验为基础)者，可视为可疑病例并进一步复检确诊。 3.3.2 Kunicka等提出，可增加一项血涂片间接计数血小板的方法作为补充。即为患者做末梢血涂片，经瑞氏染色后在厚薄适中处计数1 000个红细胞并同时计数所见到的血小板，求得血小板/红细胞之比值。再将此比值×红细胞数(红细胞数通过一般血液分析仪所得)，求得血小板数。此法虽不十分精确，但可以从另一侧面“间接”计数血小板，还可观察血小板的大小、形态、有无聚集及聚集体大小等,,,，本组研究中主要是采用此方法来初步确定血小板计数是否有误差，是一种简单易行的方法。 3.3.3 我们在研究中，换用非EDTA抗凝剂(本组用肝素)进行血小板计数复检，尽管计数结果与手工结果仍存在明显差异，不能做为最后结果向临床发放，但因排除了EDTA致血小板聚集的因素，对证实本症的诊断是一种非常可取的方法。 3.3.4 目前用于评价血小板计数准确性的“参考方法”是手工法血小板计数，但手工法本身不但精密度较差，而且在镜下也往往难以准确辨别血小板与某些非特异性颗粒，准确性也不够高，但对于异常结果的复检，仍不失为一种方便有效的方法。EDTA致血小板假性减少发生率极低，约为0.07%,1%,,,，但一旦发生，会导致临床进行大量的进一步检查，甚至可能引起临床误诊、误治。因此，这种EDTA依赖性血小板减少症应该受到广泛重视。 参考文献 ,,, Yamaguchi M, Mayumi M, Kasuya T. A Patient with EDTA,dependent pseudo thrombocytopenia who underwent clipping surgery for a ruptured aneurysm. Excerpta Med Section 25.Hematol,1998，68(2):93. ,,, Nicola MD，Maurizia BD.EDTA-dependent Pseudo thrombocytopenia association with Antiplateletand Antiphospholipid Antibodies.Am J Clin Pathol，2002，103:10. ,,, 朱忠勇.准确计数血小板方法学研究进展,,,.国外医学临床生物化学与检验分册，2002，23(3):132( ,,, Bragnani G,Bianconcini G,Brogna R,et al.Pseudo thrombocytopenia. Clinical Comment on 37 Cases,,,.Minerva Med,2001，92(1):13,17(