“关于成立或肿瘤高科技治疗中心”

“关于成立肿瘤高科技治疗中心” 项目书 北京北联美欧生物科技有限公司 李非 2010-12-8 国务院办公厅于2010年12月3日发布《关于进一步鼓励和引导社会资本举办医疗机构的意见》，明确表态鼓励社会资本以多种方式参与包括国有企业所办医院在内的公立医院。此国家政策出台的深刻社会背景在于长时间以来看病难的问题得不到解决，医疗资源过度集中，而民众对健康对医疗的需求却在不断加大，以恶性肿瘤为例，在如今的中国，每死去5个人其中就有1人死于恶性肿瘤！庞大的肿瘤病人群拥挤在有限的肿瘤救治机构门口，要么造成医疗质量的被迫下降，要么造成医疗费用的步步攀升。 问题的存在催生了具有巨大经济价值和社会价值的医疗市场，为此，在社会发展趋势的推动下，在国家宏观政策的指引下，我们决定引入社会资金进入肿瘤治疗领域。北京北联美欧生物科技有限公司应时而生，公司法人李非，年龄37岁，为白求恩医科大学附属三院普通外科硕士生，解放军总医院301医院陈香美院士的博士生（简历见附件）。公司旨在开展肿瘤综合治疗的基础上，重点在3个项目上纵深发展：自体细胞免疫治疗、肿瘤微创治疗和分子病理诊断技术。以下对项目内容、运营模式、市场预期及合作模式做详细介绍。 1、 项目内容 我们的三项核心技术均为现今炙手可热的肿瘤应用焦点技术，每一项技术都凝结着巨大的商业价值和科研价值。就单一项目而言，公立医院和民营集团均有关注和参与，但远未成规模。原因有两点：1、公立医院的体制相对僵化，新技术的引入需要层层审批；2、民营集团的科研前瞻意识不够，学术研究能力不足，仅依靠运作妇科医院的商业模式推动高科技领域，早早遭遇了发展瓶颈。此外，综合开展包括这四项技术在内的高科技肿瘤综合治疗中心，国内尚无先例！为此，基于我司核心骨干人员的优良学术背景和商业运作背景，占此先机推动肿瘤高科技综合治疗中心的建设，集细胞免疫治疗、肿瘤微创治疗和分子病理诊断于一体，我们将是国内第一家！以下对各项技术加以概述。 1、 自体细胞免疫治疗 绝大多数的恶性肿瘤病人都面临着复发和转移的风险，一旦出现则预后明显下降。传统治疗方法（手术、化疗、放疗）各有苦衷：广泛转移及多次复发的病人根本无法耐受手术和放疗；化疗方案的重复追加由于副作用的存在往往使患者中断治疗，并有相当一部分类型的肿瘤对化疗不敏感。而细胞免疫治疗则是通过提高病人自身的免疫系统的功能，增强特异性肿瘤杀伤细胞的分化能力，在没有任何副作用的前提下，可以细胞水平上杀灭肿瘤。这项技术被认为是“二十一世纪最有希望攻克肿瘤的治疗技术”，美国FDA于今年4月29日批准了第一支基于该技术的治疗产品上市，中国也与去年3月份立法规定此技术作为第三类医疗技术，允许有资质的医院开展。 作为公司的法人，我本人参与了307医院肿瘤细胞免疫治疗中心的建设和运营的全过程，有着很深的个人体会。一方面，技术原理的独特和无害性强烈吸引着广大病人，中心运营的最初3个月接诊150余人，单项经济收入接近500万，而且，随着宣传范围和深度的增加，病人流与日俱增；另一方面，这项技术也的确解决了很多人的病痛。一个肾癌肝转移的女患者在接受治疗后转移灶从占位1200多立方厘米下降至200多立方厘米，从被中山医科大学附属医院宣布3个月内死亡的状态直到今天生活质量的全面提高。 这项技术在国内若干家公立医院已经开展，但以307医院为例，在与民营企业（上海泓源公司）合作之前每年收治病人不超过80人，而社会资本进入后3个月即突破了150人次，显示了良好的合作经营前景。目前国内致力于此技术的规模化公司不超过5家，分别为上海克莱讯、上海泓源、深圳博泰、北京永泰、浙江泰达公司，合作的医院以若干家部队医院为主，广大的医疗机构尚处在待开发状态。 2、 肿瘤微创治疗 所谓微创治疗包括射频消融治疗，氩氦刀治疗，及粒子植入治疗等，即将穿刺针穿入肿瘤内部经过加热、冷冻或离子植入内放射治疗，将肿瘤用物理的方法使其坏死，但肿瘤的抗原依然存在，继续诱导机体产生抗体来杀伤这些残留的肿瘤细胞，从而达到明显的治疗效果。 有相当一部分肿瘤病人由于高龄、局部比邻大动脉、脏器功能差、全身功能差、对放疗不敏感等原因，非常适合开展肿瘤微创治疗，项目的市场需求巨大。团队骨干成员之一冯威健教授，系留日医学博士，肿瘤学教授，硕士研究生导师，现任首都医科大学附属复兴医院肿瘤内科主任（简历见附件），是公司负责搭建肿瘤微创治疗平台的主要负责人。 针对微创技术，公司拥有“肿瘤内注射盐酸化学消融治疗实体肿瘤”的专利技术。传统治疗方法是应用无水乙醇进行肿瘤内注射，但我们通过研究发现注射盐酸的治疗效果是无水乙醇的15倍，并且不会透过癌组织被膜，不会破坏肿瘤周边的正常组织，前期研究结果显示治疗效果非常可观，我们坚信此技术将是肿瘤治疗领域的一次革命。目前我司正在致力于临床前研究工作，尚需完成I、II和III期临床试验。 3、 肿瘤分子病理诊断 所谓分子病理检测，是基于组织、细胞、染色体、基因不同层面的检测，提供关于肿瘤的全面的检测报告，包括早期致病风险检测、疾病确诊、治疗方案、药物选择、疾病预后评估及疗效与复发检测。 除了常规检测之外，我们将分子诊断技术引入到肿瘤疗效评价系统中，从而更科学可观的评价综合治疗的疗效情况。主要包括如下四个方面：一、我们针对结肠癌、卵巢癌、乳腺癌、甲状腺癌、神经纤维瘤、视网膜母细胞瘤进行基因水平的检测，来评估存在基因突变和不存在基因突变的病人对治疗的应答情况，从而更准确的定义不同治疗方案的适应症人群，二、我们可以对常规化疗、分子靶向药物治疗、内分泌治疗等相关的耐药基因进行检测，确定最佳的治疗方案；三、对病人复发的可能性进行预测；四、通过实体瘤FISH检测，建立实体瘤的诊断、疗效评价及预后评价系统。 针对分子诊断技术，我们与中国人民解放军空军航空医学研究所附属医院分子病理中心建立了战略合作关系，共同对技术进行营销、推广。 这三项肿瘤前沿技术各自具有巨大的科研价值和经济价值，以盐酸肿瘤内破坏术为例，作为药品上市后的市值保守估计在5亿人民币；此外，这几项技术又相辅相成，微创方法最大限度的解决局部肉眼可见的肿瘤病灶、细胞免疫治疗改善全身免疫系统杀灭肉眼无法捕捉得肿瘤细胞、分子病理诊断对治疗的有效性进行客观评价，并评估病人的预后。这三项技术的结合模式将成为国内首创，所产生的科研结果将具有国际领先的水平。 2、 运营模式及进度 我公司分别与北京大周和康生物技术有限公司和中国人民解放军空军杭康医学研究所附属医院分子病理中心建立了战略合作关系，同时购买了“肿瘤内注射盐酸化学消融治疗实体肿瘤”的专利使用权。公司初步确定了运营模式，分为两个运营单元：医疗单元和药品单元。医疗单元负责与公立医院合作建立肿瘤治疗中心，包括单一技术项目中心（例如细胞免疫治疗中心）和综合治疗中心；药品单元负责“肿瘤内注射盐酸化学消融治疗实体肿瘤”的产品开发工作。医疗单元尚处于市场开发阶段，已经洽谈并有合作意向的医院包括解放军306医院、466医院、北京711医院、天津南开医院、锦州市中心医院、吉大附属三院、四川省肿瘤医院、重庆市万州区中心医院、广西玉林肿瘤医院等医院；药品单元已经完成了专利使用权购买协议草案，近日内正式签订协议。 3、 市场预期 医疗单元合作医院20家，年收入在500~1000万的医院8家，年收入在1000~2000万的医院7家，年收入在2000~3000万的医院在3家，年收入在3000万以上的医院2家。总计经营规模预估在年收入2.5亿元人民币。 药品上市后直接收入5亿元人民币，附加值1亿元人民币。 总计经营规模在8~10亿之间。 初期目标（2年内）：建立5家合作医院，完成药品的I、II期临床试验； 中期目标（3~5年）：建立20家合作医院，完成III期临床试验，通过SFDA审批； 远期目标：成立具有国际一流水平，集科研、诊断、治疗和康复于一体的肿瘤综合治疗中心。 4、 合作模式 拟引入3000万人民币，占35%的原始股份 北京北联生物科技有限公司愿与您一道成长，共同发展，创建医疗领域内的一流企业。 联系人：李非 13501350502 附件一：核心成员简历 李非——北京北联美欧生物科技有限公司法人 男，37岁，白求恩医科大学附属三院（现更名为吉大附属三院）普通外科硕士，研究胰腺癌的临床治疗与基础研究；2000年就读于解放军总医院北京301医院陈香美院士的博士生，致力于基因芯片及细胞免疫治疗的研究。2003年至2009年任深圳健安医药有限公司华北大区经理； 2009年任重庆协和医院经营院长；2010年3月任上海泓源生物科技有限公司医疗总监，负责开展细胞免疫治疗。 冯威健——北京北联美欧生物科技有限公司医疗顾问 留日医学博士，博士后，主任医师，肿瘤学教授，肿瘤学硕士研究生导师。1983年本科毕业后考取中西医结合肿瘤临床硕士研究生，师从肿瘤泰斗余桂清和张代钊，1986年获得硕士学位，1989年以访问学者公派赴日本国家癌症中心从事肿瘤药物治疗和微创介入治疗的研究，1992年获得日本东邦大学医学部博士学位，1995年晋升肿瘤学教授，33岁成为国内最年青的正高级肿瘤专家。1998年在日本金泽大学完成博士后。历任河北医科大学肿瘤医院肿瘤内科主任、北京大学世纪坛医院肿瘤内科主任、首都医科大学附属复兴医院肿瘤内科主任、首都医科大学肿瘤学系委员、首都医科大学肺癌治疗中心副主任。 目前担任世界疼痛医师协会中国分会癌痛专业委员会副主任委员兼秘书长，中国抗癌协会临床肿瘤协作专业委员会执行委员，中国老年学学会肿瘤专业委员会执行委，中国抗癌协会肿瘤微创治疗专业委员会委员，中国抗癌协会肿瘤抗肿瘤药物专业委员会委员，中国生物医学工程学会靶向治疗专业委员会委员，中国中西医结合学会肿瘤专业委员会委员，北京中西医结合学会肿瘤专业委员会委员。 李昕泉——北京北联美欧生物科技有限公司医疗顾问 医学博士，血液肿瘤学硕士研究生导师。现任武警医院血液肿瘤科主任。总后科技部评审专家、中国医师协会血液肿瘤分会委员。 附件二：与466医院合作建立高科技肿瘤治疗中心的项目提议 【概述】肿瘤领域的发展契机及我们的构想 很多医院通过发展肿瘤科带动了医院整体业务量及品牌的提升，主要基于以下几点：1、肿瘤病人的基数大。据美国癌症协会2007 年的统计，癌症在全球范围内每年约760 万人死亡，占总死亡人数的13%；2、寻求发展的切入点多（手术、放化疗、免疫治疗、中医中药治疗等）；3、具有科研学术价值，很多新的治疗方法在发展临床的同时也收获了很多科研成果；4、临床经济收益客观；5、符合国家新近一直在倡导的致力于高科技的发展方向，社会意义重大。 而事实上从国内整个肿瘤领域的发展现状看，仍然存在很大的缺口。多数的大型综合医院包括肿瘤专科医院很多都在沿袭着传统发展模式，仍然将未来发展局限在手术及传统放疗、化疗的领域里；当然也有部分医院关注到了新的切入点和发展模式，例如针对最近比较受关注的细胞免疫治疗，部分医院已经在与民营企业及研究机构合作开展肿瘤的生物治疗（细胞免疫治疗），备受病人及业内人士关注，国家也将其列为第三类医疗技术，设置了完善的准入制度。但综合评估现有医院的发展模式，普遍存在三个最主要的问题：1、切入点单一。部分医院确立细胞免疫治疗技术为切入点，但是，尽管这种方法绿色无害，但由于生物应答反应需要一段时间，而很多晚期病人肿瘤负荷大、部位多、生长迅速，所以如果能结合开展微创治疗，首先最大限度的降低肿瘤负荷，最快的抑制肿瘤生长，才能争取病人的生存时间来开展包括细胞免疫治疗在内的绿色无害的生物治疗技术，并达到最佳的治疗效果。2、缺乏强大的评价系统和科研基础，发展后劲不足。尽管新的治疗方法层出不穷，但普遍缺少系统的观察和科研统计，原因有两个：评价系统的缺失和科研基础的薄弱。3、模式陈旧。很多医院仍旧沿袭着传统的发展模式，皇帝女儿不愁嫁，事实上，打破传统，迅速推行医院营销和宣传的新思路在现阶段将尤为重要。医院之间的竞争，包括在肿瘤领域的竞争将会日趋激烈，而现阶段最关键的因素是速度，谁抢先占领宣传通道，快速形成对广大患者群的全方位的营销，谁将占据主动。这注定是一个快鱼吃慢鱼的市场。 市场上普遍存在这么大的缺口，对我们来说就一定是发展的契机。我们真诚地希望能与贵院一道抓住这个历史机遇，以肿瘤领域为突破口，在3年之内完成对医院品牌的质的提升。 我们构想建设一个集分子诊断、微创治疗和细胞免疫治疗于一体的高科技肿瘤诊疗中心，将这三个极具市场竞争力的切入点合并在一起，我们将是国内第一家！核心竞争力有四点：一、细胞免疫治疗的发展潜力巨大，很有可能成为继手术、放化疗之外的新的常规治疗方法；二、微创技术及综合治疗的开展，包括血管栓塞治疗、氩氦靶向消融、射频消融治疗、超声聚焦治疗、光动力治疗、放射粒子植入等。除了具备创伤小、疗效确切、定位准确、选择性好等优势，还能够提高肿瘤组织对放、化疗的敏感性，有助于术前减轻瘤负荷，配合免疫治疗可以有效解决术后残留或复发的问题。三、以分子诊断为基础，建立强大的疗效评价系统；四、依靠公司强大的营销网络迅速拉动新技术的宣传，在最短时间内提升业务量及经济效益。以下从这四个方面分别论述项目的可行性和意义。 【项目的可行性和意义】 一、细胞免疫治疗 免疫细胞治疗技术是指从人体外周血中分离的单个核细胞经过体外激活和扩增后输入患者体内，直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞，或调节和增强机体的免疫功能。该技术能制备出两大类不同特点的细胞：第一类细胞为能在患者体内激发抗肿瘤活性的细胞，如DC疫苗；第二类细胞为具有内在抗肿瘤活性的细胞，如CIK细胞、DC-CIK细胞等。 我们（北京北联美欧生物科技有限公司）迄今为止，已经完成了超过百例患者的临床治疗。副作用以自限性低热（37(C (38(C）为主，所观察到的副作用均为1或2级并且具有自限性。从我国及国外实践来看，病人治疗后感觉体力增加、食欲改善、睡眠好，不易感冒，在治疗期间体重多数增加，体力状况明显好转，与化疗相比病人更易接受。 我们在临床上已经观察到该治疗在部分患者中具有以下效果：对手术后病人：清除体内散在癌变细胞，预防多种肿瘤术后的复发和转移，如肝癌、肾癌；与放化疗结合使用：在食管、胃、肺、肠、乳腺、肝等肿瘤的治疗中显示出很好的协同作用和疗效维持效果，改善患者生活质量，减轻放化疗副反应；与靶向治疗结合使用：作为绿色治疗，已初见治疗效果，如胰腺癌患者。长期使用可以控制肿瘤生长，维持疗效，并实现带瘤生存。 二、微创治疗及综合治疗 所谓微创治疗即是包括射频消融治疗，氩氦刀治疗，及粒子植入治疗等，将穿刺针穿入肿瘤内部经过加热、冷冻或离子植入内放射治疗，将肿瘤用物理的方法使其坏死，但肿瘤的抗原依然存在，继续诱导机体产生抗体来杀伤这些残留的肿瘤细胞，但由于肿瘤患者身体的免疫细胞在质量及数量上均低下，如果全身给予细胞免疫治疗，补充DC+CIK细胞治疗，从局部到全身，从微观到宏观均可以达到明显的效果。 （一）肿瘤消融治疗 消融治疗一般在B超、CT、磁共振引导下进行穿刺，实时监测穿刺的全过程。手术方式有经皮穿刺，外科手术直视下穿刺，腔镜下穿刺。治疗时，将探针刺入肿瘤内，氩氦刀冷冻或者射频加热消融肿瘤组织。包括氩氦靶向低温冷冻手术，射频消融，化学刀化学消融。原理主要是利用冷冻或者高温或者消化液成分，消融破坏肿瘤组织，促使细胞内和处于遮蔽状态的抗原释放，刺激机体提高抗肿瘤免疫的能力。 对于早期的小肿瘤，消融治疗可作为手术的替代治疗。对于晚期较大的肿瘤可作为姑息治疗，增强综合治疗的效果，可减少肿瘤负荷，减轻症状，提高生活质量，延长生存时间。 影像引导下的消融治疗具有定位精确、治疗精准、创伤小、痛苦轻、疗效确切、适应症广等优点。与传统手术相比，它大大降低了手术风险和并发症率；与放、化疗相比，它没有肿瘤组织对化疗药物不敏感或受放疗最大剂量限制的问题。 微创介入手术还可在磁共振引导下进行，磁共振兼容性微创介入治疗代表了该类技术的最高水平，具有较大的创新性和先进性。作为一项国际上技术非常成熟的肿瘤微创治疗手段，消融治疗是临床肿瘤治疗的理想选择。 消融治疗适应症的范围较广，主要应用于全身各种实体肿瘤。 1、呼吸系统：肺癌、肺部良性肿瘤、咽喉部肿瘤、鼻咽癌； 2、泌尿系统：前列腺增生、前列腺癌、肾癌、膀胱癌； 3、消化系统：肝癌、胰腺癌、直肠癌、肝血管瘤、胆囊癌； 4、骨骼系统：骨骼的良恶性肿瘤； 5、内分泌系统：甲状腺癌、肾上腺癌； 6、神经系统：脑膜瘤、神经胶质瘤、脊髓膜瘤； 7、生殖系统：子宫肌瘤、子宫癌、卵巢癌、会阴部肿瘤、阴茎癌； 8、乳腺：乳腺癌、乳腺纤维瘤； 9、皮肤：皮肤癌、黑色素瘤、血管瘤； 10、其它：用于癌症止痛、神经纤维瘤、脂肪肉瘤、口腔癌。 对于以下情况患者，其它治疗方法较为棘手，消融治疗将是最理想的治疗手段： 1、失去手术时机的晚期癌症； 2、高龄患者、器官功能差、全身状况差的患者难以耐受手术与麻醉； 3、肿瘤多中心发生，难以完全切除； 4、放化疗效果欠佳的中晚期肿瘤； 5、手术、放疗、化疗等治疗后复发； 6、负荷大，累及大血管、重要器官的肿瘤； 7、有较重局部症状的中晚期肿瘤患者。 消融治疗优点： 1、效果显著：靶向治疗，定位精确，可彻底摧毁病变组织。 2、微创治疗：损伤少，痛苦少，出血少，并发症低，对脏器功能影响小，患者恢复快，住院时间短。 3、安全性高：影像下监控探针刺入全过程，避免对重要器官的付损伤；血管热池效应可避免血管损伤；探针只在尖端发生冷冻或者热凝固，不损伤穿刺路径的正常组织。 4、适应症广：可用于年老体弱患者，其它疗法所无法治疗或治疗失败的晚期例。 5、实时监控：手术全程影像监控，冰球冻融影像监控，组织温度全程监控。 6、可重复性：可再次治疗，巩固和增加疗效。 7、操作简单：局麻下施行，定位与穿刺技术简单易学。 8、联合应用：可单独施行，也可与放化疗、手术等序贯联合应用。 9、绿色治疗：物理治疗，无放化疗毒副作用，对正常组织细胞无伤害。 消融治疗需要克服的缺点 1、消融区边缘可能残存瘤细胞，成为复发来源； 2、消融范围过大可引起器官损害； 3、对周围胆管、胆囊、输尿管等空腔脏器有损伤作用 。 消融治疗可能出现的并发症： 1、术后反应性发热； 2、术后出血； 3、血小板降低：冷冻治疗尤其肝冷冻后常出现血小板降低，由于冷冻病灶大量摄取及破坏血小板所致，一般会自发性恢复 。 4、肌红蛋白尿：冷冻可引起肌红蛋白尿，严重者发生肾衰竭。冷冻治疗后常规给予输液、碱性药物可预防。 5、冷休克：冷休克是最严重的冷冻并发症，重在预防，治疗以保守综合治疗为主。 （二）放化疗粒子植入术（粒子刀，体内伽马刀） 利用CT介入肿瘤打靶技术，将粒子植入针插入肿瘤内，在CT和TPS的指导下，将化疗粒子或者放射粒子植入到肿瘤内发挥区域化疗或者体内伽马刀的作用。适用于不能射频治疗的晚期肺癌、肝癌、前列腺癌、腹腔盆腔肿瘤、脑肿瘤等。 （三）肿瘤内微米注射、肿瘤内化疗术、门脉化疗术、肿瘤内基因注射治疗术 利用CT介入肿瘤打靶技术，将微米注射针插入肿瘤中心，在CT的监视控制下，把高浓度化疗药直接注射到肿瘤内部，实施区域化疗、缓释化疗和引流淋巴结内化疗。适用于：晚期肿瘤伴有区域淋巴结转移者，射频消融后追加肿瘤内局部化疗，效果更佳。将微米注射针插入肝内门静脉，将化疗药注射到门静脉进行区域化疗。适用于：肠癌、胃癌的肝转移。将微米注射针插入肿瘤内，将抗肿瘤基因类药物，直接注射到肿瘤内，发挥抗肿瘤作用。适用于：各种晚期实性肿瘤如肺癌、肝癌、头颈部癌、胸膜肿瘤、腹腔盆腔肿瘤等。 （四）肿瘤介入治疗 经皮穿刺肿瘤动脉，在DSA下将高浓度化疗药物及栓塞剂直接注射到肿瘤供养血管，破坏肿瘤，也可以将免疫细胞经动脉直接灌注到肿瘤内部。主要用于原发性肝癌、肺癌和腹腔、盆腔肿瘤。 （五）全身热疗 采用国际领先的微波电磁控制技术，通过体内深部加温大血管血液，利用血液循环将热量带到全身而产生全身热疗效果。提高病人免疫功能，减少肿瘤细胞释放血管生长因子，直接抑制和杀伤肿瘤细胞。全身热疗可以单独治疗肿瘤，还能与手术、放疗、化疗配合使用。配合手术可缩小手术范围，降低手术难度。术后热疗，能防止癌细胞的转移扩散，使伤口尽快愈合；热疗合并放疗将更加有效地杀灭肿瘤细胞，并可减少或抑制放疗造成亚致死性损伤细胞的修复；热疗能破坏细胞膜的稳定性，增加细胞膜的通透性，有利于化学药物渗透和吸收，并随着温度的升高，不仅使药物的摄取和药物反应迅速加快，还可以抑制细胞核内断裂DNA的修复。故合并化疗能起到协同增敏的作用，提高疗效。 大量的临床病例证明，热疗对晚期肿瘤引起的疼痛、胸腹水治疗效果十分显著。明显改善病人的一般状况和临床症状，有部分病人出现肿瘤原发灶和转移病灶消失，充分显示出大功率微波全身热疗安全、有效的特点。 体腔热灌注化疗：利用穿刺留置导管技术，将化疗药物稀释液和/或癌性积水吸引到治疗机内自动加热后，通过导管注入胸腹腔，在计算机全程动态监测和反馈调节下，保持治疗液和/或积水相对恒定的温度，循环灌注，实现对转移癌细胞的有效杀伤。 （六）中西医结合治疗   中西医结合对肿瘤的诊断具有思路广、方法多、指标全面等特点。证型的研究为制定肿瘤的治疗方案提供更全面、更准确的依据。从中医辩证的观点，恶性肿瘤是全身性疾病在局部的表现，除了现代医学的解剖部位、病理类型、细胞学等现代医学的诊断外，还要结合全身生理、病理变化，在不同病期，不同阶段所表现不同的证型，诸如各种虚证、气滞、血瘀、痰凝、热毒等。在应用手术、放疗、化疗等攻伐疗法的过程中或其前后，再根据不同的证型表现，进行辨证施治，局部与整体治疗相结合，针对性强，疗法全面，效果明显提高。中西医结合可增强疗效，减少副反应，延长生存期，提高生存质量。微创介入与中医中药的结合。 术前中医的调整，纠正阴阳失衡，可扩大手术的适应症，减少手术的并发症及后遗症。手术后及时配合中医中药治疗，可加速康复，为尽早及时化疗创造条件。 术后较长时间结合中医中药治疗，能提高远期生存率。化疗与中医中药的结合能减轻副反应，并有增敏增效的作用。放疗与中医中药的结合能减轻近期副反应及远期后遗症，提高5年生存率。现代国际肿瘤中心以中西医结合的强大优势吸引大量国际患者。 三、分子诊断 我们将分子诊断技术引入到肿瘤疗效评价系统中，从而更科学可观的评价综合治疗的疗效情况。主要包括如下四个方面：一、我们针对结肠癌、卵巢癌、乳腺癌、甲状腺癌、神经纤维瘤、视网膜母细胞瘤进行基因水平的检测，来评估存在基因突变和不存在基因突变的病人对治疗的应答情况，从而更准确的定义不同治疗方案的适应症人群，二、我们可以对常规化疗、分子靶向药物治疗、内分泌治疗等相关的耐药基因进行检测，确定最佳的治疗方案；三、对病人复发的可能性进行预测；四、通过实体瘤FISH检测，建立实体瘤的诊断、疗效评价及预后评价系统。 【项目的投入】 医院方提供：场地（医疗场地和办公场地）、医护人员、医院的品牌、综合医疗服务； 我方提供：设备、仪器耗材、技术路线、营销宣传、学术推广服务、人员培训与工资待遇。 【项目预期回报】 科研学术 - 建设、培养科研队伍； - 建设成熟的生物免疫试验平台； - 共同申报“肿瘤生物治疗中心”的项目准入； - 申请基金及重大科研项目，在国际国内发表相关。 经济收入 - 三年内达到年收治病人2000人次； - 三年内达到年项目直接收入8000万元以上。 医院品牌 - 在国内建立第一家高科技肿瘤诊疗中心，共同申报成立北空肿瘤治疗中心。 【企业介绍】 北京北联美欧生物科技有限公司致力于研发生物技术、完成高科技产品的医学转化及对医院进行投资与管理，是北京大周和康生物技术有限公司的成员公司。北京大周和康生物技术有限公司，原名北京北医联合生物工程有限公司，由北京大周和康生物技术有限公司和北京创新策略投资顾问有限公司于1998年7月在北京经济技术开发区共同组建，注册资金：3333.33万元，主要经营范围包括开发、生产、销售生物制品、药品、保健品、医疗及售后服务。公司1999年破土动工，2000年当中国政府参与到全球人类基因组计划的同时，北医药业被国家科技部认定为国家人类基因组北方中心基地，并参与全世界基因组课题.2001年通过国家药品监督管理局GMP静态认证，2002年通过国家药品监督管理局GMP动态认证，曾多次承担国家级科技项目，如“863”计划“95”攻关计划及北京市重大科技项目等。公司董事长李非系解放军总医院陈香美院士的博士生，公司拥有一大批研究生导师、临床及基础专家、专业技术人才及营销团队。 【结论】 综上所述，日益高发的肿瘤疾病，目前治疗方法存在的诸多缺陷，肿瘤治疗费用的据高不下，都为肿瘤微创治疗技术的发展提供了一个良好的机会。我们认为，细胞免疫技术和消融治疗是技术成熟，安全性高，疗效确切的治疗手段。该项目具有“高” 、“新” 、“独”、“宜”的特点。“高”为高起点，高效益；“新”为技术新；“独”为独特性，创新性；“宜”为患者需要，适合社会经济发展状况。 分子诊断、细胞免疫治疗及消融技术同为目前世界最先进的诊疗技术，如果我院能建立这样的一个综合治疗平台，势必未将来带来良好的经济效益和社会效益，进一步巩固和提升医院在肿瘤绿色治疗领域的领导地位。 附件三：与四川省肿瘤医院合作建立肿瘤生物治疗中心的项目计划书 尊敬的院领导： 为推进包括细胞免疫治疗、基因治疗、干细胞等生物技术在肿瘤领域的应用，现诚恳盼望能与贵院合作，共同成立肿瘤生物治疗中心。 以下汇报内容包括：1、合作的创新点；2、基本合作协议；3、项目介绍； 4、企业介绍；5、投资计划；6、本项目的和质量保证措施；7、本项目的风险评估和应急预案。 不足之处，敬请贵院领导提出指正！ 1、 合作的创新点 1、 在贵院的优势平台上，发挥企业强大的科研能力，孵化出针对肿瘤生物治疗领域具有国际水平的科研成果。 1.1、 公司董事长及总经理系解放军总医院陈香美院士的博士生，基于自身的学术科研背景，长久以来建立了个性化的企业发展宗旨：以科研拉动企业经济增长； 1.2、 公司成立以来，承担过多项包括国家级火炬项目、北京市级火炬项目、“1035”工程项目、“863”计划项目、“95”攻关课题10多项，申报国家发明专利及PCT国家专利近10余项。熟悉包括科研立项、中期研究、成果总结、申报审核在内的整个流程； 1.3、 公司深信，肿瘤生物治疗未来的学术制高点体现在两个方面：其一、包括生物治疗在内的综合治疗模式的确认，即探讨生物治疗与其他传统治疗方法的序贯组合模式；其二、与国际接轨，建立针对生物治疗的疗效评价系统（这一系统有别于现有的肿瘤治疗评价系统），从而实现肿瘤病人的个体化治疗； 1.4、 综合分析贵院的整体实力，我们郑重承诺在期内完成国内统计源期刊文章10篇，国际期刊文章2篇，申报地方及国家科研基金5项，组织地区级学术会议4次，国家级会议1次，国际交流1次，为贵院整体学术品牌的提升做出自己的贡献； 1.5、 公司承诺将保证合作建立的肿瘤生物治疗中心通过国家卫生部的项目审核，一方面我们与包括中国医师协会在内的重点审核机构建立了长期的战略合作关系，同时我们将严格按照GMP建设试验室，并建立各项相关技术标准。 2、 多项先进技术的引进 公司拥有针对肿瘤领域最前沿的诊疗技术，包括低含量DNA突变检测技术、肿瘤分子标志物/蛋白筛查技术、肿瘤相关病毒检测技术、靶向药物筛选技术、DC-CTL技术、干细胞技术及以盐酸介导的肿瘤内破坏术等。这些技术的引入将全面提高贵院在肿瘤领域的科研和临床水平。 3、 营销模式的创新 3.1、学术推广。公司拥有一批学术型的营销人员，负责将医院的新技术介绍给其他目标医院的临床负责人，并与我院建立合作关系。营销人员皆为医学本科以上学历，富有多年的临床推广经验； 3.2、公益组织。公司与红十字会、慈善总会等公益组织有多年的合作经历，能够深入到最基层开展各种公益活动，组织病人进行面对面的科普讲座和技术宣介，高效树立我院的品牌； 3.3、公司与中央媒体有着良好的合作经历，并直接投资了部分地方门户网站（例如重庆热线等），可以依靠强势媒体，迅速扩大贵院在西南地区乃至全国的品牌影响。 2、 基本合作协议 甲方：四川省肿瘤医院 乙方：北京北联美欧生物科技有限公司 为进一步提高我省肿瘤治疗水平，紧跟国内外医学发展前沿技术，促进生物医学技术的科研与临床应用，四川省肿瘤医院（以下简称“甲方”）与 北京北联美欧生物科技有限公司（以下简称“乙方”）经过友好协商，依据优势互补、互利互惠、讲求实效、共谋发展的原则，就建立紧密的科研合作关系，建立互信互促、共同发展的合作机制，共同组建“肿瘤生物治疗中心”（以下简称“中心”），达成如下协议： 1、 合作项目： 双方共同组建四川省肿瘤医院医院“肿瘤生物治疗中心”。 2、 合作内容： 双方共同组建四川省肿瘤医院医院“肿瘤生物治疗中心”，开展临床恶性肿瘤生物治疗，投入相应技术、设备，开展临床治疗，成果共享、风险共担。 3、 业务范围： 本项目的业务范围包括，针对门诊及住院患者进行树突状细胞（DC）治疗；CIK细胞治疗；NK细胞治疗。除上述项目外本中心新增的生物治疗及其他治疗项目，经双方同意并按程序向有关部门报批同意后即可实施。 4、 技术申报审批： 本项目技术所属类别按国家、四川省相关技术管理规定及规范要求进行申报，细胞治疗技术需符合临床准入条件，并经过必要的伦理学审查和物价报批工作。申报期间，在各项条件具备的前提下，可在院内范围进行试运行。 5、 合作期限：12年 合作起算日为：自合同签订之日起生效，有效期至2022年 月 日。 6、 双方责任： （一）、甲方责任： 1、项目场地： （1）医疗场地：包括实验室、门诊、病房。 （2）办公场地：可容纳30人办公的行政及营销用房。 2、现有设备：达成合作意向后附表《甲方现有设备明细表》。 3、医疗人员：按中心实际工作需要配备参与中心项目的医师、护士、实验室人员等。 4、无形资产：甲方提供医院品牌、社会关系、医疗市场等无形资产为中心开展各项工作服务。 （二）、乙方责任： 1、技术投入： 乙方投入“肿瘤自体免疫细胞治疗技术”： 树突状细胞（DC）治疗；CIK细胞治疗；CTL细胞治疗；NK细胞治疗；DC-CIK细胞治疗；DC-CTL细胞治疗。 2、设备投入： 乙方根据以上开展项目对设备平台的需要，投入设备仪器；所有设备按院内设备管理办法统一管理；合作期结束后，全部设备归甲方所有。 3、国内外专家团队：乙方根据中心业务发展需要定期组织、聘请国内、外知名专家来院指导中心的科研与临床工作，并进行相关的学术交流。 4、中心所需人员：包括实验室人员和市场推广人员。 5、负责市场策划、宣传与推广。 6、中心日常运营所需要的各项支出，包括：中心聘用人员工资、设备耗材、宣传推广费用、水、电费。 七、双方义务： （一）、甲方义务： 1、提供中心医疗、行政、营销所需的场地和用房，并将现有可投入项目使用的设备纳入中心统一使用和管理。 2、合理配备中心医务人员。 3、为中心开展各项工作提供必需的支持，包括但不限于行业管理、行政管理、社会资源、新闻宣传、物价收费等，并保证在合同约定周期内为乙方进行结算。 4、与乙方共同处理中心在开展生物治疗过程中的医疗纠纷。 （二）乙方义务： 1、依据本协议按时投入技术和设备。 2、在服从甲方相关管理规定的基础上开展中心的医疗与科研工作。 3、在合作期内，所开展技术对甲方开放，并根据需要代培甲方人员。 4、负责市场推广和媒体公关工作。 5、与甲方共同处理中心在开展生物治疗过程中的医疗纠纷。 八、利益分配 （一）、收入分配： 合作期内，中心所开展项目由甲方统一收费。 治疗病人数≤400例，中心总收入的35%归甲方所有，总收入的65%归乙方所有； 400例＜治疗病人数≤600例，中心总收入的30%归甲方所有，总收入的70%归乙方所有； 600例＜治疗病人数≤800例，中心总收入的23%归甲方所有，总收入的77%归乙方所有； 800例＜治疗病人数≤1000例，中心总收入的18%归甲方所有，总收入的82%归乙方所有； 当治疗病人数超过1000例时，中心总收入的15%归甲方所有，总收入的85%归乙方所有。 （二）收入结算： 病人缴费至甲方，甲方按照月度和年度分阶段根据上述分配原则将应付款项支付给乙方。具体为：每月5日以前将上月中心总收入的75%存入乙方指定账户；第二年的前10个工作日以内甲乙双方根据年度结算结果将应支付的差额部分存入对方账户。例如每月完成50例，以每例2万元计算，则每月总收入100万元，甲方在前11个月内每月5号前将75万元（100万的75%）存入乙方账户，年度总计完成600例，根据收入分配协议，乙方应得840万元（1200万×70%），因此在第二年的前10个工作日以内，甲方只需要再支付乙方15万元（840万-75万/月×11月），即完成全年的利益分配。 （三）科研成果： 基于合作项目所发表文章，甲方为通讯作者。 九、项目管理 “中心”在甲方的医政管理和行政管理的各项制度约束下运行；中心日常工作由乙方负责，甲方委派中心医疗副主任1名，负责协助和监督中心工作，有权对中心的管理及运行工作提出建议。在法律法规允许的范围内，甲方应充分尊重和采纳乙方的意见，并积极帮助乙方开展工作。 十、违约责任： 本协议中甲方双方都必须严格遵守协议内容，违反或不履行协议内容均视为违约。如因任意一方违约而导致中心无法正常开展工作或项目不行运行的，则守约方有权终止合同，并依据《合同法》向违约方提出该方投资总额的双倍赔偿，违约方同时承担各项法律责任。 十一、相关约定： 1、在本协议的合作期内，甲乙双方的合作具有排他性，都不得在成都市范围内开展同类项目的合作。 2、合作期内，乙方在中心所开展的技术，不得对甲方进行技术保密。 3、合作期内，中心的所有设备使用权归双方所有，由中心单独使用。合作期满后，归甲方所有。 4、中心所需设备、耗材、试剂等各项用品，由乙方独立采购，但需符合国家和省市的标准要求。 5、合作期内，未经对方书面同意，任何一方均不得擅自转让本方在协议项下的全部或部分权益；如需转让，则另一方在同样条件下享有优先权。 6、合作期内，如遇到战争、重大自然灾害、国家法律变更等不可抗拒力，而导致中心无法继续运行；或因未能达到双方预期目标和要求，需要终止合作时，经双方协商同意后，可终止本协议，并按“谁投入、谁拥有的原则”进行清算、分割资产。 7、协议的修改、变更、解除，必须经双方书面同意后方可生效；在合作期内，甲乙双方都不能以本协议第十一条（6）点以外的原因解除本协议，否则视为违约并承担协议约定的责任。 8、合作双方因履行本协议过程中发生的争议，应通过协商解决；协商无效，则由四川省仲裁委员会裁决。 9、本协议的未尽事宜，由双方共同协商后再行签订补充协议。补充协议及附件与本协议具有同等法律效力。 10、本协议由甲乙双方代表签字并加盖公章后正式生效。 本协议一式肆份，双方各持两份，具有同等法律效力。 本协议包含附件《乙方投入设备仪器明细表》。 甲方：四川省肿瘤医院 乙方： 代表： 代表： 签署地点： 签署时间： 3、 项目介绍 1．目的和意义 据美国癌症协会2007 年的统计，癌症在全球范围内每年约760 万人死亡，占总死亡人数的13%，现行的三大常规治疗手段（手术、化疗和放疗）仍然存在一定的局限性，虽然能缓解症状，但常规的放化疗会损伤患者的免疫功能和造血功能，带来严重的毒副作用，也难以有效地防止肿瘤的复发和转移。单抗药物虽然特异性高，但目前还只能治疗部分肿瘤（如特定类型的大肠癌、淋巴癌和急性白血病等）。目前，随着现代细胞学、免疫学、肿瘤学等方面的研究发展，使研究者们越来越意识到免疫系统在抗击肿瘤中的重要性，利用患者自身免疫系统激发针对肿瘤的特异性免疫或回输具有抗肿瘤活性的免疫细胞是一种有效防止肿瘤复发和转移的有效手段，且无毒副作用，能巩固三大常规治疗手段的治疗效果。因此诸多医院都纷纷开展自体细胞免疫治疗技术，如树突状细胞（Dendritic Cell, DC）疫苗、细胞因子诱导的杀伤（Cytokine Induced Killer, CIK）细胞、DC-CIK细胞等。 2. 实施方案 SHAPE \* MERGEFORMAT 3、 本项目的基本情况 3.1. 国内外应用情况 自体免疫细胞治疗技术是指从自体外周血中分离的单个核细胞经过体外激活和扩增后输入患者体内，直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞，或调节和增强机体的免疫功能。该技术能制备出两大类不同特点的细胞：第一类细胞为能在患者体内激发抗肿瘤活性的细胞，如DC疫苗；第二类细胞为具有内在抗肿瘤活性的细胞[1]，如CIK细胞、DC-CIK细胞等。 3.1.1 DC概述 目前全球的DC抗肿瘤疫苗的临床研究主要集中于欧美，从1996年至今，开展的临床研究项数大体呈现逐步增长的态势，尤其以2003年后最为明显。所开展的临床研究在大多数常见肿瘤上均有些研究，但主要集中于前列腺癌、黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、大肠癌、肾癌、肺癌、神经系统肿瘤以及血液系统肿瘤。 从临床研究的分期来看，目前的临床研究绝大部分处于Ⅰ期（51%）和Ⅱ期（47%），处于Ⅲ期的临床研究仅为4项。其中尤以Dendreon公司的工作最为引人瞩目，4项III期临床研究中的3项由Dendreon实施，其中2项处于进行中，1项已经完成（见附件三、四），其研究结果已经在《新英格兰医学杂志》上发表，结果表明：与安慰剂组相比，sipuleucel-T组死亡风险相对下降22%(危险比 0.78；95%置信区间 0.61到0.98；P=0.03)，这种减少表现为中位生存期提高了4.1个月（sipuleucel-T组 25.8个月 vs.安慰机组 21.7个月）。sipuleucel-T组和安慰机组36个月的生存概率分别为31.7%和23.0%[4]。也正是基于这项Ⅲ期临床研究的研究结果，于2010年4月29日通过FDA的上市批准，成为全球获得FDA批准的首支治疗性肿瘤疫苗[3]。在这之前，在韩国和巴西已有DC疫苗被批准上市，其商品名分别为CreaVaxRCC（用于转移性肾细胞癌的治疗）和Hybricell（用于各种肿瘤的治疗）[5]。在我国，由第二军医大学曹雪涛院士和上海海欣生物技术有限公司研制的针对大肠癌的抗原致敏的人树突状细胞（APDC）疫苗是我国第一个也是唯一被国家食品药品监督管理局（SFDA）批准进入临床研究的树突状细胞项目（批号：2002SL0016），它是“863”项目成果的产业化项目，“863”十五重大专项课题，并于2005年获得了国家发明专利（ZL02136518.0）。自2003年11月到2004年3月在第二军医大学长海医院实施并完成了I期临床研究，结果证实APDC具有良好的安全性，没有发现严重的毒副作用，并可以诱导机体产生特异性的免疫应答，对肿瘤的治疗具有非常重要的意义。2004年10月经SFDA批准正式进入Ⅱ期临床研究阶段，Ⅱ期研究结果显现出了良好的安全性与临床疗效，目前正在进行Ⅲ期临床研究。今年5月份“树突状细胞治疗”被列入“十二五”实施计划中的“重大新药创制”科技重大专项项目[6]。 3.1.2.CIK细胞概述 我们在Clinicaltrials.gov中以关键词“Cytokine induced Killer”进行检索（截止于2010年10月31日），检索结果为10项临床研究（具体见附件五），北美3项、欧洲2项、东亚2项和东南亚3项。在上述检索结果10项临床研究中，关于CIK细胞的临床研究有8项，另外1项是关于自然杀伤（Natural Killer, NK）细胞，还有1项关于1种交联2种T细胞抗体和杀细胞毒素的药物用于急性移植体对抗宿主疾病（Acute Graft Versus Host Disease）治疗（该研究因为试验药物的无效性在招募前被撤销）等方面的研究。 目前全球的CIK细胞的临床研究集中于血液系统肿瘤（如白血病和骨髓瘤）、肾细胞癌以及肝癌。从临床研究的分期来看，目前的临床研究处于Ⅲ期的临床研究仅为1项，由中山大学肿瘤防治中心2008年发起。另外，由天津医科大学附属肿瘤医院郝希山院士研制的CIK细胞制品已经成为我国第一个获得SFDA批准，进入临床研究的治疗实体瘤的Ⅰ类新药（批号：2005L01023）。 基于Pubmed的检索结果显示，共有11项CIK细胞的临床研究（有些临床研究未在Clinicaltrials.gov中注册），接受治疗的患者总数为426人，其中男性313人，女性113人。其中有10项临床试验中采用了自体CIK细胞，输注的CIK细胞的总数范围为21.9×107至5.2×1010，每次回输的CIK细胞的剂量范围为7.2×106至2.1×1010，患者回输的最高次数为40次。在384例患者中，有24例显示完全缓解，27例显示部分缓解，40例显示轻微缓解，总反应率为23.7%（91/384），161例患者疾病稳定，129例疾病进展，只有3例患者的肿瘤体积减小。CIK细胞治疗的毒副作用较轻微，有意思的是，接受CIK细胞治疗的乙肝患者的病毒载量会降低。与不接受CIK细胞治疗组相比，接受CIK细胞治疗组的患者的无病生存率显著增加。分析结果表明：CIK细胞巩固性治疗有助于防止肿瘤复发、改善患者生活质量和提高无进展生存率。 3.2. 适应症 实体瘤：乳腺癌、肺癌、黑色素瘤、胃癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、结肠癌、鼻咽癌、膀胱癌等； 血液系统肿瘤：白血病、浆细胞瘤、B细胞淋巴瘤等。 3.3. 禁忌症 3.3.1 年龄小于18岁； 3.3.2 怀孕或哺乳期妇女； 3.3.3 器官功能衰竭者： 1） 心脏：IV级以上； 2） 肝脏：达到国内肝功能分级C级以上； 3） 肾脏：肾功能衰竭及尿毒症期以上； 4） 肺：出现严重的呼吸衰竭症状，并累及到其他脏器，如肝、肾功能； 5） 脑：脑转移并伴意识障碍者。 3.3.4 脏器移植者； 3.3.5 严重自身免疫性疾病患者，并长期或正在使用免疫抑制药物的自身免疫性疾病患者； 3.3.6 不可控制的感染性疾病； 3.3.7 对本治疗中所用的生物试剂过敏者； 3.3.8 无法抽取血液的肿瘤患者； 3.3.9 T细胞肿瘤患者； 3.3.10 精神疾病者； 3.3.11 因患者病情恶化或患者产生无法忍受的副作用。 3.4. 不良反应 少数病例在采集外周血时患者会出现眩晕和细胞输注后有不同程度的发热以及DC注射部位出现轻微的红肿，经对症处理均能在24小时内自行缓解。 3.5. 技术路线 3.5.1 各种细胞制备方法如下： 3.5.1.1 CIK细胞制备： a） 抽取患者外周血100ml（或血细胞分离机采集40~50ml），转入50ml离心管，离心1800r/min，8min，吸弃血浆； b） 预先将淋巴细胞分离液Ficoll加入50ml无菌离心管中，20ml/管； c) 吸弃血浆后的标本中加生理盐水至原始体积，混匀，按照1.5：1的比例，缓慢加在Ficoll 液面上（方法：将离心管倾斜45°，在Ficoll液面上1cm处，缓慢注入稀释的血细胞，不要打乱液面界面）， 进行密度梯度离心，离心条件：2000r/min，20min，室温(注意调整离心机加速和减速过程为最低）； d） 收集单个核细胞，每管加生理盐水至50ml，轻轻吹匀细胞，离心洗涤3次，除去血小板和分离介质（室温1600r/min，5min，1次；1200r/min，10min，1次；1000r/min，10min，1次）。弃去上清，用X-VIVO培养液重悬计数； e） 调整细胞浓度为1~2(106/ml铺入提前包被好的T225细胞培养瓶中（瓶中包被的为CIK试剂-A），每瓶50ml，1个细胞培养瓶，置于37℃、7.5%CO2培养箱中培养； f） 第4天瓶中补加X-VIVO培养液50ml，同时加入CIK-试剂B（1(l/ml） 置于37℃、7.5%CO2培养箱中继续培养； g） 第6天瓶中补加X-VIVO培养液140ml，同时加入CIK-试剂B（1(l/ml） 置于37℃、7.5%CO2培养箱中继续培养； h） 第7天将培养瓶中的细胞转入培养袋中，补加X-VIVO培养液至1000ml，并加入CIK-试剂B（1(l/ml） 置于37℃、7.5%CO2培养箱中继续培养； i） 13或14天抽样计活细胞和死细胞数，离心收集细胞，用生理盐水洗涤CIK细胞3次。 弃上清，重悬到100ml生理盐水中，并取1g人血白蛋白注入到细胞悬液中混匀； j） 取样做质量检控。同时用刻度吸管抽样1ml细胞悬液于安瓿瓶中，封口做标识，-4℃存放3个月备查； k） 每次合格的CIK细胞数量不少于2(109/次，悬液封好后，核对病人姓名、性别、年龄、住院号、细胞数、无菌结果、病区及治疗项目，确保无误，贴上标签，填好详细实验记录并签名后，送病区进行回输。 3.5.1.2 DC疫苗制备： a） 用血细胞分离机采集患者自体外周血50~86ml，转入50ml离心管，离心1800r/min，8min，吸弃血浆； b） 预先将淋巴细胞分离液Ficoll加入50ml无菌离心管中，20ml/管； c） 吸弃血浆后的标本中加生理盐水至原始体积，混匀，按照1.5：1的比例，缓慢加在Ficoll 液面上（方法：将离心管倾斜45°，在Ficoll液面上1cm处，缓慢注入稀释的血细胞，不要打乱液面界面），进行密度梯度离心，离心条件：2000r/min，20min，室温（注意调整离心机加速和减速过程为最低）； d） 收集单个核细胞，每管加生理盐水至50ml，轻轻吹匀细胞，离心洗涤3次，除去血小板和分离介质（室温1600r/min，5min，1次；1200r/min，10min，1次；1000r/min，10min，1次）。弃去上清，用X-VIVO培养液重悬计数； e） 调整细胞浓度为5(106/ml铺入T75细胞培养瓶中，每瓶15ml，置于37℃、5%CO2培养箱中培养； f） 孵育30min后，用X-VIVO培养液洗瓶2次，加入DC培养液（X-VIVO培养液，同时加入DC试剂-A（1(l/ml）、DC试剂-B（3(l/ml））15ml/瓶，置于37℃、5%CO2培养箱中培养； g） 第3天补加DC培养液5ml/瓶； h） 第5天补加DC培养液5ml/瓶； i） 第6天加入1mlDC试剂-C液和DC试剂-D（1(l/ml），置于37℃、5%CO2培养箱中培养； j） 第7天收集DC，用生理盐水洗涤DC 3次，将收获的DC均分成4份，取一份用于当日的患者输注，同时取样进行质量检控； k） 剩余DC细胞冻存于-86℃冰箱中，分别在第9天、第11天、第13天复苏后输注给患者； l） 合格的DC为不少于1(107细胞/次，悬液封好，核对病人姓名、性别、年龄、住院号、细胞数、无菌结果、病区及治疗项目，确保无误，贴上标签，填好详细实验记录并签名后，送病区进行输注。 3.5.1.3 DC-CIK细胞制备： a） 收集上述培养7天的DC，按一定比例分配到CIK细胞中，置于37°、5%CO2培养箱中继续培养； b） 第9或10天，观察细胞生长状态，并计数。根